高效液相色譜法測定復方冰替雙層膜中替硝唑及氧氟沙星的含量

1、高效液相色譜法測定復方冰替雙層膜中替硝唑及氧氟沙星的含量        【關(guān)鍵詞】  替硝唑 氧氟沙星 高效液相色譜法 復方冰替雙層膜     復方冰替雙層膜是我院研制的一種用于口腔潰瘍牙周炎等口腔疾病廣譜抗菌藥物的復方制劑，主要成分為替硝唑、氧氟沙星等。雖然替硝唑和氧氟沙星單方制劑的含量檢測方法1很多，但均不適合這種復方制劑的含量檢測。本研究應用高效液相色譜法檢測復方冰替雙層膜中替硝唑及氧氟沙星的含量，以期為其質(zhì)量控制提供了一種較好的方法?，F(xiàn)報道如下。1 

2、; 儀器與試藥1.1  儀器美國SSI公司PC-3000高效相色譜系統(tǒng)，Anastar色譜工作站；日本島津UV2100紫外可見分光度計；METTLER AE100型天平。1.2  試藥甲醇和乙晴（山東禹王實業(yè)總公司化工廠生產(chǎn)，均為色譜純）；替硝唑、氧氟沙星對照品均由藥品生物制品檢定所提供，復方冰替雙層膜由湖北省黃石市中心藥制劑室提供。2  方法與結(jié)果2.1  色譜條件固定相為KromasilC18；色譜柱（250 mm×46   mm.5m）；流動相為0.025mol·L1磷酸溶液（用三乙胺調(diào)pH值至3.0）甲醇乙

3、晴（801010）；流速為1.0 ml·min-1；壓力1 000 PA；檢測波長為296 nm；靈敏度：AUFS0.2；進樣量10l。柱溫定溫；保留時間較適中，分離效果好。替硝唑峰、氧氟沙星與其它雜質(zhì)分離度大于2，理論板數(shù)為3 000以上（以氧氟沙星峰）。2.2  供試品溶液的制備精密稱取供試品1.0 g，加流動相約40 ml，置超聲波振蕩器中振蕩30ml，放冷，加流動相至50 ml；搖勻，過濾，取續(xù)濾液經(jīng)微孔濾膜過濾后進樣（制成溶液含替硝唑濃度為3.93 mg·L-1，氧氟沙星濃度為1.89mg·L-1.2.3  對照品溶液的制備精密稱取氧

4、氟沙星對照品8mg，替硝唑?qū)φ掌?6 mg，置100 ml量瓶中，加0.1 mg·L-1鹽酸溶液20ml使溶解，用流動相稀釋至刻度，精密量取3ml，置50 ml量瓶中加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照樣溶液（每毫升含替硝唑9.6 mg、氧氟沙星量4.8 mg）。2.4  線性關(guān)系及檢測限的確定精密量取氧氟沙星對照品（86.0 mg·L-）1，2，3，4，5 ml加流動相定溶至50 ml，分別進樣10l，測定峰面積值，將各自的峰面積值與各自的濃度進行線性回歸，得回歸方程：Y=62 876X-17 964，r=0.999 7，n=5。結(jié)果表明氧氟沙星濃度在3.4417

5、 mg·L-1的范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。    精密量取對照品溶液（151.0 mg·L-1）1，2，3，4，5 ml加流動相定量至50 ml，分別進樣10 ml，測定峰面積值，將各自的峰面積值與各自的濃度進行線性回歸，得回歸方程：Y=15 146X-2 334，r=0.999 9，n=5。結(jié)果表明替硝唑濃度在6.0430.2 mg·L-1的范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。1         2.5  空白對照試驗取不含替硝唑、氧氟沙星的空白樣品研細，精密稱

6、取1.0 g，量具塞錐形瓶中，加入流動相50 ml，超聲處理45    min，過濾，結(jié)果空白樣品色譜中，在與替硝唑、氧氟沙星相同保留時間處無色譜峰。提示，其它成分不干擾替硝唑、氧氟沙星的測定。2.6  精密度實驗及穩(wěn)定性實驗取供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h各進樣一次，連續(xù)進樣6次，結(jié)果氧氟沙星峰面積平均為107 643，RSD為0.32%，替硝唑峰面積平均為6 219，RSD為0.9%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定，且實驗精密度良好。2.7  重復性實驗取批號20050101的供試品約1.0 g，照含量測定方法測定6次。氧

7、氟沙星含量為1.93 mg/片，RSD為1.5%，n=6；替硝唑含量為3.98 mg/片，RSD為1.5%，n=6。2.8  回收率實驗精密量取已測定含量的供試品約1 g（批號為20041001）氧氟沙星含量為0.93 mg/片，替硝唑含量為3.98 mg/片）精密加入混合對照品溶液（每1ml含氧氟沙星1.050 mg·L-1，替硝唑2.005 mg·L-1）0.8，10，12 ml（分別相當于樣品含量的80%，100，120），照含量測定方法加流動相至50 ml，依法測定。結(jié)果氧氟沙星平均回收率為99.6%，RSD為1.1%，n=9；替硝唑平均回收率為99.5%

8、，RSD為1.1%，n=9。見表1。表1  氧氟沙星加收實驗結(jié)果（略）2.9  樣品的含量測定及含量限度取復方冰替雙層膜10批，依上法制成供試品溶液，分別進樣10l，按外標法同時測定氧氟沙星和替硝唑的含量。結(jié)果見表2。表2  樣品測定結(jié)果（略）    10批樣品氧氟沙星均在1.72.3 mg/片，替硝唑含量均在3.44.6 mg/片，故制劑二成分含量標示量應為85115%。3  討論    由于本制劑成分中替硝唑、氧氟沙星均能溶于酸和堿性介質(zhì)而難溶于水。故本實驗中采用超聲波振蕩方法提取樣品。流動相選用0.025mg·L-1磷酸溶液（以三乙胺調(diào)pH至3.0）配合甲醇、乙晴能使兩者較好地分離，分離度達到2.2，理論板數(shù)（以氧氟沙星）達到3 000以上，具有較好分離度，較高的柱效符合規(guī)定的要求，更改流動相比例（83107或771013）。更換色譜樣品牌，氧氟沙星仍能與其它成分較好地分離。    替硝唑、氧氟沙星最大吸收波長分別在（250±1）nm和（296±1）nm處，由于氧氟沙星在供試品中含量較低。為提高其檢測靈敏度，選擇氧氟沙星最大吸收波長296 nm作為測定波長。在此波長測定替硝唑、氧