實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的常見問題與解決辦法

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的常見問題與解決辦法一 污染 污染是指由于微生物的侵染，在組織培養(yǎng)容器中滋生大量菌斑，使組培材料不能正常生長(zhǎng)和發(fā)育的現(xiàn)象，主要有以下5方面的原因：1.器具滅菌：實(shí)驗(yàn)的所有器具都要在121°C消毒25min，若滅菌溫度不夠或者時(shí)間不足，都會(huì)導(dǎo)致污染。滅菌時(shí)要求冷空氣完全排除，否則會(huì)達(dá)不到指定溫度。其次，要做好滅菌登記，杜絕出現(xiàn)人為失誤造成的污染。此外，在接種過程中，每用一次都要在火焰上徹底灼燒，特別在接觸到污染物時(shí)極易引起器具污染。2.外植體：很多材料在滅菌后其實(shí)還是帶菌的，不過量比較少，短期應(yīng)該觀察不到被感染的現(xiàn)象。3.接種操作：首先，接種人員

2、的手，手腕要用酒精棉球好好擦拭。其次，對(duì)于放置在外的培養(yǎng)物（滅菌好的培養(yǎng)基）其瓶子外壁上有灰塵與微生物，放入超凈臺(tái)前可以用酒精消毒一下。再者，很容易出現(xiàn)瓶口的污染，所以接種人員的技術(shù)要嫻熟，干練。4.環(huán)境條件：加強(qiáng)環(huán)境的滅菌消毒。若有污染的材料不可以就地清洗，必須高壓殺菌后再清洗，否則會(huì)導(dǎo)致大量孢子彌漫。此外，要及時(shí)打掃衛(wèi)生，定期蒸熏消毒。保證環(huán)境的干凈。5.超凈工作臺(tái)：要定期對(duì)初過濾器進(jìn)行清洗和更換。此外，每次使用前要提前20min打開機(jī)器預(yù)處理，并對(duì)臺(tái)面進(jìn)行酒精噴霧消毒。二 材料死亡 實(shí)驗(yàn)過程中，很可能出現(xiàn)材料死亡，主要有以下幾個(gè)方面：1.外植體滅菌過度：一旦材料太小或滅菌時(shí)間太長(zhǎng)，劑量太

3、大，就會(huì)導(dǎo)致材料死亡，所以要嚴(yán)格控制時(shí)間。2.污染：大量污染會(huì)造成材料死亡。3.培養(yǎng)基配置出現(xiàn)問題：在激素配置或營養(yǎng)成分配置出現(xiàn)問題時(shí)，材料易死亡，常常發(fā)生在無生長(zhǎng)點(diǎn)的材料和愈傷組織中。4.培養(yǎng)環(huán)境的惡化：溫度過高，透氣不好，培養(yǎng)過于密集，久不轉(zhuǎn)移，有害氣體的累積都會(huì)造成培養(yǎng)材料的死亡。【措施】：【1】.選用較為溫和的滅菌劑，降低藥物濃度，減少滅菌時(shí)間，或選取較為堅(jiān)強(qiáng)的外植體（eg：生長(zhǎng)季節(jié)取芽） 【2】注意個(gè)人衛(wèi)生，嚴(yán)格按照規(guī)則進(jìn)行操作。 【3】認(rèn)真配置各種母液及培養(yǎng)基，選用鹽含量較低的培養(yǎng)基，也可以試著用1/2或1/4的培養(yǎng)基，并調(diào)整各激素的用量和配比。也可以適當(dāng)添加抗生素，活性炭及必要的

4、有機(jī)營養(yǎng)。 【4】改善培養(yǎng)環(huán)境，及時(shí)轉(zhuǎn)移和分瓶。 【5】加強(qiáng)組培的過度管理。三 玻璃化 是一種植物生理失調(diào)癥，通常為植物體或葉片出現(xiàn)半透明或水漬狀，這種現(xiàn)象稱為玻璃化。其主要原因有6點(diǎn)如下：1.激素濃度：激素的影響包括生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，一方面指細(xì)胞分裂素的濃度，一方面指生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的比例，當(dāng)細(xì)胞分裂素濃度過高或者生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素比例失調(diào)時(shí)，都會(huì)導(dǎo)致玻璃化，每種植物發(fā)生玻璃化時(shí)的激素濃度都不同，要提前查閱文獻(xiàn)，找到合適濃度的激素。2.溫度與濕度：溫度主要影響植物的生長(zhǎng)速率，溫度升高時(shí)植株生長(zhǎng)速度加快，但是溫度過高時(shí)，會(huì)產(chǎn)生不良影響。溫度忽高忽低易使得瓶?jī)?nèi)濕度增加，促進(jìn)玻璃化的形成。為此

5、，可以換用透氣性比較好的牛皮紙封口。此外，若一個(gè)培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)材料越多，發(fā)生玻璃化的幾率越大。3.光照：增加光照或延長(zhǎng)光照時(shí)間可以減少玻璃化的幾率。當(dāng)溫度較高，光照不足時(shí)，很容易玻璃化。4.培養(yǎng)基的成分：在培養(yǎng)基中，適當(dāng)提高碳氮比例，可以減少玻璃化的比例。5.對(duì)策：減少培養(yǎng)基中的含氮量，增加光照，調(diào)節(jié)培養(yǎng)溫度，降低細(xì)胞分裂素的用量，提高培養(yǎng)基硬度來防止玻璃化。四 褐化 褐化是指培養(yǎng)過程中，由組培物質(zhì)向培養(yǎng)基中釋放褐色物質(zhì)，導(dǎo)致培養(yǎng)基逐漸變?yōu)楹稚囵B(yǎng)材料變褐死亡的現(xiàn)象。主要有以下幾點(diǎn)因素。1.材料的種類：不同植物發(fā)生褐化的幾率不同。2.材料的年齡和大小：外植體的老化程度越高，含有的木質(zhì)素越多，

