2022年干細(xì)胞的基礎(chǔ)知識(shí)

1、干細(xì)胞的根底知識(shí) 干細(xì)胞的根底知識(shí)干細(xì)胞的概念干細(xì)胞是一類(lèi)具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞。它包括胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。干細(xì)胞的發(fā)育受多種內(nèi)在機(jī)制和微環(huán)境因素的影響。目前人類(lèi)胚胎干細(xì)胞已可成功地在體外培養(yǎng)。最新研究發(fā)現(xiàn)，成體干細(xì)胞可以橫向分化為其他類(lèi)型的細(xì)胞和組織，為干細(xì)胞的廣泛應(yīng)用提供了根底。在胚胎的發(fā)生發(fā)育中，單個(gè)受精卵可以分裂發(fā)育為多細(xì)胞的組織或器官。在成年動(dòng)物中，正常的生理代謝或病理?yè)p傷也會(huì)引起組織或器官的修復(fù)再生。胚胎的分化形成和成年組織的再生是干細(xì)胞進(jìn)一步分化的結(jié)果。胚胎干細(xì)胞是全能的，具有分化為幾乎全部組織和器官的能力。而成年組織或器官內(nèi)的干細(xì)胞一般認(rèn)為具有組織特異性，只能分化成特

2、定的細(xì)胞或組織。然而，這個(gè)觀點(diǎn)目前受到了挑戰(zhàn)。最新的研究說(shuō)明，組織特異性干細(xì)胞同樣具有分化成其他細(xì)胞或組織的潛能，這為干細(xì)胞的應(yīng)用開(kāi)創(chuàng)了更廣泛的空間。干細(xì)胞具有自我更新能力Self-renewing，能夠產(chǎn)生高度分化的功能細(xì)胞。干細(xì)胞按照生存階段分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。 1.1 胚胎干細(xì)胞胚胎干細(xì)胞Embryonic Stem cell, ES細(xì)胞當(dāng)受精卵分裂發(fā)育成囊胚時(shí)，內(nèi)層細(xì)胞團(tuán)Inner Cell Mass的細(xì)胞即為胚胎干細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞具有全能性，可以自我更新并具有分化為體內(nèi)所有組織的能力。早在1970年Martin Evans已從小鼠中別離出胚胎干細(xì)胞并在體外進(jìn)展培養(yǎng)。而人的胚胎

3、干細(xì)胞的體外培養(yǎng)直到最近才獲得成功。進(jìn)一步說(shuō)，胚胎干細(xì)胞ES細(xì)胞是一種高度未分化細(xì)胞。它具有發(fā)育的全能性，能分化出成體動(dòng)物的所有組織和器官，包括生殖細(xì)胞。研究和利用ES細(xì)胞是當(dāng)前生物工程領(lǐng)域的核心問(wèn)題之一。ES細(xì)胞的研究可追溯到上世紀(jì)五十年代，由于畸胎瘤干細(xì)胞EC細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)開(kāi)場(chǎng)了ES細(xì)胞的生物學(xué)研究歷程。目前許多研究工作都是以小鼠ES細(xì)胞為研究對(duì)象展開(kāi)的，如：德美醫(yī)學(xué)小組在去年成功的向試驗(yàn)鼠體內(nèi)移植了由ES細(xì)胞培養(yǎng)出的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。此后，密蘇里的研究人員通過(guò)鼠胚細(xì)胞移植技術(shù)，使癱瘓的貓恢復(fù)了局部肢體活動(dòng)能力。隨著ES細(xì)胞的研究日益深入，生命科學(xué)家對(duì)人類(lèi)ES細(xì)胞的了解邁入了一個(gè)新的階段。在98年

4、末，兩個(gè)研究小組成功的培養(yǎng)出人類(lèi)ES細(xì)胞，保持了ES細(xì)胞分化為各種體細(xì)胞的全能性。這樣就使科學(xué)家利用人類(lèi)ES細(xì)胞治療各種疾病成為可能。然而，人類(lèi)ES 細(xì)胞的研究工作引起了全世界范圍內(nèi)的很大爭(zhēng)議，出于社會(huì)倫理學(xué)方面的原因，有些國(guó)家甚至明令制止進(jìn)展人類(lèi)ES細(xì)胞研究。無(wú)論從根底研究角度來(lái)講還是從臨床應(yīng)用方面來(lái)看，人類(lèi)ES細(xì)胞帶給人類(lèi)的益處遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于在倫理方面可能造成的負(fù)面影響，因此要求展開(kāi)人類(lèi)ES細(xì)胞研究的呼聲也一浪高似一浪。1.2 成體干細(xì)胞成年動(dòng)物的許多組織和器官，比方表皮和造血系統(tǒng)，具有修復(fù)和再生的能力。成體干細(xì)胞在其中起著關(guān)鍵的作用。在特定條件下，成體干細(xì)胞或者產(chǎn)生新的干細(xì)胞，或者按一定的程序

