第04章定量分析樣品前處理

1、第四章第四章 藥物定量分析與分析方藥物定量分析與分析方法驗證法驗證第一節(jié)第一節(jié) 定量分析樣品的前處理方法定量分析樣品的前處理方法一、含鹵素有機藥物的分析一、含鹵素有機藥物的分析 含鹵素有機藥物系指藥物分子結(jié)含鹵素有機藥物系指藥物分子結(jié)構(gòu)中所含鹵素直接與芳環(huán)或脂肪鏈相構(gòu)中所含鹵素直接與芳環(huán)或脂肪鏈相連者，而不包括某些有機藥物的鹵酸連者，而不包括某些有機藥物的鹵酸鹽或氫鹵酸鹽鹽或氫鹵酸鹽結(jié)構(gòu)特點：結(jié)構(gòu)特點：CX（一）鹵原子的活潑性（一）鹵原子的活潑性1. 1. 鹵原子與碳原子直接相連，鹵原鹵原子與碳原子直接相連，鹵原子的活潑性和它直接相連的烴基的結(jié)子的活潑性和它直接相連的烴基的結(jié)構(gòu)有很大關(guān)系構(gòu)有很

2、大關(guān)系（1）乙烯型鹵和芳鹵）乙烯型鹵和芳鹵 不活潑不活潑CH2CH XX（2）烯丙型鹵和芐鹵）烯丙型鹵和芐鹵 活潑活潑CH2XCH2CH CH2X（3）鹵代烷型）鹵代烷型 介于兩者之間介于兩者之間CH2CH (CH2)nX n22. 分子中所含鹵原子的個數(shù)分子中所含鹵原子的個數(shù) 分子中所含鹵原子的個數(shù)越多，分子中所含鹵原子的個數(shù)越多，活潑性越強，特別是同一碳上含多個活潑性越強，特別是同一碳上含多個鹵原子或一個苯環(huán)上含多個鹵原子時，鹵原子或一個苯環(huán)上含多個鹵原子時，活潑性增強更加明顯活潑性增強更加明顯3. 鹵素的種類鹵素的種類IBrClF常見的含鹵素有機藥物常見的含鹵素有機藥物CCH3OHCH3

3、CCl3CCl3Cl3C三氯叔丁醇三氯叔丁醇六氯對二甲苯六氯對二甲苯COOHIIINHCOCH3CH3CONH泛影酸泛影酸COOHIIINH C(CH2)4OC NHOCOOHIII膽影酸膽影酸COOHIIICONHCH3CH3CONH碘他拉酸碘他拉酸IH2NIICH2CHCOOHC2H5碘番酸碘番酸碘苯酯碘苯酯CHCH3(CH2)8COOCH2CH3I鹽酸胺碘酮鹽酸胺碘酮OCH2CH2CH2CH3COOCH2CH2N(C2H5)2IIHClHNNFNC2H5OCOOH諾氟沙星諾氟沙星OFFCH3HHOHCH3CCH2OCOCH3OOOCCH3CH3醋酸氟輕松醋酸氟輕松BrBrBrBrCCOO

4、HOSO3NaSO3NaOH磺溴酞鈉磺溴酞鈉（二）含鹵素有機藥物的分析（二）含鹵素有機藥物的分析XXC適當?shù)奶幚碇苯踊亓骱鬁y定法直接回流后測定法堿性或酸性還原后測定法堿性或酸性還原后測定法氧瓶燃燒分解后測定法氧瓶燃燒分解后測定法1. 直接回流后測定法直接回流后測定法 本法是將含鹵素有機藥物溶于適當本法是將含鹵素有機藥物溶于適當溶劑（如乙醇）中，加入氫氧化鈉溶溶劑（如乙醇）中，加入氫氧化鈉溶液（或一定量過量的硝酸銀滴定液）液（或一定量過量的硝酸銀滴定液）后，加熱回流使其水解，將有機結(jié)合后，加熱回流使其水解，將有機結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機的鹵素離子，然后的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機的鹵素離子，然后采用銀量法（采用

5、銀量法（Volhard法）測定。法）測定。 本法適用于含鹵素有機藥物結(jié)構(gòu)本法適用于含鹵素有機藥物結(jié)構(gòu)中鹵素原子結(jié)合不牢固的藥物（如鹵中鹵素原子結(jié)合不牢固的藥物（如鹵原子和脂肪碳原子相連者）。原子和脂肪碳原子相連者）。 原理原理 三氯叔丁醇在氫氧化鈉溶液中三氯叔丁醇在氫氧化鈉溶液中加熱回流水解，氯元素全部轉(zhuǎn)變成氯加熱回流水解，氯元素全部轉(zhuǎn)變成氯化鈉，然后用化鈉，然后用剩余剩余滴定法，即于水解滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量液中加硝酸酸化，再加入定量過量過量的的硝酸銀滴定液，使硝酸銀滴定液，使Cl-生成生成AgCl沉淀，沉淀，過量的硝酸銀，以過量的硝酸銀，以Fe3+為指示劑，用為指示劑，

