第 章 線粒體遺傳與線粒體疾病

1、第十三章 線粒體疾病廣義的線粒體?。╩itochondrial disease）指以線粒體功能異常為主要病因的一大類疾病。除線粒體基因組缺陷直接導(dǎo)致的疾病外，編碼線粒體蛋白的核DNA突變也可引起線粒體病，但這類疾病表現(xiàn)為孟德爾遺傳方式。目前發(fā)現(xiàn)還有一類線粒體疾病，可能涉及到mtDNA與nDNA的共同改變，認為是基因組間交流的通訊缺陷。通常所指的線粒體疾病為狹義的概念，即線粒體DNA突變所致的線粒體功能異常。第一節(jié) 疾病過程中的線粒體變化線粒體對外界環(huán)境因素的變化很敏感，一些環(huán)境因素的影響可直接造成線粒體功能的異常。例如在有害物質(zhì)滲入（中毒）、病毒入侵（感染）等情況下，線粒體亦可發(fā)生腫脹甚至破裂

2、，腫脹后的體積有的比正常體積大34倍。如人體原發(fā)性肝癌細胞癌變過程中，線粒體嵴的數(shù)目逐漸下降而最終成為液泡狀線粒體；缺血性損傷時的線粒體也會出現(xiàn)結(jié)構(gòu)變異如凝集、腫脹等；壞血病患者的病變組織中有時也可見2到3個線粒體融合成一個大的線粒體的現(xiàn)象，稱為線粒體球；一些細胞病變時，可看到線粒體中累積大量的脂肪或蛋白質(zhì)，有時可見線粒體基質(zhì)顆粒大量增加，這些物質(zhì)的充塞往往影響線粒體功能甚至導(dǎo)致細胞死亡；如線粒體在微波照射下會發(fā)生亞微結(jié)構(gòu)的變化，從而導(dǎo)致功能上的改變；氰化物、CO等物質(zhì)可阻斷呼吸鏈上的電子傳遞，造成生物氧化中斷、細胞死亡；隨著年齡的增長，線粒體的氧化磷酸化能力下降等等。在這些情況下，線粒體常作

3、為細胞病變或損傷時最敏感的指標之一，成為分子細胞病理學(xué)檢查的重要依據(jù)。第二節(jié)線粒體疾病的分類根據(jù)不同的角度，線粒體疾病可以有不同的分類。從臨床角度，線粒體疾病主要涉及心、腦等組織器官或系統(tǒng)；從病因和病理機制角度，線粒體疾病有生化分類和遺傳分類之別。一、生化分類根據(jù)線粒體所涉及的代謝功能，線粒體疾病可分為以下5種類型：底物轉(zhuǎn)運缺陷、底物利用缺陷、Krebs循環(huán)缺陷、電子傳導(dǎo)缺陷和氧化磷酸化偶聯(lián)缺陷（表13-1）。表13-1 線粒體疾病的生化分類1底物轉(zhuǎn)運缺陷 肉堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶（CPT）缺陷 肉堿缺陷（肉堿轉(zhuǎn)運體缺陷）2底物利用缺陷 丙酮酸脫氫酶復(fù)合體（PDHC）缺陷 -氧化缺陷3Krebs循環(huán)

4、缺陷 延胡索酸酶缺陷 烏頭酸酶缺陷 -酮戊二酸脫氫酶缺陷4電子傳導(dǎo)缺陷 復(fù)合體、 復(fù)合體 復(fù)合體 復(fù)合體 復(fù)合體、和聯(lián)合缺陷5氧化磷酸化偶聯(lián)缺陷 Lufts病復(fù)合體缺陷 二、遺傳分類根據(jù)缺陷的遺傳原因，線粒體疾病分為核DNA（nDNA）缺陷、mtDNA缺陷以及nDNA和mtDNA聯(lián)合缺陷3種類型（表13-2）。表13-2 線粒體疾病的遺傳分類缺陷位置遺傳方式遺傳特征生化分析nDNA缺陷組織特異基因孟德爾式組織特異綜合征組織特異單酶病變非組織特異基因孟德爾式多系統(tǒng)疾病廣泛性酶病變mtDNA缺陷點突變母性遺傳多系統(tǒng)、異質(zhì)性特異單酶病變廣泛性酶病變?nèi)笔l(fā)PEO，KSS，Pearson廣泛性酶病變n