6、也比較容易褐化。此外，材料較小時(shí)比較容易褐化，而相對(duì)較大的材料則不容易褐化。3.光照：摘取外植體前，對(duì)母株進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼诠馓幚?，可以有效防止褐化。在接種后對(duì)材料進(jìn)行一定的暗處理也可以降低褐化發(fā)生幾率，不過處理過度是材料會(huì)死亡。4.溫度：低溫可以抑制褐化作用。五 黃化 黃化是指在組培過程中，植株整體失綠，或葉片斑駁黃化的現(xiàn)象。主要原因是Fe不足，礦物營養(yǎng)不均衡，通氣不良，乙烯含量過高，激素配比不當(dāng)，糖量不足，PH變化太大，培養(yǎng)溫度不適，光照不足等。 解決方法是：配置母液時(shí)注意一儀器刻度是否都準(zhǔn)確；及時(shí)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)物；使用透氣性較好的封口膜，適當(dāng)調(diào)節(jié)PH，無機(jī)鹽濃度和激素配比要事先算好，不要忘記加糖，培

7、養(yǎng)時(shí)加入抗生素也會(huì)影響導(dǎo)致黃化，可以適當(dāng)?shù)臏p少抗生素的量。六 變異和畸形 變異和畸形是指在培養(yǎng)過程中，由于激素，環(huán)境等的作用，使得組培苗的外部形態(tài)和內(nèi)部生理發(fā)生變化，引起畸變，矮化，叢生，葉片變厚等的現(xiàn)象?；冎饕怯捎诩に胤N類和濃度導(dǎo)致的，溫度過高也會(huì)導(dǎo)致變異。在環(huán)境變得惡劣時(shí)也會(huì)發(fā)生變異。對(duì)此，可以更具植物的種類與生長(zhǎng)習(xí)性，降低細(xì)胞分裂素的濃度，調(diào)節(jié)生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素比例，改善環(huán)境等來減輕變異和畸變。七 組培苗瘦弱或徒長(zhǎng) 正常的組培苗應(yīng)當(dāng)葉色鮮綠，植株粗壯。如果在增值階段出現(xiàn)芽苗瘦弱，徒長(zhǎng)或節(jié)間過長(zhǎng)，這種苗會(huì)長(zhǎng)大，但就是比正常的瘦弱。有時(shí)即使是正常健壯的小苗，若生根階段培養(yǎng)基或環(huán)境得不到保

8、障的話，也會(huì)借鑒明顯伸長(zhǎng)，葉片變細(xì)，變薄，黃化等。這些苗過度培養(yǎng)時(shí)一死亡。 原因： 1.細(xì)胞分裂素濃度過高，產(chǎn)生過多不定芽，這些密集的芽若不及時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)移與分割，很快會(huì)變成瘦弱苗。 2.溫度過高 高溫有利于苗的生長(zhǎng)，溫度過高，會(huì)造成節(jié)間生長(zhǎng)過快。 3.光照不足：組培苗會(huì)變黃，變細(xì)，變瘦，加速生長(zhǎng)，使苗在短時(shí)間內(nèi)變得更瘦弱。 4.通氣不良：通氣不良是，會(huì)增加瓶?jī)?nèi)濕度，易導(dǎo)致苗的玻璃化和徒長(zhǎng)。解決方法： 1.根據(jù)植物特點(diǎn)減少分裂素的使用，加速繼代培養(yǎng)的速度，適當(dāng)減少接種的密度，適當(dāng)降低溫度，提高光照時(shí)間，調(diào)整培養(yǎng)基硬度，改用透氣的封口膜。 八 不生根或生根率低組培時(shí)經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)植物出根速率慢，效率低的

9、現(xiàn)象，這些苗過度培養(yǎng)時(shí)，不容易適應(yīng)外界條件。原因可能如下： 1.激素種類和濃度：通常NAA用01.0mg/L時(shí)培養(yǎng)15天就可以升根，但是有些需要與IAA和IBA混合使用。生根率不會(huì)隨著生長(zhǎng)素的升高而一直生高。 2.環(huán)境條件：主要是溫度和光照，溫度低時(shí)，生根周期會(huì)延長(zhǎng)。對(duì)于一些熱帶花卉來說，低溫會(huì)使小苗不生根，溫帶花卉在溫度較低，光照較弱時(shí)生根良好。改善措施： 1.對(duì)難生根的植物，實(shí)驗(yàn)前要先查好比較適宜的種植條件。 2.掌握各個(gè)操作中的要領(lǐng)和質(zhì)量要求，盡量不要損傷材料。用于生根的苗盡量不要帶有愈傷組織。九 過度苗死亡率高原因如下： 1.組培苗的質(zhì)量差。 2.環(huán)境條件不適宜：基質(zhì)的濕度過大會(huì)引起根部的潰爛，溫度過高過低都會(huì)使組培苗的生長(zhǎng)不適。還有光照，在過度期間要適當(dāng)?shù)挠藐幱熬W(wǎng)遮去大部分光照，之后再逐漸加強(qiáng)光照。但是在過度培養(yǎng)的后期，要提高光照強(qiáng)度，否則會(huì)造成定植成活率低。 3