6、用硫氰酸銨液硫氰酸銨液回滴回滴定。定。 例三氯叔丁醇的測定例三氯叔丁醇的測定 ChP（2000）CCl3 C(CH3)2 OH + 4NaOH 回流回流(CH3)2 CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3（淡棕紅色）（淡棕紅色）(Ksp=1.561010 )(Ksp=1.010 12 )Fe3+ + SCN Fe (SCN) 2+ 測定方法測定方法 取本品約取本品約0.1g，精密稱定，精密稱定，加加乙醇乙醇5ml溶解后，加溶解后，加20%氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液5ml，加熱

7、回流加熱回流15min，放冷至室溫，加水放冷至室溫，加水20ml與與硝酸硝酸5ml，精密加硝酸銀滴定液，精密加硝酸銀滴定液(0.1mol/L) 30ml，再加，再加鄰苯二甲酸二丁酯鄰苯二甲酸二丁酯5ml，密塞，密塞，強力振搖后，加硫酸鐵胺指示液強力振搖后，加硫酸鐵胺指示液2ml，用硫，用硫氰酸胺滴定液氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每結(jié)果用空白試驗校正。每1ml硝酸銀滴定液硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當于相當于6.216mg的的C4H7Cl3O1/2H2O。反應摩爾比為1 3mlmg216. 6Lg216. 63molg47.186Lm

8、ol1 . 0ncMTT滴定度，每1ml滴定液相當于被測組分的mg數(shù)c滴定液濃度，mol/LM被測物的摩爾質(zhì)量，g/moln1mol樣品消耗滴定液的摩爾數(shù)，常用反應摩爾比體現(xiàn)，即反應摩爾比為1 n 2. 堿性或酸性還原后測定法堿性或酸性還原后測定法 本法是將含鹵素有機藥物在堿性或本法是將含鹵素有機藥物在堿性或酸性下，加還原劑（如鋅粉）加熱回酸性下，加還原劑（如鋅粉）加熱回流，藥物產(chǎn)生還原裂解反應，使有機流，藥物產(chǎn)生還原裂解反應，使有機結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機的鹵素離子，結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機的鹵素離子，然后采用銀量法（然后采用銀量法（Fajans法）測定。法）測定。 本法適用于測定結(jié)構(gòu)中碘與苯環(huán)本法

9、適用于測定結(jié)構(gòu)中碘與苯環(huán)直接相連，且一個苯環(huán)上含多個碘原直接相連，且一個苯環(huán)上含多個碘原子的含鹵素有機藥物。子的含鹵素有機藥物。 （1） 堿性還原后測定法堿性還原后測定法例例 泛影酸的測定泛影酸的測定 ChP (2000) 取本品約取本品約0.4g，精密稱定，精密稱定，加氫氧化鈉溶加氫氧化鈉溶液液30ml與鋅粉與鋅粉1.0g，加熱回流，加熱回流30min，放冷，放冷，冷凝管用少量水洗滌，濾過，燒瓶與濾器用水冷凝管用少量水洗滌，濾過，燒瓶與濾器用水洗滌洗滌3次，每次次，每次15ml，洗液與濾液合并，加冰，洗液與濾液合并，加冰醋酸醋酸5ml與曙紅鈉指示液與曙紅鈉指示液5滴，用硝酸銀滴定液滴，用硝酸

10、銀滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硝酸銀滴定液硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當于相當于20.46mg的的C11H9 I 3N2O4。COOHINHCOCH3IIH3COCHN+ 11NaOH + Zn回流回流COONaN H2 H2N+ 3NaI + 2CH3COONa+ 2Na2ZnO2 + H2O USP (24)、BP（1998） ChP(2000)收載的膽影酸、碘番收載的膽影酸、碘番酸、膽影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸酸、膽影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸等均采用同法測定。等均采用同法測定。 （2）酸性還原后測定法酸性還原后測定法 取本品的干燥品約取本品的干燥品約0.4g，精

11、密稱定，精密稱定，加鋅加鋅粉粉1g及冰醋酸及冰醋酸10ml，加熱回流，加熱回流30min，放冷，放冷，冷凝管用水冷凝管用水30ml洗滌，用脫脂棉過濾，燒瓶與洗滌，用脫脂棉過濾，燒瓶與脫脂棉用水洗滌脫脂棉用水洗滌2次，每次次，每次20ml，洗液與濾液，洗液與濾液合并，加四溴酚酞乙酯指示液合并，加四溴酚酞乙酯指示液1ml ，用硝酸銀，用硝酸銀滴定液滴定液(0.1mol/L)滴定。終點時黃色沉淀變?yōu)榫G滴定。終點時黃色沉淀變?yōu)榫G色。每色。每1ml硝酸銀滴定液硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當于相當于19.031mg的的C11H12 I 3NO2。例例 碘番酸的測定碘番酸的測定 JP (13)3. 氧