5、DNA和mtDNA聯(lián)合缺陷多發(fā)性mtDNA缺失AD/ARPEO廣泛性酶病變mtDNA缺失AR肌病、肝病組織特異多酶病變注：PEO：進行性眼外肌麻痹；KSS：眼肌?。籔earson：骨髓/胰腺綜合征第三節(jié) mtDNA突變引起的疾病線粒體病是一組多系統(tǒng)疾病，因中樞神經(jīng)系統(tǒng)和骨骼肌對能量的依賴性最強，故臨床癥狀以中樞神經(jīng)系統(tǒng)和骨骼肌病變?yōu)樘卣鳎绻∽円灾袠猩窠?jīng)系統(tǒng)為主，稱為線粒體腦?。蝗绻∽円怨趋兰橹?，稱為線粒體肌?。蝗绻∽兺瑫r侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)和骨骼肌，則稱為線粒體腦肌病。線粒體疾病通常累計多個系統(tǒng)，表現(xiàn)型有高度差異。mtDNA與nDNA有不同的遺傳特性，因此mtDNA突變所引起疾病的遺傳方

6、式、病因、病程也有其自身特性。由于線粒體基因組和生化的復(fù)雜性，使線粒體疾病發(fā)病機制非常復(fù)雜，表現(xiàn)型很不一致。不同的mtDNA突變可導(dǎo)致相同疾病，而同一突變也可引起不同表型，并且通常與突變mtDNA的異質(zhì)性水平和組織分布相關(guān)。如A8344G、T8356C均可導(dǎo)致MERRF；又如低比例的T8993G（ATPase6基因）點突變導(dǎo)致NARP，比例90%時導(dǎo)致Leigh??；高比例的A3243G突變造成MELAS，低比例時可導(dǎo)致母系遺傳的糖尿病和耳聾（表13-3）。目前已發(fā)現(xiàn)越來越多的疾病與線粒體功能障礙有關(guān)，如2型糖尿病、腫瘤、帕金森病、心肌病及衰老等。表13-3一些mtDNA突變相關(guān)的疾病突變相關(guān)基

7、因表型nt-3243tRNALeu(UUR)MELAS、PEO、NIDDM/耳聾nt-3256tRNALeu(UUR)PEOnt-3271tRNALeu(UUR)MELASnt-3303tRNALeu(UUR)心肌病nt-3260tRNALeu(UUR)心肌病/肌病nt-4269tRNAIle心肌病nt-5730tRNAAsn肌病(PEO)nt-8344tRNALysMERRFnt-8356tRNALysMERRF/MELASnt-15990tRNAPro肌病nt-8993A6NARP/LEIGHnt-11778ND4LHONnt-4160ND1LHONnt-3460ND1LHONnt-744

8、4COX1LHONnt-14484ND6LHONnt-15257Cyt6LHON一、Leber遺傳性視神經(jīng)病Leber遺傳性視神經(jīng)?。↙eber hereditary optic neuropathy，LHON）于1871年由Leber醫(yī)生首次報道，因主要癥狀為視神經(jīng)退行性變，故又稱Leber視神經(jīng)萎縮?；颊叨嘣?820歲發(fā)病，男性較多見，個體細胞中突變mtDNA超過96時發(fā)病，少于80時男性病人癥狀不明顯。臨床表現(xiàn)為雙側(cè)視神經(jīng)嚴重萎縮引起的急性或亞急性雙側(cè)中央視力喪失，可伴有神經(jīng)、心血管、骨骼肌等系統(tǒng)異常，如頭痛、癲癇及心律失常等。誘發(fā)LHON的mtDNA突變均為點突變。1988年，Wal1

9、ace等發(fā)現(xiàn)LHON患者OXPHOS復(fù)合物（NADH脫氫酶）的ND4亞單位基因第11778位點的堿基由置換為（G11778A，稱Wal1ace突變），使ND4的第340位上1個高度保守的精氨酸被組氨酸取代，ND4的空間構(gòu)型改變，NADH脫氫酶活性降低和線粒體產(chǎn)能效率下降，視神經(jīng)細胞提供的能量不能長期維持視神經(jīng)的完整結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致神經(jīng)細胞退行性變、死亡。近年來，已相繼報道有更多mtDNA點突變與LHON相關(guān)，均可引起基因產(chǎn)物的氨基酸替換，其中除G11778A外，G14459A（ND6）、G3460A（ND1）、T14484C（ND6）、G15257A（cyt b）等4個位點對LHON也有重要作用。這

