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1、基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),通過 ,賦予生物以 ,創(chuàng)造出 ?;蚬こ淌窃?上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的,又叫做 。(一)基因工程的基本工具1.“分子手術(shù)刀” (1)來源:主要是從 中分離純化出來的。(2)功能:能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種 的核苷酸序列,并且使每一條鏈中 部位的兩個(gè)核苷酸之間的 斷開,因此具有 性。(3)結(jié)果:經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式: 和 。2.“分子縫合針” (1)兩種DNA連接酶(E·coliDNA連接酶和T4-DNA連接酶)的比較:相同點(diǎn):都縫合 鍵。區(qū)別:E·coliDNA連接酶來源于 ,只能將雙鏈

2、DNA片段互補(bǔ)的 之間的磷酸二酯鍵連接起來;而T4DNA連接酶能縫合 ,但連接平末端的之間的效率較 。(2)與DNA聚合酶作用的異同:DNA聚合酶只能將 加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯鍵。DNA連接酶是連接 的末端,形成磷酸二酯鍵。3.“分子運(yùn)輸車” (1)載體具備的條件: 。 。 。(2)最常用的載體是 ,它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的、獨(dú)立于 ,并具有 的雙鏈 DNA分子。(3)其它載體: (二)基因工程的基本操作程序第一步: 1.目的基因是指: 。2.原核基因采取 獲得,真核基因是 。人工合成目的基因的常用方法有 _和_ 。3.PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因(1)原理: (2)過程:第一步

3、:加熱至9095 ;第二步:冷卻到5560, ;第三步:加熱至7075, 。第二步: 1.目的:使目的基因在受體細(xì)胞中 ,并且可以 ,使目的基因能夠 。2.組成: (1)啟動(dòng)子:是一段有特殊結(jié)構(gòu)的 ,位于基因的 ,是 識(shí)別和結(jié)合的部位,能驅(qū)動(dòng)基因 ,最終獲得所需的 。(2)終止子:也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的 ,位于基因的 。(3)標(biāo)記基因的作用:是為了鑒定受體細(xì)胞中 ,從而將 篩選出來。常用的標(biāo)記基因是 。第三步: 1.轉(zhuǎn)化的概念:是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。2.常用的轉(zhuǎn)化方法:將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞:采用最多的方法是 ,其次還有 和 等。將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞:

4、最常用的方法是 。此方法的受體細(xì)胞多是 。將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞:原核生物作為受體細(xì)胞的原因是 ,最常用的原核細(xì)胞是 ,其轉(zhuǎn)化方法是:先用 處理細(xì)胞,使其成為 ,再將 溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子,完成轉(zhuǎn)化過程。3.重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后,篩選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是 。第四步: 1.首先要檢測(cè) ,方法是采用 。2.其次還要檢測(cè) ,方法是采用 。3.最后檢測(cè) ,方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取 ,用相應(yīng)的 進(jìn)行 。4.有時(shí)還需進(jìn)行 的鑒定。如 。(三)基因工程的應(yīng)用1.植物基因工程: 。2.動(dòng)物基因工程: 。3.基因治療: 。(四)蛋白質(zhì)工程的概念

5、蛋白質(zhì)工程是指以 作為基礎(chǔ),通過 ,對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行 ,或制造一種 ,以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。(基因工程在原則上只能生產(chǎn) 的蛋白質(zhì))翻譯轉(zhuǎn)錄答案專題1   基因工程基因工程的概念體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù) 新的遺傳特性 更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品因 DNA分子水平 DNA重組技術(shù)(一)基因工程的基本工具1.限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)(1)原核生物(2)特定 特定 磷酸二酯鍵 專一(3)黏性末端 平末端。2. DNA連接酶(1)磷酸二酯T4噬菌體 黏性末端 兩種末端 低。(2)單個(gè)核苷酸 兩個(gè)DNA片段3.載體(1)能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。 具有一至多個(gè)限制酶切

6、點(diǎn),供外源DNA片段插入。具有標(biāo)記基因,供重組DNA的鑒定和選擇。(2)質(zhì)粒 細(xì)菌染色體之外 自我復(fù)制能力 環(huán)狀(3) 噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步:目的基因的獲取1. 編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 。2.直接分離 人工合成 反轉(zhuǎn)錄法_ 化學(xué)合成法_。3.(1)DNA雙鏈復(fù)制 (2)DNA解鏈; 引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈; 熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成。第二步:基因表達(dá)載體的構(gòu)建1.穩(wěn)定存在 遺傳至下一代 表達(dá)和發(fā)揮作用。2.目的基因啟動(dòng)子終止子標(biāo)記基因(1)DNA片段 首端 RNA聚合酶 轉(zhuǎn)錄出mRNA 蛋白質(zhì)。(2)DNA片段 尾端。(3)是否含有目的基因

7、 含有目的基因的細(xì)胞 抗生素基因。第三步:將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞_2. 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉管通道法 顯微注射技術(shù) 受精卵繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少 大腸桿菌 Ca2+ 感受態(tài)細(xì)胞 重組表達(dá)載體DNA分子 3.標(biāo)記基因是否表達(dá)。第四步:目的基因的檢測(cè)和表達(dá)1. 轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因 DNA分子雜交技術(shù)。2. 目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA 用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交。3. 目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)的 抗體 抗原抗體雜交。4. 個(gè)體生物學(xué)水平 轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀(三)基因工程的應(yīng)用1.抗蟲、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物,利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)。2.提高動(dòng)

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