12、瓶燃燒分解后測定法氧瓶燃燒分解后測定法 （1）原理）原理 氧瓶燃燒法：氧瓶燃燒法：將有機藥物放入將有機藥物放入充滿氧充滿氧氣氣的的密閉密閉燃燒瓶中進行燃燒瓶中進行燃燒燃燒，并將燃燒所，并將燃燒所產(chǎn)生的欲測物質(zhì)產(chǎn)生的欲測物質(zhì)吸收吸收于適當?shù)奈找褐?，于適當?shù)奈找褐?，然后根?jù)欲測物質(zhì)的性質(zhì)，采用適宜的分然后根據(jù)欲測物質(zhì)的性質(zhì)，采用適宜的分析方法進行鑒別、檢查或含量測定析方法進行鑒別、檢查或含量測定NaClHClOClCNaOH2 溶液點燃 適用于含鹵素、硫、氮、硒等適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機藥物的分析有機藥物的分析 本法特點是簡便、快速、破壞完本法特點是簡便、快速、破壞完全，尤其適用于微量樣

13、品的分析全，尤其適用于微量樣品的分析 （ 2） 儀器與材料儀器與材料 儀器裝置儀器裝置 燃燒瓶為燃燒瓶為500、1000或或2000ml無色、磨口、厚壁、無色、磨口、厚壁、硬質(zhì)玻璃錐型瓶；瓶塞硬質(zhì)玻璃錐型瓶；瓶塞空空心，底部熔封鉑絲一根，心，底部熔封鉑絲一根，下端呈螺旋狀或網(wǎng)狀下端呈螺旋狀或網(wǎng)狀稱樣用材料及稱樣稱樣用材料及稱樣 A. 固體樣品固體樣品 無灰濾紙無灰濾紙 B. 液體樣品液體樣品 紙袋紙袋 C. 軟膏類樣品：將適量樣品置不含軟膏類樣品：將適量樣品置不含被測成分的蠟油紙中包裹嚴密，外層被測成分的蠟油紙中包裹嚴密，外層再用無灰濾紙包裹再用無灰濾紙包裹吸收液吸收液 A. 作用：吸收液的作

14、用是將樣品經(jīng)作用：吸收液的作用是將樣品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價態(tài)的鹵素、燃燒分解所產(chǎn)生的各種價態(tài)的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)榱颉⒌⑽?，定量地吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y定的價態(tài)一定的便于測定的價態(tài)氧氣氧氣B. 吸收液的選擇吸收液的選擇氟氟 水水 氯氯 NaOH溶液溶液溴溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼飽和溶液硫酸肼飽和溶液碘碘 NaOH硫酸肼飽和溶液硫酸肼飽和溶液硫硫 NaOH或或H2O2 硒硒 硝酸溶液硝酸溶液（3）操作方法）操作方法燃燒瓶燃燒前的準備燃燒瓶燃燒前的準備 用洗液洗凈后，按各藥品項下的規(guī)定加用洗液洗凈后，按各藥品項下的規(guī)定加入吸收液，將瓶口用水濕潤，小心急速

15、地入吸收液，將瓶口用水濕潤，小心急速地通入氧氣通入氧氣1min，立即用表面皿覆蓋瓶口。，立即用表面皿覆蓋瓶口。樣品的準備樣品的準備 取樣品適量，精密稱定后按規(guī)定方法取樣品適量，精密稱定后按規(guī)定方法包裹，固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。包裹，固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。樣品的燃燒樣品的燃燒 點燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放點燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，燃燒完畢（應無黑色碎片），充分振口，燃燒完畢（應無黑色碎片），充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中，放搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中，放置置15min，用水少量沖洗瓶

16、塞及鉑絲，合，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，合并洗液及吸收液，同法另做空白試驗。然并洗液及吸收液，同法另做空白試驗。然后按各藥品項下規(guī)定的方法進行鑒別、檢后按各藥品項下規(guī)定的方法進行鑒別、檢查或含量測定。查或含量測定。 待分解樣品量待分解樣品量 燃燒瓶的體積燃燒瓶的體積 35mg（微量分析）（微量分析） 150250ml 2030mg（半微量分析）（半微量分析） 300500ml 5060mg 1000ml 0.60.7g或更多或更多 2000ml或特殊結(jié)或特殊結(jié)構(gòu)的燃燒瓶構(gòu)的燃燒瓶例例 磺溴酞鈉的含量測定磺溴酞鈉的含量測定 ChP (2000)BrBrBrBrCCOOHOSO3NaSO3NaOHB

17、rBrBrBrOSOHHOSONaOOONaOOO燃燒分解燃燒分解O2HBr + S2- + SO4 + HBr + S2- NaBr + Na2SO4 + H2O NaOH, H2O2溴溴 取本品約取本品約0.2g，照氧瓶燃燒法（附錄，照氧瓶燃燒法（附錄 C）進行有機破壞，選用）進行有機破壞，選用1000ml燃燒瓶，以燃燒瓶，以0.4%氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液10ml，濃過氧化氫溶液，濃過氧化氫溶液0.5ml與水與水10ml作為吸收液，俟生成的煙霧完作為吸收液，俟生成的煙霧完全吸入吸收液后，用水稀釋至全吸入吸收液后，用水稀釋至100ml，煮沸，煮沸5分鐘，放冷，加稀硝酸使成酸性，精密加硝分鐘

