鹽酸論文畜產(chǎn)品中鹽酸克倫特羅檢測方法概述

1、鹽酸論文|畜產(chǎn)品中鹽酸克倫特羅檢測方法概述    本文由寫手聯(lián)盟-論文代寫代發(fā)表 收集整理發(fā)布，本站提供相關(guān)職稱論文發(fā)表服務(wù)。相關(guān)專業(yè)提示：鹽酸克倫特羅檢測卡 鹽酸克倫特羅 鹽酸克倫特羅結(jié)構(gòu)式 鹽酸克倫特羅分子式 鹽酸克倫特羅抗體 鹽酸克倫特羅結(jié)構(gòu) 畜產(chǎn)品質(zhì)量檢測專業(yè) 畜產(chǎn)品檢測 克倫特羅檢測試劑盒 克倫特羅檢測卡8 P+ W8 R7 E/ # x4 b0 E! B; X& m( O) W! H1鹽酸克倫特羅概述鹽酸克倫特羅(Clenbuterol)別名:克喘素、氨哮素、氨必妥、氨雙氯喘通、氨雙氯醇胺。該藥為白色或類白色的結(jié)晶粉末,無臭、味苦,熔

2、點161,溶于水、乙醇,微溶于丙酮,不溶于乙醚,CAS號:3714822729。該藥物既不是獸藥,也不是飼料添加劑,而是β—腎上腺類神經(jīng)興奮劑,添加于飼料中可促進動物生長、提高瘦肉率,特別是改進脂肪型動物的肉與脂肪的比例,因此鹽酸克倫特羅又叫瘦肉精。鹽酸克倫特羅能提高豬的生長速度,增加瘦肉率,豬毛色紅潤光亮,收腹,賣相好;屠宰后,肉色鮮紅,脂肪層極薄,往往是皮貼著瘦肉,瘦肉豐滿。但是克倫特羅進入豬體內(nèi)后,主要分布在肝等內(nèi)臟器官,在體內(nèi)代謝的時間較長,容易造成藥物在組織中殘留,給消費者帶來危害;健康的人在食用一定量的殘留有克倫特羅的豬肉或內(nèi)臟后,可能出現(xiàn)肌肉

3、震顫、心慌、戰(zhàn)栗、惡心、代謝紊亂、呼吸急促、煩躁不安等癥狀。鹽酸克倫特羅嚴重危害人體健康,影響我國的畜牧業(yè)發(fā)展和畜產(chǎn)品國際、國內(nèi)貿(mào)易。, ?+ s4 d; 1 x" ?. K( j) H2鹽酸克倫特羅的檢測方法鹽酸克倫特羅在動物的肌肉、肝臟、肺臟、腎臟、眼球的殘留量多,殘留維持時間較長,但是這些樣品預(yù)處理過程復(fù)雜,難于操作。鹽酸克倫特羅在血漿中濃度較低,維持時間短,不是檢測鹽酸克倫. m6 B9 e% t* o+ T# O: 特羅殘留的理想樣品。鹽酸克倫特羅在體內(nèi)代謝后大量以原形從尿液中排出,而且尿液中鹽酸克倫特羅的濃度比血漿中高40倍,可實現(xiàn)宰前檢測,所以尿液是檢測鹽酸克倫特羅的較

4、好的樣品。目前,我國檢測鹽酸克倫特羅殘留的主要方法有4種,即免疫分析技術(shù)(IA)、高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜2質(zhì)譜法(CG2MS)和毛細管區(qū)帶電泳法(CE)。在動物性食品中克倫特羅殘留量的測定中,將酶聯(lián)免疫法(ELISA)作為篩選法、高效液相色譜法(HPLC)作為定量法和氣質(zhì)聯(lián)機法(GC2MS)確證和定量的一套方法。/ F9 I: D; D2 ?+ p# '# 3 h2.1免疫分析法酶聯(lián)免疫吸附檢測法(ELISA)是鹽酸克倫特羅殘留檢測中最為常用的一種方法。ELISA的優(yōu)點是特異性強,靈敏度高,操作簡便,檢測迅速,特別適用于大批量樣品的檢測。目前,我國進出口檢驗檢疫,獸醫(yī)衛(wèi)生

