機(jī)能實(shí)驗(yàn)家兔腸缺血再灌注損傷

1、n 家兔腸缺血家兔腸缺血/ /再灌注損傷再灌注損傷 n Ischemia-reperfusion Injury in Rabbit (I/R) 組員：張景幀組員：張景幀 孫藝孫藝 王燕王燕 李蓉蓉李蓉蓉 宋天冬宋天冬 宋子夜宋子夜p掌握缺血再灌注損傷模型的復(fù)制，比較掌握缺血再灌注損傷模型的復(fù)制，比較缺血損傷和缺血再灌注損傷的區(qū)別缺血損傷和缺血再灌注損傷的區(qū)別p觀察缺血再灌注損傷的表現(xiàn)，理解缺血觀察缺血再灌注損傷的表現(xiàn)，理解缺血再灌注損傷發(fā)生的機(jī)制再灌注損傷發(fā)生的機(jī)制 【目的要求】【目的要求】n【實(shí)驗(yàn)動(dòng)物】【實(shí)驗(yàn)動(dòng)物】n 家兔家兔n 【實(shí)驗(yàn)器材】【實(shí)驗(yàn)器材】n兔手術(shù)臺(tái)、BL-420生物信息采集系

2、統(tǒng)、Y型氣管插管、動(dòng)脈夾、動(dòng)脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用手術(shù)器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水【實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理】【實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理】n通 過 腸 系 膜 上 動(dòng) 脈 結(jié) 扎 ， 即通 過 腸 系 膜 上 動(dòng) 脈 結(jié) 扎 ， 即SMAO(Superior Mesentery Artery Occlusion)來阻斷部分腸的血液供應(yīng)一段時(shí)來阻斷部分腸的血液供應(yīng)一段時(shí)間后再恢復(fù)血流灌注，以復(fù)制腸缺血間后再恢復(fù)血流灌注，以復(fù)制腸缺血/再灌再灌注損傷的動(dòng)物模型，探討缺血注損傷的動(dòng)物模型，探討缺血/再灌注損傷再灌注損傷的發(fā)生機(jī)制的發(fā)生機(jī)制p組：持續(xù)缺血組組：持續(xù)缺血

3、組 夾閉腸系膜上動(dòng)脈夾閉腸系膜上動(dòng)脈1hp組：再灌損傷組組：再灌損傷組 夾閉腸系膜上動(dòng)脈夾閉腸系膜上動(dòng)脈30min，再恢復(fù)血，再恢復(fù)血流流30min 【實(shí)驗(yàn)分組】【實(shí)驗(yàn)分組】【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】n1. 稱重稱重n2. 全麻（耳緣靜脈注射全麻（耳緣靜脈注射25%烏拉坦烏拉坦4ml/kg） n 注意：從耳緣靜脈的遠(yuǎn)心端開始注射，注意：從耳緣靜脈的遠(yuǎn)心端開始注射，n排盡氣泡，速度不宜太快排盡氣泡，速度不宜太快n 麻醉效果：角膜反射麻醉效果：角膜反射n 基本消失，鉗夾家兔基本消失，鉗夾家兔n 舌頭無回收，四肢松軟舌頭無回收，四肢松軟n3. 仰臥固定（背部交叉）、備皮仰臥固定（背部交叉）

4、、備皮n 頸部正中（甲狀軟骨下緣頸部正中（甲狀軟骨下緣胸骨上切跡）胸骨上切跡）n 腹部正中（劍突下腹部正中（劍突下1.5cm起向下起向下5cm）n 注意：平貼皮膚剪毛，勿拎起皮膚！注意：平貼皮膚剪毛，勿拎起皮膚！n4.頸部正中切口行動(dòng)脈插管頸部正中切口行動(dòng)脈插管p切口范圍：頸部正中，甲狀軟骨下緣切口范圍：頸部正中，甲狀軟骨下緣胸骨胸骨上切跡，長約上切跡，長約5cmp分離左側(cè)頸總動(dòng)脈：胸分離左側(cè)頸總動(dòng)脈：胸骨舌骨肌與胸鎖乳突肌之骨舌骨肌與胸鎖乳突肌之間深面的頸動(dòng)脈鞘內(nèi)，與間深面的頸動(dòng)脈鞘內(nèi)，與 氣管平行，顏色鮮紅、氣管平行，顏色鮮紅、 較細(xì)、觸之有搏動(dòng)感，較細(xì)、觸之有搏動(dòng)感， 長約長約2-3cm

5、，穿線備用，穿線備用注意：（注意：（1）鈍性分離鈍性分離 （2）辨清頸）辨清頸A鞘內(nèi)的血管神經(jīng)鞘內(nèi)的血管神經(jīng)血管插管血管插管先結(jié)扎遠(yuǎn)心端，后夾閉近心先結(jié)扎遠(yuǎn)心端，后夾閉近心端，剪口部位盡量靠近遠(yuǎn)心端，剪口部位盡量靠近遠(yuǎn)心端，成端，成45度角朝向近心端度角朝向近心端剪一小口，約為管徑的剪一小口，約為管徑的1/3-1/2，插管方向朝向近，插管方向朝向近心端，插入心端，插入1-1.5cm【插管的注意事項(xiàng)】【插管的注意事項(xiàng)】p插管內(nèi)事先應(yīng)加入少量肝素以防凝血；排凈氣插管內(nèi)事先應(yīng)加入少量肝素以防凝血；排凈氣泡，記錄前應(yīng)關(guān)閉三通管泡，記錄前應(yīng)關(guān)閉三通管p插管易滑脫，應(yīng)雙線固定，結(jié)扎牢靠插管易滑脫，應(yīng)雙線固