18、，放冷，加稀硝酸使成酸性，精密加硝酸銀滴定液（酸銀滴定液（0.1mol/l）20ml，搖勻，再加硫，搖勻，再加硫酸鐵胺指示液酸鐵胺指示液2mL，用硫氰酸胺滴定液，用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每校正。每1mL硝酸銀滴定液硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當于相當于7.990mg的溴的溴(Br)。例例 碘苯酯的含量測定碘苯酯的含量測定 ChP（2000）原理原理 碘苯酯系有機碘化物，用氧瓶燃燒分碘苯酯系有機碘化物，用氧瓶燃燒分解，轉(zhuǎn)變?yōu)榈饣铮^而氧化為游離的碘，解，轉(zhuǎn)變?yōu)榈饣?，繼而氧化為游離的碘，并被定量地吸收于吸收液中

19、，和氫氧化鈉反并被定量地吸收于吸收液中，和氫氧化鈉反應，生成碘化物與碘酸鹽，加入溴應，生成碘化物與碘酸鹽，加入溴- -醋酸溶醋酸溶液，使全部轉(zhuǎn)變?yōu)榈馑猁}，過量的溴以甲酸液，使全部轉(zhuǎn)變?yōu)榈馑猁}，過量的溴以甲酸及通空氣去除。加入碘化鉀，使與碘酸鹽反及通空氣去除。加入碘化鉀，使與碘酸鹽反應析出游離碘，用硫代硫酸鈉液滴定，碘與應析出游離碘，用硫代硫酸鈉液滴定，碘與淀粉結(jié)合所顯的藍色消失即為終點淀粉結(jié)合所顯的藍色消失即為終點 取本品約取本品約20mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法，精密稱定，照氧瓶燃燒法進行有機破壞，用氫氧化鈉試液進行有機破壞，用氫氧化鈉試液2ml與水與水l0ml為為吸收液，待吸收完全后，加溴

20、醋酸溶液吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液(取醋酸鉀取醋酸鉀10g，加冰醋酸適量使溶解，加溴，加冰醋酸適量使溶解，加溴0.4ml，再加冰，再加冰醋酸使成醋酸使成1000m1)l0ml，密塞，振搖，放置數(shù)分，密塞，振搖，放置數(shù)分鐘，加甲酸約鐘，加甲酸約lml，用水洗滌瓶口，并通入空氣流，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約約35min以除去剩余的溴蒸氣，加碘化鉀以除去剩余的溴蒸氣，加碘化鉀2g，密塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液密塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液(0.02Mol/L)滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校滴定至藍色消失，

21、并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液的硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L)相當于相當于1.388mg的的C19H29IO2。 滴定度的計算滴定度的計算 放大反應放大反應2mol碘苯酯碘苯酯1molI21molI21molNaIO+1molNaI1molNaIO1/3molNaIO3+2/3molNaI321molNaI+Br2321molNaIO3即即2mol碘苯酯碘苯酯2molNaIO32mol NaIO3+10I 6molI2即即2mol碘苯酯碘苯酯1molI2 6molI212molI12molNa2S2O3反應摩爾比為反應摩爾比為1 6mlmgncMT/38

22、8. 1634.41602. 098：140. 氧瓶燃燒法中的裝置有A. 磨口硬質(zhì)玻璃錐形瓶B. 磨口軟質(zhì)玻璃錐形瓶C. 鉑絲D. 鐵絲E. 鋁絲96：133（99x：138）選擇氧瓶燃燒法所必備的實驗物品A. 磨口硬質(zhì)玻璃錐形瓶B. 鉑絲C. 普通濾紙D. 氫氣 E. 無灰濾紙99：76氧瓶燃燒法測定含氯有機藥物時所用的吸收液多數(shù)為A. H2O2溶液B. H2O2NaOH溶液C. NaOH溶液D硫酸肼飽和液E. NaOH硫酸肼飽和液99：134. 氧瓶燃燒法可用于A. 含鹵素有機藥物的含量測定B. 醚類藥物的含量測定C. 檢查甾體激素類藥物中的氟D. 檢查甾體激素類藥物中的硒E. 芳酸類藥物

23、的含量測定二、含金屬有機藥物的分析二、含金屬有機藥物的分析 含金屬的有機藥物：含金屬的有機藥物：金屬原子不與碳金屬原子不與碳原子直接相連，通常為有機酸及酚的原子直接相連，通常為有機酸及酚的金屬鹽或配位化合物金屬鹽或配位化合物 如如酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、富馬酸亞鐵富馬酸亞鐵 有機金屬藥物有機金屬藥物：金屬原子直接與碳：金屬原子直接與碳原子以共價鍵相連，結(jié)合比較牢固原子以共價鍵相連，結(jié)合比較牢固 如如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利CCHOCHOOOCOOSbSbOOCOOOCHOCHC2K+ 3H2O酒石酸銻鉀酒石酸銻鉀CCHCCOOOFeOMg(C