5、部門及屠宰場多采用德國R2Bio2pharm,英國Randox等公司生產(chǎn)的CBL2ELISA檢測試劑盒,但由于進口試劑盒價格昂貴,在一定程度上限制了它的使用范圍。國產(chǎn)ELISA試劑盒普遍存在靈敏度不夠、假陽性率高、不穩(wěn)定等諸多問' h. A7 G4 o' Y/ ! a, A7 g題,難以推廣應(yīng)用。金標免疫檢測技術(shù)是90年代在免疫滲濾法基礎(chǔ)上建立的一種快速簡單的方法,張娟敏等的研究- m3 _9 1 Y7 o表明,滴金免疫技術(shù)生產(chǎn)的金標鹽酸克倫特羅快速檢測試紙,用抗鹽酸克倫特羅單克隆抗體、膠體金技術(shù)和免疫滲濾膜層技術(shù)相結(jié)合,不需要增加儀器設(shè)備在幾十分鐘內(nèi)就能得出檢測結(jié)果,可以在部

6、分條件下代替EIA法作為篩選方法。& q5 y' v: V% . f) K! g2.2高效液相色譜法目前,我國已將HPLC法作為檢測鹽酸克倫特羅殘留的半確證性方法,最低檢測限為0.5μg/kg。高效液相色譜法優(yōu)點是專屬性好、選擇性強、檢測精確度較高,而且假陽性率遠低于免疫法低,其缺點是樣品處理時間長,檢測過程煩瑣、難于操作,所需儀器比較貴,在實際應(yīng)用中受到一定的限制。隨著新檢測器的使用,一定程度上提高了HPLC的檢出靈敏度。Anders等使用分子標記技術(shù)標記牛尿中的鹽酸克倫特羅,使用HPLC2紫外檢測器檢測,檢出下限為0.5ng/mL。張群等利用固相萃取2反相高效

7、液相色譜法測定鮮肉中的鹽酸克倫特羅,采用CleanertPC×60mg/3mL相萃取柱過柱凈化,檢測波長210nm,色譜柱:ShimpackODS2C18,0.46μm×150mm,流速0.8mL/min,流動相:0.02mol/LNaH2PO4緩沖液(pH6.0)2甲醇(V/V=40/60),最低檢測限可達0.01μg/mL7。Grzegorz等使用液相色譜電化學(xué)檢測器檢測鹽酸克倫特羅,使用UptisphereUP5CN225QS,250×4.6mm硅膠柱,使用pH2.6的乙腈:乙醇2HClO4(20mm

8、ol/L)為2575的流動相洗脫,檢測下限為2.6×1010mol/L8。楊志凌等用DiscoveryC18(4.6×250mm)色譜柱,流動相為1.7mmol/L的氯化鋰2甲酸2甲醇(65134)混合溶液,流速為1.0mL/min,柱溫40,電化學(xué)檢測器工作電位為1.25V,測定豬肉組織中的鹽酸克倫特羅,方法靈敏度高,簡便9。電化學(xué)檢測器在樣品凈處理較好時可以得到很好的靈敏度,但它不穩(wěn)定,重現(xiàn)性差且不能作為梯度洗脫條件下的檢測器,因此不能廣泛使用。張文剛等使用超高效液相色譜2串聯(lián)質(zhì)譜檢測豬尿中的克倫特羅殘留,色譜柱:BEHC18100mm&ti

9、mes;2.1mm,粒徑1.7μm;柱溫:30;流速:0.2mL/min;進樣量:5μL;流動相A:含0.2%甲酸水溶液,流動相B:甲醇;梯度洗脫條件:02.5min:A由70%漸變?yōu)?5%,2.53min:A維持25%;34.5min:A由25%漸變?yōu)?0%,電噴霧離子源;掃描方式:正離子模式;檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測;脫溶劑氣、錐孔氣均為高純氮氣方法定量下限為0.5μg/L,信噪比S/N>10,方法檢出限為0.2μg/L,信噪比S/N>310。7 l$ R& |' V% N3 u4 D. R0 L2.3氣相色譜