10、5個位點的突變雖然均導(dǎo)致LHON，但臨床嚴重程度有較大差異，以G14459A引起的癥狀最為嚴重，T14484C和G15257A引起的癥狀較輕。LHON家系中mtDNA可有多個點突變，并且可觀察到2個以上突變的協(xié)同致病作用，遺傳學(xué)研究表明，LHON患者mtDNA的多發(fā)突變之間存在某種聯(lián)系，這些突變可分原發(fā)性突變和繼發(fā)性突變，mtDNA某一“原發(fā)”突變或nDNA遺傳缺陷可導(dǎo)致“繼發(fā)”突變。單一的原發(fā)性突變即可引起LHON（稱原發(fā)性LHON），臨床嚴重程度隨突變位點不同而異；繼發(fā)性突變往往以某型突變?yōu)橹?，伴發(fā)其他類型突變（二次突變或nDNA突變），才能引起LHON（繼發(fā)性LHON）。利用LHON患者

11、的特異性mtDNA突變，可進行該病的基因診斷。例如，mtDNA第11778位GA是LHON患者最常見的突變類型，該突變可導(dǎo)致原有的限制性內(nèi)切酶sfaN的切點消失，正常人mtDNA經(jīng)sfaN酶切后產(chǎn)生915bp、679bp兩個片段，而LHON患者mtDNA經(jīng)酶切后只產(chǎn)生1590bp片段。Lebers hereditary optic neuropathy(LHON)1.LHON has been linked to point mutations in the mtDNA.2.LHON is expressed predominantly in males of the lineageunexp

12、lained.3.The onset of visual loss typically occurs between the age of 15 and 35 years.4.Visual loss is painless, central, and occurs in one eye week to months before second eye involvement. On rare occasions, the disease may remain clinically monocular.二、線粒體腦肌病線粒體腦肌?。╩itochondria1 encephalomyopathie

13、s，ME）是一組由于線粒體功能缺陷引起的多系統(tǒng)疾病，以中樞神經(jīng)和肌肉系統(tǒng)病變?yōu)橹鳎卣魇呛粑溍富钚哉５募±w維與酶活性缺失的肌纖維混合?；颊吒鞣N組織內(nèi)mtDNA的突變類型、分布各不相同，所以表現(xiàn)出不同的癥狀，多表現(xiàn)為肌力低下、易疲勞、小腦失調(diào)、耳聾、癡呆、代償性高乳酸血癥等。根據(jù)臨床表現(xiàn)，將線粒體腦肌病分為：伴有破碎紅纖維的肌陣攣癲癇（myoclonic epilepsy and ragged red fibers，MERRF）、線粒體腦肌病合并乳酸血癥及卒中樣發(fā)作(mitochondrial encephalomyopathy with lactic acidosis，and stroke

14、-like episodes，MELAS)，Kearns-Sayre綜合征（KSS）、慢性進行性眼外肌癱瘓（chronic progressive external ophthalmoplegia，CPEO）、神經(jīng)源性肌軟弱、共濟失調(diào)并發(fā)色素性視網(wǎng)膜炎（neurogenic muscle weakness,ataxia,and retinitis pigmentosa，NARP）和Leigh綜合征（Leigh sysdrom，LS）等幾種。（一）伴有破碎紅纖維的肌陣攣癲癇（MERRF）MERRF患者通常1020歲發(fā)病，主要臨床表現(xiàn)為陣發(fā)性癲癇，伴有進行性神經(jīng)系統(tǒng)障礙（智力倒退、共濟失調(diào)、意向性

15、震顫），患者肌纖維紊亂、粗糙，線粒體形態(tài)異常并在骨骼肌細胞中積累，用Gomori Trichrome染色顯示為紅色，稱破碎紅纖維。MERRF最常見的突變類型是mtDNA第8344位點（位于tRNALys基因處）AG的堿基置換，破壞了tRNALys中與核糖體連接的TC環(huán)，結(jié)果影響了OXPHOS復(fù)合體和復(fù)合體的合成，造成OXPHOS功能下降，導(dǎo)致患者多系統(tǒng)病變。（二）線粒體腦肌病合并乳酸血癥及卒中樣發(fā)作（MELAS）MELAS患者通常1020歲發(fā)病，主要臨床表現(xiàn)為陣發(fā)性嘔吐、癲癇發(fā)作和中風(fēng)樣發(fā)作、血乳酸中毒、近心端四肢乏力等。MELAS的分子特征是線粒體tRNA的點突變，約有80%的患者是mtDN