6、定，結(jié)扎牢靠p勿使插管尖端與血管壁形成角度，避免刺破血勿使插管尖端與血管壁形成角度，避免刺破血管管n 5. 5.腹部正中切口：腹部正中切口：n 腹正中線自劍突下腹正中線自劍突下1.5cm1.5cm起向下做起向下做5cm5cm切口切口 n6.6.尋找腸系膜上動(dòng)脈：尋找腸系膜上動(dòng)脈：n 將家兔腹腔內(nèi)臟左移，找到齊右腎門對(duì)側(cè)垂直向腹主將家兔腹腔內(nèi)臟左移，找到齊右腎門對(duì)側(cè)垂直向腹主動(dòng)脈分出的腸系膜上動(dòng)脈，穿雙線備用，注意避免損傷其動(dòng)脈分出的腸系膜上動(dòng)脈，穿雙線備用，注意避免損傷其他血管（缺血再灌注夾閉時(shí)注意墊橡皮管）他血管（缺血再灌注夾閉時(shí)注意墊橡皮管）n 7. 7.記錄一段正常血壓曲線記錄一段正常血

7、壓曲線n 8. 8.復(fù)制腸缺血復(fù)制腸缺血- -再灌注模型，輕輕提起腸系膜上動(dòng)脈的穿再灌注模型，輕輕提起腸系膜上動(dòng)脈的穿線，用動(dòng)脈夾夾閉，同時(shí)觀察各項(xiàng)生理指標(biāo)變化。線，用動(dòng)脈夾夾閉，同時(shí)觀察各項(xiàng)生理指標(biāo)變化。p 9. 9.分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)并記錄各項(xiàng)指標(biāo)。（分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)并記錄各項(xiàng)指標(biāo)。（組：夾閉腸系膜組：夾閉腸系膜上動(dòng)脈上動(dòng)脈1h 1h 組：夾閉腸系膜上動(dòng)脈組：夾閉腸系膜上動(dòng)脈30min30min，再恢復(fù)血流，再恢復(fù)血流30min30min）腸系膜上動(dòng)脈示意圖腸系膜上動(dòng)脈示意圖n1. 移動(dòng)內(nèi)臟時(shí)，動(dòng)作要輕柔移動(dòng)內(nèi)臟時(shí)，動(dòng)作要輕柔n2. 分離腸系膜上分離腸系膜上A時(shí)需小心細(xì)致，不要使用銳利時(shí)需小心細(xì)致，

8、不要使用銳利器械，以免損傷血管造成大出血器械，以免損傷血管造成大出血n3. 腸系膜上腸系膜上A夾閉要徹底，缺血再灌注組結(jié)扎時(shí)夾閉要徹底，缺血再灌注組結(jié)扎時(shí)注意墊橡皮管，恢復(fù)血流灌流（復(fù)流）要完全注意墊橡皮管，恢復(fù)血流灌流（復(fù)流）要完全【注意事項(xiàng)】【注意事項(xiàng)】【結(jié)果分析】【結(jié)果分析】 峰表示：結(jié)扎腸系膜上峰表示：結(jié)扎腸系膜上A A 血管床容量血管床容量 有效循環(huán)血量有效循環(huán)血量相對(duì)相對(duì)BPBP 壓力感受器壓力感受器 (+) (+) 減壓反射減壓反射BPBP 峰表示：松開腸系膜上峰表示：松開腸系膜上A A 血管床容量血管床容量有效循環(huán)血量有效循環(huán)血量相對(duì)相對(duì) BP BP升壓反射（再灌注升壓反射（再

9、灌注損傷還未來得及發(fā)生）有時(shí)損傷還未來得及發(fā)生）有時(shí)峰不出現(xiàn)，峰不出現(xiàn)，BPBP直到死亡直到死亡 血壓持續(xù)下降，有再灌注損血壓持續(xù)下降，有再灌注損傷傷n組：結(jié)扎BP BP趨于平穩(wěn)（相似于結(jié) 扎前），腸壁粉紅暗紅（淤血）腫脹（水腫），無出血點(diǎn)n組：結(jié)扎 BPBP趨于平穩(wěn)（機(jī)體自身調(diào)節(jié)） 再灌BP，腸壁暗紅、水腫、出血點(diǎn)BP低于正常1/2時(shí)休克n 、組比較說明：缺血損傷與 是不同的 損傷過程， 損傷過程，后者損傷更嚴(yán)重【典型結(jié)果】【典型結(jié)果】【結(jié)果不明顯可能存在的問題】【結(jié)果不明顯可能存在的問題】n（1）實(shí)驗(yàn)過程中是否發(fā)生了大血？n（2）缺血是否完全？n（3）再灌注是否通暢？n（4）記錄結(jié)果時(shí)基線是否改變？n（5）個(gè)體差異 【I/R的發(fā)生機(jī)制】的發(fā)生機(jī)制】n（1）活性氧的作用 ） n（2）鈣超載 ） n（3）白細(xì)胞的作用 ）n（4）高能磷酸化合物生成障礙 ）（1）盡早恢復(fù)血流灌流，縮短缺血時(shí)間）盡早恢復(fù)血流灌流，縮短缺血時(shí)間（2）再灌注時(shí)遵循低溫、低壓、低鈣的原則）再灌注