24、17H35COO)2硬脂酸鎂硬脂酸鎂富馬酸亞鐵富馬酸亞鐵CH2OHCHOHCHOCHOCHOCOO-SbOHOSbO-OCHCHCHCCHOOCH2-OOHOHONa39H2O葡萄糖酸銻鈉葡萄糖酸銻鈉NHCONH2AsOOHHO卡巴胂卡巴胂HgOCOCH3醋酸苯汞醋酸苯汞OCH2COONaCONHCH2CHCH2HgOHOCH3汞撒利汞撒利含金屬有機藥物定量分析前的含金屬有機藥物定量分析前的處理方法處理方法 不經(jīng)有機破壞的分析方法不經(jīng)有機破壞的分析方法 直接測定法直接測定法; ;經(jīng)水解后測定法經(jīng)水解后測定法; ;經(jīng)還原經(jīng)還原- -汞齊化后測定法汞齊化后測定法 經(jīng)有機破壞的分析方法經(jīng)有機破壞的分

25、析方法 濕法破壞濕法破壞( (硝酸硝酸- -高氯酸法高氯酸法; ;硝酸硝酸- -硫酸硫酸法法; ;硫酸硫酸- -硫酸鹽法等硫酸鹽法等););干法破壞干法破壞（一）不經(jīng)有機破壞的分析方法（一）不經(jīng)有機破壞的分析方法1. 直接測定法直接測定法 適用于金屬原子不直接與碳原子適用于金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬有機藥物或某些相連的含金屬有機藥物或某些CM鍵鍵結(jié)合不牢固的有機金屬藥物。結(jié)合不牢固的有機金屬藥物。富馬酸亞鐵的含量測定富馬酸亞鐵的含量測定 ChP (2000) 取本品約取本品約0.3g，精密稱定，精密稱定，加稀硫酸加稀硫酸 15ml，加熱溶解后，加熱溶解后，放冷，加新沸過的放冷，加新沸過

26、的冷水冷水50ml與鄰二氮菲指示液與鄰二氮菲指示液2 滴，立即用滴，立即用硫酸鈰滴定液硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml硫酸鈰滴硫酸鈰滴定液定液(0.1mol/L)相當于相當于16.99mg 。C4H2FeO4原理原理Fe2+ + Ce4+ Ce3+ + Fe2+ NN3Fe2+ + e NN3Fe3+紅色紅色淺藍色淺藍色OCCHOFeHCCOOOOCCHOHCCO+Fe2+ 例例 葡萄糖酸銻鈉葡萄糖酸銻鈉的的測定測定 ChP（2000） 取本品約取本品約0.3g，精密稱定，置具塞錐，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加水

27、形瓶中，加水100ml、鹽酸、鹽酸15ml與碘化鉀與碘化鉀試液試液10ml，密塞、振搖后，在暗處靜置，密塞、振搖后，在暗處靜置10min，用硫代硫酸鈉滴定液，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試定至藍色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每驗校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液的硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當于相當于6.088mg的的Sb。 K2ISbKI2Sb23H56423222OSNaNaI2OSNa2I如枸櫞酸鐵銨如枸櫞酸鐵銨的的測定測定 ChP（2000） 取本品約

28、取本品約0.5g，精密稱定，置具塞，精密稱定，置具塞錐形瓶中。錐形瓶中。加水加水15ml溶解后，加硫酸溶解后，加硫酸lml，加熱至溶液由暗，加熱至溶液由暗棕色變成淡黃色，放冷至約棕色變成淡黃色，放冷至約15，滴加高錳酸，滴加高錳酸鉀試液至溶液顯粉紅色并持續(xù)鉀試液至溶液顯粉紅色并持續(xù)5s，加鹽酸，加鹽酸15ml與碘化鉀試液與碘化鉀試液15ml，密塞，靜置，密塞，靜置3min，加水，加水50ml稀釋后，用硫代硫酸鈉滴定液稀釋后，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴滴定至近終點時，加淀粉指示液定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續(xù)滴定至，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。藍色消失

29、，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每每lml的硫代硫酸鈉滴定液的硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當于相當于5.585mg的的Fe。 2. 用硫酸水解后測定法用硫酸水解后測定法例例 硬脂酸鎂的測定硬脂酸鎂的測定 ChP（2000） 取本品約取本品約0.1g，精密稱定，精密加硫酸，精密稱定，精密加硫酸滴定液滴定液(0.05mol/L) 50ml，煮沸至油滴澄清，煮沸至油滴澄清，繼續(xù)加熱繼續(xù)加熱10min，放冷至室溫，加甲基橙，放冷至室溫，加甲基橙指示液指示液12滴，用氫氧化鈉滴定液滴，用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硫酸滴定液硫酸滴定液(0.05mol/L)相當于相當