5、分化，形成新的功能細(xì)胞，從而使組織和器官保持生長(zhǎng)和衰退的動(dòng)態(tài)平衡。過(guò)去認(rèn)為成體干細(xì)胞主要包括上皮干細(xì)胞和造血干細(xì)胞。最近研究說(shuō)明，以往認(rèn)為不能再生的神經(jīng)組織仍然包含神經(jīng)干細(xì)胞,說(shuō)明成體干細(xì)胞普遍存在，問(wèn)題是如何尋找和別離各種組織特異性干細(xì)胞。成體干細(xì)胞經(jīng)常位于特定的微環(huán)境中。微環(huán)境中的間質(zhì)細(xì)胞能夠產(chǎn)生一系列生長(zhǎng)因子或配體，與干細(xì)胞相互作用，控制干細(xì)胞的更新和分化。1.3 造血干細(xì)胞造血干細(xì)胞是體內(nèi)各種血細(xì)胞的唯一來(lái)源，它主要存在于骨髓、外周血、臍帶血中。今年年初，協(xié)和醫(yī)大血液學(xué)研究所的龐文新又在肌肉組織中發(fā)現(xiàn)了具有造血潛能的干細(xì)胞。造血干細(xì)胞的移植是治療血液系統(tǒng)疾病、先天性遺傳疾病以及多發(fā)性和

6、轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤疾病的最有效方法。在臨床治療中，造血干細(xì)胞應(yīng)用較早，在20世紀(jì)五十年代，臨床上就開(kāi)場(chǎng)應(yīng)用骨髓移植BMT方法來(lái)治療血液系統(tǒng)疾病。到八十年代末，外周血干細(xì)胞移植PBSCT技術(shù)逐漸推廣開(kāi)來(lái)，絕大多數(shù)為自體外周血干細(xì)胞移植APBSCT，在提高治療有效率和縮短療程方面優(yōu)于常規(guī)治療，且效果令人滿(mǎn)意。與兩者相比，臍血干細(xì)胞移植的長(zhǎng)處在于無(wú)來(lái)源的限制，對(duì)HLA配型要求不高，不易受病毒或腫瘤的污染。在今年初，東北地區(qū)首例臍血干細(xì)胞移植成功，又為中國(guó)造血干細(xì)胞移植技術(shù)注入新的活力。隨著臍血干細(xì)胞移植技術(shù)的不斷完善，它可能會(huì)代替目前APBSCT的地位，為全世界更多的血液病及惡性腫瘤的患者帶來(lái)福音1.4

7、 神經(jīng)干細(xì)胞 關(guān)于神經(jīng)干細(xì)胞研究起步較晚，由于別離神經(jīng)干細(xì)胞所需的胎兒腦組織較難取材，加之胚胎細(xì)胞研究的爭(zhēng)議尚未平息，神經(jīng)干細(xì)胞的研究仍處于初級(jí)階段。理論上講，任何一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病都可歸結(jié)為神經(jīng)干細(xì)胞功能的紊亂。腦和脊髓由于血腦屏障的存在使之在干細(xì)胞移植到中樞神經(jīng)系統(tǒng)后不會(huì)產(chǎn)生免疫排斥反響，如：給帕金森氏綜合癥患者的腦內(nèi)移植含有多巴胺生成細(xì)胞的神經(jīng)干細(xì)胞，可治愈局部患者病癥。除此之外，神經(jīng)干細(xì)胞的功能還可延伸到藥物檢測(cè)方面，對(duì)判斷藥物有效性、毒性有一定的作用。 實(shí)際上，到目前為止，人們對(duì)干細(xì)胞的了解仍存在許多盲區(qū)。2000年年初美國(guó)研究人員無(wú)意中發(fā)現(xiàn)在胰腺中存有干細(xì)胞；加拿大研究人員在人、

8、鼠、牛的視網(wǎng)膜中發(fā)現(xiàn)了始終處于“休眠狀態(tài)的干細(xì)胞 ；有些科學(xué)家證實(shí)骨髓干細(xì)胞可發(fā)育成肝細(xì)胞，腦干細(xì)胞可發(fā)育成血細(xì)胞。隨著干細(xì)胞研究領(lǐng)域向深度和廣度不斷擴(kuò)展，人們對(duì)干細(xì)胞的了解也將更加全面。21世紀(jì)是生命科學(xué)的時(shí)代，也是為人類(lèi)的安康長(zhǎng)壽創(chuàng)造世界奇跡的時(shí)代，干細(xì)胞的應(yīng)用將有廣闊前景。干細(xì)胞應(yīng)用的根底調(diào)控干細(xì)胞的調(diào)控是指給出適當(dāng)?shù)囊蜃訔l件，對(duì)干細(xì)胞的增值和分化進(jìn)展調(diào)控，使之向指定的方向開(kāi)展。2.1 內(nèi)源性調(diào)控干細(xì)胞自身有許多調(diào)控因子可對(duì)外界信號(hào)起反響從而調(diào)節(jié)其增殖和分化，包括調(diào)節(jié)細(xì)胞不對(duì)稱(chēng)分裂的蛋白，控制基因表達(dá)的核因子等。另外，干細(xì)胞在終末分化之前所進(jìn)展的分裂次數(shù)也受到細(xì)胞內(nèi)調(diào)控因子的制約。1細(xì)胞