10、2質(zhì)譜法氣質(zhì)聯(lián)用法(GC2MS)常用于測定血液及組織中鹽酸克倫特羅殘留。此法優(yōu)點是把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機結(jié)合起來,并且能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進行定性、定量分析。GC2MS法與HPLC法相比,檢測靈敏度更高,假陽性率更低,最低檢測限為0.5μg/kg,此種方法為目前世界公認的鹽酸克倫特羅殘留量檢測的確證方法。因此,我國將GC2MS法定為檢測鹽酸克倫特羅的確證性方法。Giancarlo對鹽酸克倫特羅分子中的羥基進行硅烷化衍生,衍生物用HP25MS的柱子進行分離檢測限為0.12ng/mL11。Fente等用GC2MS法檢測牛毛中鹽

11、酸克倫特羅的殘留,最低檢測限為5ng/g12。Luca等人使用GC2MS/MS2MS對人的尿液中殘留的進行檢測,最低檢測限為0.2μg/L,線性范圍0.55μg/L13。) |* , Z5 w0 2.4毛細管區(qū)帶電泳法(CE)隨著毛細管區(qū)帶電泳技術(shù)(CE)自動化操作的實現(xiàn),由于其具有靈活性高、重復(fù)性好、操作簡便、所需樣品量極少(一般只需幾納升),CE非常適用于那些難以用傳統(tǒng)的液相色譜法分離的離子( S4 D( |1 ' j6 b8 U4 P化樣品的分離與分析,為快速、批量分離和分析離子化樣品提供了一個很好的選擇性手段14。Gausepohl等應(yīng)用CE技術(shù)檢測

12、人尿中鹽酸克倫特羅的殘留,電壓10kv,使用pH3.3的磷酸鹽緩沖液,總分析時間15min,最低檢測限達到( Z2 n; z( c! S1 _' ( g" 0.5ng/mL,而且精確度、準確度均已符合生物樣品中殘留物的檢測標準15。Jieyu等人使用激光誘發(fā)熒光毛細管電泳檢測尿液中的鹽酸克倫特羅的殘留,使用牛血清蛋白與鹽酸克倫特羅結(jié)合,使用異硫氰酸熒光素標記,在8min內(nèi)分離完全,檢出下限為0.7ng/mL16。Somsak使用毛細管電泳紫外檢測器測定鹽酸克倫特羅的殘留,使用pH10.0的10mmol/L的硼酸緩沖液,電壓19kV,檢測溫度32,檢測波長205nm,線性范圍2

13、.0230ng/mL,r2>0.99617。鄭妍鵬等建立了可用于檢測豬內(nèi)臟中鹽酸克倫特羅含量的毛細管電泳電導(dǎo)檢測方法,考察了實驗參數(shù)對分離、檢測的影響。采用醋酸2醋酸氨緩沖體系為運行電泳介質(zhì),在最佳實驗條件下,鹽酸克倫特羅的線性范圍1.220mg/L,檢測限為0.6mg/L18。吉邢虎等使用毛細管電泳免疫化學(xué)發(fā)光法檢測鹽酸克倫特羅,電泳緩沖液為10mmmol/LpH6.50磷酸緩沖溶液,化學(xué)發(fā)光試劑為0.5mmol/LLuminol,40mmol/LH2O2和120mmol/LPIP的混合溶液(pH8.50),以鹽酸克倫特羅和鹽酸克倫特羅2HRP標記物與抗鹽酸克倫特羅血清競爭免疫后的溶液進樣,實現(xiàn)了鹽酸克倫特羅2HRP標記物和免疫復(fù)合物的基線分離,檢側(cè)限為1.2nmol/L19。7 2 F1 x$ O- B3鹽酸克倫特羅檢測技術(shù)發(fā)展趨勢目前,HPLC、GC2MS、CE方法對鹽酸克倫特羅的