16、A的3243（位于tRNALeu基因）AG的堿基置換，該位點是tRNALeu基因與16SrRNA基因的交界部位，也是轉(zhuǎn)錄終止因子的結(jié)合部位，進化上高度保守，突變使tRNALeu基因結(jié)構(gòu)異常，轉(zhuǎn)錄終止因子不能結(jié)合，rRNA和mRNA合成的比例發(fā)生改變；少數(shù)患者為tRNALeu(UUR)基因3271、3252或3291位堿基的點突變。肌組織中A3243G突變型mtDNA達40%50%時，出現(xiàn)CPEO、肌病和耳聾，達90%時，可出現(xiàn)復(fù)發(fā)性休克、癡呆、癲癇、共濟失調(diào)等。（三）Kearns-Sayre綜合征（KSS）、慢性進行性眼外肌癱瘓（CPEO）KSS和CPEO是同一疾病的兩種不同類型，CPEO患者

17、以眼外肌麻痹為主要癥狀，伴眼瞼下垂、四肢無力，常在青春期或成年發(fā)?。籏SS除進行性眼肌麻痹外，還具有色素視網(wǎng)膜炎、心臟傳導(dǎo)功能障礙、聽力喪失、共濟失調(diào)、癡呆等癥狀，常在嬰兒、兒童或青春期發(fā)病。KSS和CPEO主要是由于mtDNA的缺失引起的，缺失類型多樣，一般缺失長度為0.58kb，最常見的類型是5.0kb的“普遍缺失”。缺失部位多發(fā)生在重鏈和輕鏈兩個復(fù)制起始點之間，缺失區(qū)兩側(cè)有同向重復(fù)序列。缺失的mtDNA具有明顯的復(fù)制優(yōu)勢，突變型60%，可抑制線粒體翻譯，酶活性下降。由于涉及多個基因的缺失，患者可出現(xiàn)不同程度的線粒體蛋白質(zhì)合成缺陷，影響四種呼吸鏈復(fù)合體。此外，偶爾可見8334位點（tRNA

18、Leu）和3242位點（tRNALeu）點突變可引起CPEO。KSS和CPEO病情嚴重程度取決于缺失型mtDNA的異質(zhì)性水平和組織分布。異質(zhì)性程度低時，僅表現(xiàn)為眼外肌麻痹，肌細胞中缺失型mtDNA85%時，表現(xiàn)為嚴重的KSS。（四）神經(jīng)源性肌軟弱，共濟失調(diào)并發(fā)色素性視網(wǎng)膜炎（NARP）和Leigh綜合征（LS）NARP的主要臨床表現(xiàn)為主要表現(xiàn)色素性視網(wǎng)膜炎、共濟失調(diào)、發(fā)育落后、癡呆、驚厥、近端肢體無力和感覺神經(jīng)病；Leigh綜合征是以高乳酸血癥、低肌張力為主要表現(xiàn)的進行性腦病，主要侵犯嬰兒。NARP和Leigh綜合征主要與ATP復(fù)合酶的功能受損有關(guān)，目前發(fā)現(xiàn)該病的致病突變主要是mtDNA第89

19、93位點（ATPase6基因）TA或TC，將ATPase 6亞基156位的亮氨酸改變?yōu)榫彼峄蚋彼幔瑥亩绊慉TP合酶的質(zhì)子通路?；颊弋愘|(zhì)性決定了臨床癥狀的嚴重性：女性攜帶者或癥狀較輕的女患者突變水平90%時，表現(xiàn)為Leigh綜合征。因此，?？梢姷絅ARP和Leigh綜合征在同一家系中并存。三、線粒體心肌病線粒體心肌病累及心臟和骨骼肌，病人常有嚴重的心力衰竭，常見臨床表現(xiàn)為勞動性呼吸困難，心動過速，全身肌無力伴全身嚴重水腫，心臟和肝臟增大等癥狀。mtDNA的突變與缺失與某些心肌病有關(guān)，如：3260位點的AG突變可引起母系遺傳的線粒體肌病和心肌??；4977位點的缺失多見于缺血性心臟病、冠狀動脈

