微生物的篩選-文檔資料

1、1土壤微生物的分離篩選土壤微生物的分離篩選2一一微生物篩選原理及介紹微生物篩選原理及介紹二二微生物篩選的流程微生物篩選的流程三三微生物篩選的操作微生物篩選的操作content3一、微生物篩選介紹一、微生物篩選介紹1 1、概念、概念2 2、篩選及純化的方法、篩選及純化的方法3 3、培養(yǎng)基的選擇、培養(yǎng)基的選擇4 概念：概念： 在混雜的微生物群體中，按照微生物的代謝在混雜的微生物群體中，按照微生物的代謝特征，分離出特定功能的微生物，并進(jìn)行純化直特征，分離出特定功能的微生物，并進(jìn)行純化直至獲得單一菌株的操作過程。至獲得單一菌株的操作過程。 土壤是微生物的大本營，混雜著大量的微生物，土壤是微生物的大本營

2、，混雜著大量的微生物，從中分離可得到只含有一種微生物的純培養(yǎng)。從中分離可得到只含有一種微生物的純培養(yǎng)。概念概念 篩選及純化的方法篩選及純化的方法 培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基的選擇5微生物篩選的方法有：稀釋涂布法和平板劃線法。微生物篩選的方法有：稀釋涂布法和平板劃線法。稀釋涂布法：將土壤溶液稀釋成一定的梯度，將其稀釋涂布法：將土壤溶液稀釋成一定的梯度，將其涂布到固體平板培養(yǎng)基上。涂布到固體平板培養(yǎng)基上。平板劃線法：挑取稀釋涂布后長出的菌落，在固體平板劃線法：挑取稀釋涂布后長出的菌落，在固體平板培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，獲取純菌落。平板培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，獲取純菌落。概念概念 篩選及純化的方法篩選及純化的方法 培養(yǎng)

3、基的選擇培養(yǎng)基的選擇67 細(xì)菌的篩選：選擇性培養(yǎng)基細(xì)菌的篩選：選擇性培養(yǎng)基 根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。其功能是學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。其功能是使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而從而提高該提高該菌的篩選效率。菌的篩選效率。概念概念 篩選及純化的方法篩選及純化的方法 培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基的選擇8細(xì)菌的保存：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基細(xì)菌的保存：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方（配方（g g）：牛肉膏）：牛肉膏3,3,蛋白胨蛋白胨10,10,氯化鈉氯化鈉5 5，瓊脂，瓊脂15,15,蒸餾水蒸餾

4、水1000ml1000ml，pH7.2pH7.2。概念概念 篩選及純化的方法篩選及純化的方法 培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基的選擇9二、微生物篩選純化的流程二、微生物篩選純化的流程樣樣品品富富集集培培養(yǎng)養(yǎng)梯梯度度稀稀釋釋涂涂布布培培養(yǎng)養(yǎng)平平板板劃劃線線純純化化斜斜面面保保存存10三三 微生物篩選純化的操作微生物篩選純化的操作注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：篩選之前，提前制作好試驗(yàn)用的培養(yǎng)基。篩選之前，提前制作好試驗(yàn)用的培養(yǎng)基。與培養(yǎng)微生物相關(guān)的試驗(yàn)器材需要滅菌，方法為與培養(yǎng)微生物相關(guān)的試驗(yàn)器材需要滅菌，方法為在在 121 121 的條件下高壓滅菌的條件下高壓滅菌2020分鐘。分鐘。與微生物相關(guān)的操作需要在無菌操作臺上

5、進(jìn)行。與微生物相關(guān)的操作需要在無菌操作臺上進(jìn)行。操作之前操作之前1515分鐘打開紫外燈。分鐘打開紫外燈。11樣品樣品富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀釋涂布培養(yǎng)涂布培養(yǎng)劃線純化劃線純化斜面保存斜面保存采樣：土壤樣品，梅花形布點(diǎn)采樣，采樣：土壤樣品，梅花形布點(diǎn)采樣，取得的用四分法進(jìn)行取樣，將樣品取得的用四分法進(jìn)行取樣，將樣品放入放入4 4 冰箱中保存待用。冰箱中保存待用。12 富集培養(yǎng)：指從微生物混合群開始富集培養(yǎng)：指從微生物混合群開始, ,對特定種的數(shù)量比例不斷增高而引向?qū)μ囟ǚN的數(shù)量比例不斷增高而引向純培養(yǎng)的一種培養(yǎng)方法。在適于目標(biāo)純培養(yǎng)的一種培養(yǎng)方法。在適于目標(biāo)微生物而不適于其他微生物生長的條

6、微生物而不適于其他微生物生長的條件下繼續(xù)培養(yǎng)，則目標(biāo)微生物將成為件下繼續(xù)培養(yǎng)，則目標(biāo)微生物將成為優(yōu)勢種而得到純培養(yǎng)。優(yōu)勢種而得到純培養(yǎng)。樣品樣品富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀釋涂布培養(yǎng)涂布培養(yǎng)劃線純化劃線純化斜面保存斜面保存13 以篩選產(chǎn)以篩選產(chǎn)DMSDMS功能微生物為例：功能微生物為例： 取取2.5g2.5g土樣置于土樣置于50ml50ml改良基改良基礎(chǔ)鹽液體培養(yǎng)基中，礎(chǔ)鹽液體培養(yǎng)基中，28 28 震震蕩培養(yǎng)蕩培養(yǎng)4 4天。天。樣品樣品富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀釋涂布培養(yǎng)涂布培養(yǎng)劃線純化劃線純化斜面保存斜面保存14樣品樣品富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀釋涂布培養(yǎng)涂布培養(yǎng)劃線純化劃線純化斜

7、面保存斜面保存15樣品樣品富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀釋涂布培養(yǎng)涂布培養(yǎng)劃線純化劃線純化斜面保存斜面保存 將菌種用無菌水制成懸液。將菌種用無菌水制成懸液。 取若干只無菌試管，每只內(nèi)盛取若干只無菌試管，每只內(nèi)盛9ml9ml無菌無菌水。水。 吸取上述菌懸液吸取上述菌懸液lmllml加入第加入第1 1只含有無只含有無菌水的試管內(nèi)。也就是菌水的試管內(nèi)。也就是1010-1-1。 從第從第1 1只試管內(nèi)只試管內(nèi)(10(10-1-1) )吸取吸取lmllml注入第注入第2 2只含有無菌水的試管內(nèi)，也就是只含有無菌水的試管內(nèi)，也就是1010-2-2。 用同樣方法，制成用同樣方法，制成1010-3-31010-8-8的菌懸液。的菌懸液。16樣品樣品富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀釋涂布培養(yǎng)涂布培養(yǎng)劃線純化劃線純化斜面保存斜面保存劃線目的：逐步純化，直至出現(xiàn)單菌劃線目的：逐步純化，直至出現(xiàn)單菌落，獲得純菌株。落，獲得純菌株。3 35 5次。次。17樣品樣品富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀釋涂布培養(yǎng)涂布培養(yǎng)劃線純化劃線純化斜面保存斜面保存18樣品樣品富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀釋涂布培養(yǎng)涂布培養(yǎng)劃線純化劃線純化斜面保存斜面保存19樣品樣品富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀釋涂布培養(yǎng)涂布培養(yǎng)劃線純化劃線純化斜面保存斜面保存20 將接種菌株的斜面放入將接種菌株的斜面放入4 4 冰箱中保存。冰