9、內(nèi)蛋白對(duì)干細(xì)胞分裂的調(diào)控干細(xì)胞分裂可能產(chǎn)生新的干細(xì)胞或分化的功能細(xì)胞。這種分化的不對(duì)稱(chēng)是由于細(xì)胞本身成分的不均等分配和周?chē)h(huán)境的作用造成的。細(xì)胞的構(gòu)造蛋白，特別是細(xì)胞骨架成分對(duì)細(xì)胞的發(fā)育非常重要。如在果蠅卵巢中，調(diào)控干細(xì)胞不對(duì)稱(chēng)分裂的是一種稱(chēng)為收縮體的細(xì)胞器，包含有許多調(diào)節(jié)蛋白，如膜收縮蛋白和細(xì)胞周期素A。收縮體與紡錘體的結(jié)合決定了干細(xì)胞分裂的部位，從而把維持干細(xì)胞性狀所必需的成分保存在子代干細(xì)胞中。2轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控在脊椎動(dòng)物中，轉(zhuǎn)錄因子對(duì)干細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)非常重要。比方在胚胎干細(xì)胞的發(fā)生中，轉(zhuǎn)錄因子Oct4是必需的。Oct4是一種哺乳動(dòng)物早期胚胎細(xì)胞表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，它誘導(dǎo)表達(dá)的靶基因產(chǎn)物是FG

10、F-4等生長(zhǎng)因子，能夠通過(guò)生長(zhǎng)因子的旁分泌作用調(diào)節(jié)干細(xì)胞以及周?chē)甜B(yǎng)層的進(jìn)一步分化。Oct4缺失突變的胚胎只能發(fā)育到囊胚期，其內(nèi)部細(xì)胞不能發(fā)育成內(nèi)層細(xì)胞團(tuán) 1。另外白血病抑制因子LIF對(duì)培養(yǎng)的小鼠ES細(xì)胞的自我更新有促進(jìn)作用，而對(duì)人的成體干細(xì)胞無(wú)作用，說(shuō)明不同種屬間的轉(zhuǎn)錄調(diào)控是不完全一致的。又如Tcf/Lef轉(zhuǎn)錄因子家族對(duì)上皮干細(xì)胞的分化非常重要。Tcf/Lef是Wnt信號(hào)通路的中間介質(zhì)，當(dāng)與-Catenin形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物后，促使角質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化為多能狀態(tài)并分化為毛囊。干細(xì)胞應(yīng)用的根底調(diào)控干細(xì)胞的調(diào)控是指給出適當(dāng)?shù)囊蜃訔l件，對(duì)干細(xì)胞的增值和分化進(jìn)展調(diào)控，使之向指定的方向開(kāi)展。2.2 外源性調(diào)控除內(nèi)

11、源性調(diào)控外，干細(xì)胞的分化還可受到其周?chē)M織及細(xì)胞外基質(zhì)等外源性因素的影響。1分泌因子間質(zhì)細(xì)胞能夠分泌許多因子，維持干細(xì)胞的增殖，分化和存活。有兩類(lèi)因子在不同組織甚至不同種屬中都發(fā)揮重要作用，它們是TGF家族和Wnt信號(hào)通路。比方TGF家族中至少有兩個(gè)成員能夠調(diào)節(jié)神經(jīng)嵴干細(xì)胞的分化。最近研究發(fā)現(xiàn)，膠質(zhì)細(xì)胞衍生的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子GDNF不僅能夠促進(jìn)多種神經(jīng)元的存活和分化，還對(duì)精原細(xì)胞的再生和分化有決定作用。GDNF缺失的小鼠表現(xiàn)為干細(xì)胞數(shù)量的減少，而GDNF的過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致未分化的精原細(xì)胞的累積3。Wnts的作用機(jī)制是通過(guò)阻止-Catenin分解從而激活Tcf/Lef介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)干細(xì)胞的分化。比方在