30、于2.016mg的的MgO。原理：原理：Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2 C17 H35COOH2NaOH + H2SO4 Na2SO4 + 2H2O 某些含汞有機藥物，由于某些含汞有機藥物，由于CHg鍵不牢固，在水溶液（冰?。┲械渭渔I不牢固，在水溶液（冰?。┲械渭恿蛩崾蛊渌?，將有機汞定量轉(zhuǎn)化成硫酸使其水解，將有機汞定量轉(zhuǎn)化成硫酸汞，再用硫氰酸銨滴定液滴定。硫酸汞，再用硫氰酸銨滴定液滴定。例例 汞撒利的測定汞撒利的測定 取本品約取本品約0.5g，精密稱定，加蒸餾水，精密稱定，加蒸餾水10ml，置冰浴中，滴加硫酸，置冰浴中，滴加硫酸10ml，隨滴隨，隨滴隨攪拌

31、，至產(chǎn)生的沉淀復溶解，再加蒸餾水攪拌，至產(chǎn)生的沉淀復溶解，再加蒸餾水50ml，硫酸鐵銨指示液，硫酸鐵銨指示液2ml，用硫氰酸銨，用硫氰酸銨滴定液滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硫氰酸銨滴硫氰酸銨滴定液定液(0.1mol/L)相當于相當于25.29mg的汞撒利的汞撒利。3. 經(jīng)還原經(jīng)還原-汞齊化后測定法汞齊化后測定法 本法系在酸性或堿性溶液中，加本法系在酸性或堿性溶液中，加鋅粉、加熱回流，將藥物中有機結(jié)合鋅粉、加熱回流，將藥物中有機結(jié)合的汞還原析出金屬汞，并與過量的鋅的汞還原析出金屬汞，并與過量的鋅生成鋅汞齊。將鋅汞齊溶于硝酸后，生成鋅汞齊。將鋅汞齊溶于硝酸后，選用適當?shù)姆椒y定

32、汞的含量，并換選用適當?shù)姆椒y定汞的含量，并換算成含汞有機藥物的含量。算成含汞有機藥物的含量。 如醋酸苯汞的含量測定如醋酸苯汞的含量測定 取本品約取本品約0.5g，精密稱定，置，精密稱定，置100ml燒瓶中，燒瓶中，加水加水15ml，甲酸，甲酸5ml與鋅粉與鋅粉1g，附回流冷凝器，附回流冷凝器，煮沸煮沸30min。放冷，濾過，濾紙和鋅汞齊用蒸。放冷，濾過，濾紙和鋅汞齊用蒸餾水洗滌至洗液對石蕊試紙不顯酸性反應。將餾水洗滌至洗液對石蕊試紙不顯酸性反應。將鋅汞齊溶解在稀硝酸鋅汞齊溶解在稀硝酸(1 2)40ml中，置蒸氣浴中，置蒸氣浴上加熱上加熱3min，加尿素，加尿素0.5g和足夠的高錳酸鉀試和足夠

33、的高錳酸鉀試液至顯桃紅色。冷卻后，加過氧化氫溶液脫色，液至顯桃紅色。冷卻后，加過氧化氫溶液脫色，加硫酸鐵銨指示劑加硫酸鐵銨指示劑lml，用硫氰酸銨滴定液，用硫氰酸銨滴定液(0.1mol/L)滴定，即得。每滴定，即得。每1ml硫氰酸銨液硫氰酸銨液(0.1mol/1)相當于相當于16.84mg的的C8H8O2Hg。 （二）經(jīng)有機破壞的分析方法（二）經(jīng)有機破壞的分析方法 適用于金屬原子與碳原子結(jié)合牢適用于金屬原子與碳原子結(jié)合牢固的有機金屬藥物。固的有機金屬藥物。1. 濕法破壞濕法破壞 （1 1） 硝酸硝酸- -高氯酸法高氯酸法 本法適用于血、尿、組織等生物樣品本法適用于血、尿、組織等生物樣品的破壞，

34、有機金屬藥物經(jīng)破壞后，得到的的破壞，有機金屬藥物經(jīng)破壞后，得到的無機金屬離子一般呈高價態(tài)。無機金屬離子一般呈高價態(tài)。 本法不能用于含氮雜環(huán)藥物的破壞本法不能用于含氮雜環(huán)藥物的破壞 （2） 硝酸硝酸- -硫酸法硫酸法 本法適用于大多數(shù)有機物質(zhì)的破壞，本法適用于大多數(shù)有機物質(zhì)的破壞，破壞得到的無機金屬離子均為高價態(tài)。破壞得到的無機金屬離子均為高價態(tài)。 本法不能用于含堿土金屬有機藥物的本法不能用于含堿土金屬有機藥物的破壞破壞 （3） 硫酸硫酸- -硫酸鹽法硫酸鹽法 本法是往樣品中加入濃硫酸作氧化劑，本法是往樣品中加入濃硫酸作氧化劑，加入硫酸鹽提高硫酸的沸點，增強硫酸的加入硫酸鹽提高硫酸的沸點，增強硫