20、粥樣硬化性心臟病等；擴張性心肌病和肥厚性心肌病均可見7436位點的缺失等。四、帕金森病帕金森病（Parkinson disease，PD）又稱震顫性麻痹，是一種晚年發(fā)病的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，患者表現(xiàn)為運動失調(diào)，震顫，動作遲緩等，少數(shù)病人有癡呆癥狀。神經(jīng)病理學(xué)特征包括黑質(zhì)致密區(qū)多巴胺能神經(jīng)元發(fā)生退行性變，部分存活的神經(jīng)元內(nèi)出現(xiàn)Lewy體。帕金森病患者腦組織，特別是黑質(zhì)中存在4977bp長的一段DNA缺失，缺失區(qū)域從ATPase8基因延續(xù)到ND5基因，結(jié)果導(dǎo)致多種組織細胞內(nèi)的線粒體復(fù)合體、甚至都存在功能缺陷，進而引起神經(jīng)元中能量代謝障礙。大多數(shù)觀點認為單純的基因或環(huán)境毒物很少能直接引起PD，大部分病

21、例是基因和環(huán)境甚至更多因素共同作用的結(jié)果。五、其他與線粒體有關(guān)的病變（一）衰老線粒體病的遲發(fā)和漸進過程提示線粒體功能隨著年齡的增加而退化，在正常生理狀態(tài)下，機體自身的防御系統(tǒng)（如超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、過氧化物酶、維生素等）可及時清除能量代謝過程中產(chǎn)生的氧自由基。在個體衰老的進程中，抗氧化防御系統(tǒng)作用減弱，線粒體內(nèi)自由基不能有效地清除而累積，從而導(dǎo)致線粒體的氧化性損傷，包括生物膜損傷、改變巰基酶活性、破壞核苷酸類輔酶以及mtDNA損傷等。大量的研究證實，衰老與線粒體氧化磷酸化酶活性降低以及分裂終末的組織中突變mtDNA積累密切相關(guān)，mtDNA突變類型包括缺失、點突變、插入、重復(fù)和D環(huán)區(qū)域出

22、現(xiàn)小片段重疊，盡管這五種突變中的任何一種很少達到1%，但在衰老組織中可同時存在其中幾種，大大增加突變型mtDNA的比例。與增齡有關(guān)的突變類型主要是缺失，并且與氧化損傷有關(guān)。許多研究表明，衰老時組織中8-OH-dG含量增多，小于55歲個體膈肌中，8-OH-dG含量低于0.02%，65歲以上的個體中，8-OH-dG以每10年0.25%的比率增加，在85歲時達到0.51%，而且mtDNA的缺失率也隨之增加，表明分裂旺盛的細胞中mtDNA的快速復(fù)制可稀釋8-OH-dG，而分裂終末的細胞中8-OH-dG累積，促進mtDNA缺失。缺失常包括一個或幾個mRNA基因和tRNA基因，可累及腦、心肌、骨骼肌、肝、

23、腎、肺、皮膚、卵巢、精子等多種器官組織。不同年齡的人心肌、腦、骨骼肌、肝、膈肌等細胞中mtDNA片段缺失的位置可能不同，但缺失率均隨增齡而增加，如：在17歲青年中未發(fā)現(xiàn)mtDNA片段的缺失；在34歲個體中檢測到mtDNA5.0bp片段的缺失，缺失率為0.005%；隨年齡的增長，缺失率逐漸增加，85歲個體中達0.26%，是低值的4200倍。說明缺失的mtDNA積累到一定程度時，線粒體發(fā)生生物學(xué)變化，OXPHOS組分缺損或數(shù)量減少，生成的能量低于維持正常細胞功能閾值，致使細胞死亡，引起衰老和多種老年退化性疾病。（二）腫瘤腫瘤細胞具有異?？焖俚姆至言鲋衬芰?，能量需求很高。各種腫瘤和腫瘤細胞系中發(fā)現(xiàn)了