12、線蟲(chóng)卵裂球的分裂中，鄰近細(xì)胞誘導(dǎo)的Wnt信號(hào)通路能夠控制紡錘體的起始點(diǎn)和內(nèi)胚層的分化。2膜蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞間的相互作用有些信號(hào)是通過(guò)細(xì)胞-細(xì)胞的直接接觸起作用的。-Catenin就是一種介導(dǎo)細(xì)胞粘附連接的構(gòu)造成分。除此之外，穿膜蛋白Notch及其配體Delta或Jagged也對(duì)干細(xì)胞分化有重要影響。在果蠅的感覺(jué)器官前體細(xì)胞，脊椎動(dòng)物的胚胎及成年組織包括視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮、骨骼肌和血液系統(tǒng)中，Notch信號(hào)都起著非常重要的作用。當(dāng)Notch與其配體結(jié)合時(shí)，干細(xì)胞進(jìn)展非分化性增殖；當(dāng)Notch活性被抑制時(shí)，干細(xì)胞進(jìn)入分化程序，發(fā)育為功能細(xì)胞4。3整合素Integrin與細(xì)胞外基質(zhì)整合素家族是介導(dǎo)干細(xì)胞與

13、細(xì)胞外基質(zhì)粘附的最主要的分子。整合素與其配體的相互作用為干細(xì)胞的非分化增殖提供了適當(dāng)?shù)奈h(huán)境。比方當(dāng)1整合素喪失功能時(shí)，上皮干細(xì)胞逃脫了微環(huán)境的制約，分化成角質(zhì)細(xì)胞。此外細(xì)胞外基質(zhì)通過(guò)調(diào)節(jié)1整合素的表達(dá)和激活，從而影響干細(xì)胞的分布和分化方向。2.3 干細(xì)胞的可塑性越來(lái)越多的證據(jù)說(shuō)明，當(dāng)成體干細(xì)胞被移植入受體中，它們表現(xiàn)出很強(qiáng)的可塑性。通常情況下，供體的干細(xì)胞在受體中分化為與其組織來(lái)源一致的細(xì)胞。而在某些情況下干細(xì)胞的分化并不遵循這種規(guī)律。1999年Goodell等人別離出小鼠的肌肉干細(xì)胞，體外培養(yǎng)5天后，與少量的骨髓間質(zhì)細(xì)胞一起移植入承受致死量輻射的小鼠中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肌肉干細(xì)胞會(huì)分化為各種血細(xì)胞

14、系。這種現(xiàn)象被稱(chēng)為干細(xì)胞的橫向分化trans-differentiation5。關(guān)于橫向分化的調(diào)控機(jī)制目前還不清楚。大多數(shù)觀點(diǎn)認(rèn)為干細(xì)胞的分化與微環(huán)境密切相關(guān)?？赡艿臋C(jī)制是，干細(xì)胞進(jìn)入新的微環(huán)境后，對(duì)分化信號(hào)的反響受到周?chē)谶M(jìn)展分化的細(xì)胞的影響，從而對(duì)新的微環(huán)境中的調(diào)節(jié)信號(hào)做出反響。干細(xì)胞應(yīng)用平臺(tái)技術(shù)3.1 技術(shù)原理在細(xì)胞的分化過(guò)程中，細(xì)胞往往由于高度分化而完全失去了再分裂的能力，最終衰老死亡。機(jī)體在開(kāi)展適應(yīng)過(guò)程中為了禰補(bǔ)這一缺乏，保存了一局部未分化的原始細(xì)胞，稱(chēng)之為干細(xì)胞stem cell。一旦生理需要，這些干細(xì)胞可按照發(fā)育途徑通過(guò)分裂而產(chǎn)生分化細(xì)胞，也可以這樣說(shuō)，這些干細(xì)胞充當(dāng)了分化細(xì)胞預(yù)備隊(duì)的角色。在動(dòng)物體中，多數(shù)組織含有干細(xì)胞，甚至在進(jìn)化的早期，最初級(jí)的后生動(dòng)物-海綿也含有稱(chēng)之為始祖母細(xì)胞的干細(xì)胞。干細(xì)胞有以下特點(diǎn)：1干細(xì)胞本身不是處于分化途徑的終端。2干細(xì)胞能無(wú)限的增殖分裂。3干細(xì)胞可連續(xù)分裂幾代，也可在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)處于靜止?fàn)顟B(tài)。4干細(xì)胞通過(guò)兩種方式生長(zhǎng)，一種是對(duì)稱(chēng)分裂形成兩個(gè)一樣的干細(xì)胞，另一種是非對(duì)稱(chēng)分裂由于細(xì)胞質(zhì)中的調(diào)節(jié)分化蛋白不均勻地分配，使得一個(gè)子細(xì)胞不可逆的走向分化的終端成為功能專(zhuān)一的分化細(xì)胞；另一個(gè)保持親代的特征，仍作為干細(xì)胞保存下來(lái)。分化細(xì)胞的數(shù)目受分化