35、酸的氧化破壞能力，且防止硫酸的分解損失。氧化破壞能力，且防止硫酸的分解損失。 本法常用于含砷或銻有機藥物的破壞，本法常用于含砷或銻有機藥物的破壞，破壞得到的無機金屬離子多為低價態(tài)。破壞得到的無機金屬離子多為低價態(tài)。 （4） 其它濕法其它濕法 硝酸硝酸硫酸硫酸高氯酸法高氯酸法 硫酸硫酸氧化劑法（過氧化氫法、高錳氧化劑法（過氧化氫法、高錳酸鉀）酸鉀） 破壞后，金屬呈高價態(tài)破壞后，金屬呈高價態(tài)2. 干法破壞干法破壞 適用于濕法不易破壞完全的有適用于濕法不易破壞完全的有機物以及某些不能用硫酸進行破壞機物以及某些不能用硫酸進行破壞的有機藥物。不適用于含易揮發(fā)性的有機藥物。不適用于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷

36、等）有機藥物的破金屬（如汞、砷等）有機藥物的破壞壞注意事項：注意事項：（1）加熱或灼燒時，應控制溫度在）加熱或灼燒時，應控制溫度在420以下以下（2）一定要灰化完全）一定要灰化完全（3）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，但不要輕易棄去易溶解，但不要輕易棄去第二節(jié) 藥品質(zhì)量標準分析方法驗證 一、目的 證明所采用的分析方法適合于相應的檢測要求，方法驗證過程和結(jié)果均應記載在藥品標準起草和修訂說明中。 二、用途（一）藥品質(zhì)量標準起草時，分析方法需經(jīng)驗證。（二）藥物合成方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進行修訂時，分析方法需經(jīng)驗證。三、需驗證的分析項目1. 鑒別試驗；2

37、. 雜質(zhì)定量或限度檢查；3. 原料或制劑中有效成分含量測定；4. 制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測定；5. 溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測試方法。 驗證內(nèi)容有：準確度、精密度驗證內(nèi)容有：準確度、精密度（重復性、中間精密度和重現(xiàn)性）、（重復性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性圍和耐用性四、驗證內(nèi)容 （一）（一） 準確度（準確度（accuracy） 準確度是指用該方法測定的結(jié)果與準確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，用百分回真實值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。收率表示。 測定回收率R（rec

38、overy）的具體方法可采用“回收試驗法”和“加樣回收試驗法”。 回收試驗 空白+已知量A的對照品（或標準品）測定，測定值為M%100AMR 加樣回收試驗 已準確測定藥物含量P的真實樣品+已知量A的對照品（或標準品）測定，測定值為M%100APMR 數(shù)據(jù)要求 規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次。1. 含量測定方法的準確度含量測定方法的準確度 原料藥可原料藥可用已知純度的對照品或樣用已知純度的對照品或樣品進行測定，或用本法所得結(jié)果與已品進行測定，或用本法所得結(jié)果與已建立準確度的另一方法測定的結(jié)果進建立準確度的另一方法測定的結(jié)果進行比較。行比較。 制劑制劑可用含己

39、知量被測物的各組可用含己知量被測物的各組分混合物進行測定，即采用在空白輔分混合物進行測定，即采用在空白輔料中加入原料藥對照品的方法。料中加入原料藥對照品的方法。 如不能得到制劑的全部組分，可向如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進行測定，制劑中加入已知量的被測物進行測定，或與另一個已建立準確度的方法比較或與另一個已建立準確度的方法比較結(jié)果。結(jié)果。 中藥分析的準確度一般用加樣回中藥分析的準確度一般用加樣回收試驗衡量。中藥回收率一般要求在收試驗衡量。中藥回收率一般要求在95105%范圍內(nèi)，有些方法操作步驟范圍內(nèi)，有些方法操作步驟繁多時，可要求在繁多時，可要求在90110%范圍內(nèi)。

40、范圍內(nèi)。RSD一般在一般在3%以內(nèi)。以內(nèi)。 2雜質(zhì)定量測定的準確度雜質(zhì)定量測定的準確度 可向原料藥或制劑中加入已知量雜可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進行測定。如果不能得到雜質(zhì)或降質(zhì)進行測定。如果不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測定結(jié)果與另一成解產(chǎn)物，可用本法測定結(jié)果與另一成熟的方法進行比較。熟的方法進行比較。 （二）（二）精密度（精密度（precision） 精密度精密度是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（程度。用偏差（d）、標準偏差）、標準偏差(SD)、相對標準偏差相對標準偏差(R

41、SD)（變異系數(shù)，（變異系數(shù)，CV）表示。表示。 偏差（d）：測量值與平均值之差xxdi標準（偏）差（SD或S）12nxxSi相對標準（偏）差（RSD），也稱變異系數(shù)（CV）%100 xSRSD 1. 重復性重復性 在相同條件下，由同一個在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)分析人員測定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，次測定結(jié)果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次或把如制備三個不同濃度樣品各測三次或把被測物濃度當作被測物濃度當作100%，至少測，至少測6次進行次進行評價。評價。 2. 中間精密度中間精密度 同一實驗室，不同時同一實驗