24、體細胞mtDNA突變，這些突變能通過細胞生成能量的改變、線粒體氧化壓力的增加和/或調(diào)節(jié)凋亡而導(dǎo)致腫瘤。有些因素的作用可使mtDNA游離出線粒體膜外（如細胞內(nèi)線粒體受損傷崩解），而細胞內(nèi)核酸降解酶活性下降，不能有效地清除游離于胞質(zhì)中的mtDNA分子，mtDNA有可能像致瘤病毒那樣通過核膜，隨機整合到nDNA中，激活原癌基因或抑制抗癌基因，使細胞增殖分化失控，導(dǎo)致癌變。mtDNA是致癌物作用的重要靶點，眾多研究結(jié)果顯示，化學(xué)致癌物與mtDNA的結(jié)合比nDNA更充分。（三）糖尿病近年來的分子遺傳學(xué)研究證實，一些2型糖尿病患者具有明顯的遺傳背景，其中部分患者糖尿病的發(fā)生與線粒體基因的突變有關(guān)，mtDN

25、A點突變或缺失可選擇性地破壞細胞，1997美國糖尿病學(xué)會年進行新的糖尿病病因?qū)W分類，將其歸為特殊類型糖尿病中細胞遺傳性缺陷疾病。與線粒體糖尿病有關(guān)的mtDNA突變類型較多，如tRNALys的A8296G、12SrRNA的G1438A、T1310C等點突變、8kb重復(fù)突變和10.4kb、7.7kb及7.6kb缺失突變等。tRNALeu（UUR）基因32303304是熱點突變區(qū)域，包括tRNALeu(UUR)的A3243、C3256T、T3264C、G3316A，其中A3243突變最為常見。mtDNA突變可通過以下機制誘導(dǎo)糖尿?。阂扰K細胞能感受血糖值，以葡萄糖為底物產(chǎn)生ATP，影響K+通道，進一步

26、借助電位感受性的Ca2+通道使其分泌胰島素。突變使細胞變得不能感受血糖值，呼吸鏈復(fù)合體酶活性下降，ATP合成不足，胰島素分泌降低；細胞不穩(wěn)定性增高，誘發(fā)自身免疫介導(dǎo)的細胞損壞；增加糖原異生；脂肪細胞對胰島素的反應(yīng)減弱，糖耐量減退，出現(xiàn)高血糖。（四）冠心病線粒體OXPHOS過程產(chǎn)生大量的氧自由基，引起mtDNA損傷而發(fā)生突變，使線粒體呼吸鏈的電子傳遞受阻，電子直接泄漏于線粒體基質(zhì)內(nèi)，使超氧陰離子產(chǎn)生增多，導(dǎo)致線粒體內(nèi)的氧應(yīng)激水平提高，氧化應(yīng)激能大大增加線粒體的損傷程度，結(jié)果又使OXPHOS障礙加重，形成惡性循環(huán)。在冠脈狹窄、心肌細胞缺血和反復(fù)出現(xiàn)低血氧時，可使mtDNA出現(xiàn)不可逆性損害，產(chǎn)生永久

27、性心肌細胞氧化功能障礙，因此，心肌缺血與mtDNA突變互為因果關(guān)系。冠心病患者mtDNA5.0kb片段的缺失是正常人的7220倍，7.4kb片段和10.4kb片段的缺失率也比正常人高。（五）氨基糖甙類誘發(fā)的耳聾耳毒性聾與氨基糖甙類抗生素(aminoglycosideantibiotic，AmAn)的應(yīng)用相關(guān)，對常規(guī)量AmAn易感的耳聾可能具有母系遺傳傾向，這些易感個體具有mtDNA12SrRNA基因的1555位點AG的突變，有人認為該突變多存在于亞洲人種，白種人極少發(fā)生。第四節(jié) nDNA突變引起的線粒體病一、編碼線粒體蛋白的基因缺陷已定性的由于編碼線粒體蛋白的基因缺陷所引起的疾病并不多，如丙酮酸脫氫酶復(fù)合體缺陷、肉堿棕櫚酮轉(zhuǎn)移酶缺陷等。主要從以下方面尋找線索：如有孟德爾遺傳的家族史；生化方面可檢測的特定酶缺陷；組織化學(xué)方面的研究，如一些呼吸鏈蛋白亞基是由核基因編碼的；利用Rho細胞進行的互補試驗研究，如一個L