42、室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度?？疾祀S機變動因素的影響。的精密度?？疾祀S機變動因素的影響。變動因素為不同日期、不同分析人員、變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備不同設(shè)備 3. 重現(xiàn)性重現(xiàn)性 不同實驗室，不同分析人不同實驗室，不同分析人員測定結(jié)果的精密度。當分析方法將被員測定結(jié)果的精密度。當分析方法將被法定標準采用時，應進行重現(xiàn)性試驗。法定標準采用時，應進行重現(xiàn)性試驗。如建立藥典分析方法時通過協(xié)同檢驗得如建立藥典分析方法時通過協(xié)同檢驗得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗的過程、重現(xiàn)出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗的過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應記載在起草說明中。性結(jié)

43、果均應記載在起草說明中。 （三）（三） 檢測限（檢測限（limit of detection， LOD） 檢測限系指試樣中被測物能被檢測限系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。是限度試驗參數(shù)，檢測出的最低量。是限度試驗參數(shù)，無需定量測定。常用無需定量測定。常用%、ppm、ppb表示。表示。1非儀器分析目視法非儀器分析目視法 用已知濃度的被測物，試驗出能被用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量?？煽康貦z測出的最低濃度或量。 2信噪比法信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測出的信號與空

44、白樣品測出的信試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出號進行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比的最低濃度或量。一般以信噪比（S/N）3 1或或2 1時的相應濃度或時的相應濃度或注入儀器的量確定檢測限。注入儀器的量確定檢測限。3數(shù)據(jù)要求數(shù)據(jù)要求 應附測試圖譜，說明測試過程和檢應附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結(jié)果。測限結(jié)果。 （四）定量限（1imit of quantitation，LOQ） 指樣品中被測物能被定量測定的最低量，結(jié)果應具有一定準確度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。 （五）專屬性（五）專屬性（specificity） 指有其指有其他

45、成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準確測定能存在情況下采用的方法能準確測定出被測物的特性，能反映該方法在有出被測物的特性，能反映該方法在有共存物時對供試物準確而專屬的測定共存物時對供試物準確而專屬的測定能力。是指該法用于復雜樣品分析時能力。是指該法用于復雜樣品分析時相互干擾程度的度量。相互干擾程度的度量。 （六）（六） 線性線性 在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。 數(shù)據(jù)要求：應列出回歸方程、相關(guān)數(shù)據(jù)要求：應列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。系數(shù)和線性圖

46、。（七）范圍（七）范圍 指達到一定精密度、準確度和線性指達到一定精密度、準確度和線性的條件下，測試方法適用的高低限濃度的條件下，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。或量的區(qū)間。（八）（八） 耐用性耐用性 指測定條件稍有變動時，指測定條件稍有變動時，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗提供依據(jù)。是衡量實驗室和工作人員之提供依據(jù)。是衡量實驗室和工作人員之間在正常情況下實驗結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。間在正常情況下實驗結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。 （九）應用（九）應用 1. 鑒別試驗除專屬性、耐用性外，鑒別試驗除專屬性、耐用性外，其它都不要求。其它都不要求。 2. 雜質(zhì)的限量檢查除專屬性

47、、檢測雜質(zhì)的限量檢查除專屬性、檢測限、耐用性外，其它都不要求。雜質(zhì)的限、耐用性外，其它都不要求。雜質(zhì)的定量測定除檢測限外，其它都要求。定量測定除檢測限外，其它都要求。 3. 含量測定及溶出量測定除檢測限、含量測定及溶出量測定除檢測限、定量限外，其它都要求。定量限外，其它都要求。（十）各種含量測定方法對效能指標（十）各種含量測定方法對效能指標的要求的要求 1. 1. 容量分析法：用原料藥精制品容量分析法：用原料藥精制品( (含量含量99.599.5) )或?qū)φ掌房疾旆椒ǖ幕驅(qū)φ掌房疾旆椒ǖ木芏龋鄬藴什钜话銘淮笥诰芏?，相對標準差一般應不大?.20.2；進行回收率試驗。；進行回收率試驗。

48、回收率一般在回收率一般在99.799.7100.3100.3之間之間。 2. 2. UV法法：用適當濃度的精制品進行用適當濃度的精制品進行測定，其測定，其RSD一般不大于一般不大于1。制劑的。制劑的測定測定，回收率一般應在，回收率一般應在98102之之間。間。 線性：線性：吸光度吸光度A一般在一般在0.20.7，濃度點濃度點n5。用濃度。用濃度c對對A作線性回歸作線性回歸處理，得一直線方程，處理，得一直線方程，r應大于應大于0.999(n5)，方程的截距應近于零。，方程的截距應近于零。 3. HPLC法：要求法：要求RSD2，回收回收率率98102之間。之間。 線性范圍：用精制品配制一系列線性范圍：用精制品配制一系列標準溶液，濃度點標準溶液，濃度點n應為應為57，用濃，用濃度度c對峰高對峰高h或被測物的響應值之比進或被測物的響應值之比進行回歸處理，建立回歸方程，行回歸處理，建立回歸方程，r應大應大于于0.999，截距應趨于零