臨床微生物SOP-室內質量控制管理程序1教學教材

1、臨床微生物SOP-室內質量控制管理程序1 .目的：規(guī)范微生物實驗室管理程序，確保臨床報告的質量。2 .適用范圍：微生物實驗室的所有檢驗項目。3 .職責：實驗室檢驗人員均必須熟知并遵守本程序。4 .程序：4.1 分析前質量管理4.1.1 檢驗申請單臨床醫(yī)生應按照微生物檢測項目申請程序申請臨床微生物檢測?？陬^申請追加樣本檢驗項目，必須在樣本有效期內申請，并補正式的檢驗申請單。4.1.2 生成微生物檢驗標本標簽護士應在核對醫(yī)囑、病人信息和檢驗申請信息后，按照微生物標本檢驗標簽程序生成申請單和微生物檢驗項目標簽，并將微生物檢驗項目標簽正確貼于容器上。4.1.3 標本的采集手冊實驗室應制定樣本采集手冊，

2、指導正確采集和處理樣本。4.1.4 樣本采集和運輸樣本采集人員應按照采樣前病人識別程序確認病人，按照標本采集、運輸程序采集樣本，并在規(guī)定的時間和溫度范圍內，使用指定的運輸培養(yǎng)基，安全運送到微生物室。4.1.5 樣本的接收樣本接收人員應嚴格按照標本接收、識別程序標本拒收程序對標本接收或拒收，并記錄。4.1.6 微生物檢驗標本信息輸入微生物實驗室接種實驗室崗位檢驗人員嚴格按照微生物標本信息輸入程序錄入、核對病人信息和標本信息等質料。4.1.7 樣本儲存微生物實驗室接種崗位檢驗人員按照微生物標本檢驗前儲存程序正確儲存未能及時處理的標本。已經檢驗的樣本應在保證性質穩(wěn)定的條件下，將樣本以適當的方式保留到

3、規(guī)定時間內，以便能在出具結果報告后可以復查，或做補充檢驗。4.2 分析中質量管理4.2.1 試劑的質量控制4.2.1.1 所有試劑用于檢測標本前，必須做質控以評估質量并記錄質控結果，只有質控合格才可以使用。下列試劑每進一批新批號或貨號要求用陰、陽性標準菌株或質控菌株評估其質量（表2-1）。觸酶、氧化酶、凝固酶、3內酰胺酶、Optochin、X、V和XV紙片；細菌鑒定系統(tǒng)使用的每一種鑒定卡及相關試劑；表2-1常用實驗試劑質量控制陽性對照陰性對照監(jiān)測頻率氧化酶銅綠假單胞菌ATCC27853大腸埃希菌ATCC25922每次新配制時及使用中每個工作日觸酶金黃色葡萄球菌ATCC25923A群鏈或菌ATC

4、C19615每次新配制時及使用中每個工作日靛基質大腸埃希菌ATCC25922肺炎克雷伯菌ATCC138831%蛋白陳水及靛基質試劑：每次新配制時及使用中每個月1次直接用于檢測病人標本有內標準的抗原試驗如：金黃色葡萄球菌乳膠凝集試劑（每天或每次做質控）；抗血清（至少每半年用陰、陽性質控菌株做質控）；革蘭染液（每周一次用陰、陽性質控片做質控）；抗酸染液（每次使用要求用陰、陽性質控片做質控）；自制試劑（每配制一批新試劑做質控）。4.2.1.2 平行試驗新批號試劑使用前必須用老試劑或參考材料平行試驗。4.2.1.3 無廠家商特別說明時，不同批號的試劑不可混用。4.2.1.4 缺陷或失控試劑只能用于培訓

5、員工業(yè)務能力，否則報廢處理。培訓試劑應明顯標記儀培訓使用”，并與檢驗試劑分開放置。4.2.2 培養(yǎng)基的質量控制4.2.2.1 購買的有質量保證標準的培養(yǎng)基實驗室應保存制造商所遵循的質量保證標準，以及每批號產品完成無菌試驗、生長試驗、生化試驗及質量控制性能的合格證明等文件；無質量保證標準的培養(yǎng)基，每批號和（或）每次購買的產品應檢測相應的性能，包括生長試驗或與舊批號平行試驗、生長抑制試驗（適用時）、生化反應（適用時）等。4.2.2.2 外觀檢查合格培養(yǎng)基的標準：完整。瓊脂附于平板底部，血平板應不透明、沒有溶血情況，平板顏色好、濕潤，無干裂、無污染、無渾濁或沉淀、無凍傷、無過熱現象，瓊脂厚度至少3m

6、m,如發(fā)現與上情況不符的培養(yǎng)基，應不予使用。4.2.2.3 無菌試驗抽檢培養(yǎng)基數量：100塊以內，隨機抽檢5;100塊以上可隨機取10塊平板或10支試管培養(yǎng)基進行無菌試驗。35度培養(yǎng)24小時后觀察是否有細菌生長，無細菌生長為合格。4.2.2.4 生長試驗及生化反應試驗質控菌株（表2-2,2-3）35c培養(yǎng)24小時，用無菌生理鹽水配制1.5麥氏單位的細菌懸液。無菌生理鹽水1:100稀釋，每塊平板接種10仙濃度相當于10A3-10ZCFU/平板）。培養(yǎng)24-48小時。符合生長,生化試驗質控標準者方可使用。失控者必須記錄失控情況并有相應的糾正措施。表2-2生化試驗用培養(yǎng)基的質控A口加工克氏雙糖鐵培養(yǎng)

7、基大腸埃希菌ATCC25922+/一奇異變形桿菌ATCC490053H2s福氏志賀菌質控菌株力銅綠假單胞菌ATCC27853力1蛋白月東水大腸埃希菌ATCC25922+肺炎克雷伯菌ATCC13883一鳥氨酸陰溝腸桿菌ATCC45301+|=r、罟八日ZtlLtV*-H-"肺炎克雷伯菌ATCC13883一尿道TE位顯色堵力、基人腸塊他困ATCC25922紫紅色肺炎克雷伯菌ATCC13883藍色表2-3培養(yǎng)基的生長試驗質控粒美甘上口仆卒質控菌株鑒定標準巧克力平板流感嗜血桿菌ATCC49247生長情況好血平板金黃色葡萄球菌ATCC25923中度到大量生長生長，3溶血生長，a溶血生長，藍色菌

8、落部分抑制不生長部分或全部抑制生長，無色菌落A群鏈球菌ATCC19615肺炎鏈球菌ATCC49619中國藍培養(yǎng)基大腸埃希菌ATCC25922奇異變形桿菌ATCC49005糞腸球菌ATCC29212SS培養(yǎng)基大腸埃希菌ATCC25922福氏志賀菌質控菌株4.2.3 自動化儀器試劑質控4.2.3.1 鑒定卡的質控每新進一批鑒定卡做一次質控，每一新生產批號鑒定卡需用相應質控菌株做質控以檢測生化反應的可靠性。材料和試劑批號必須記錄并保存。4.2.3.2 藥敏卡的質控分為日質控、周質控和新進藥敏卡質控。新用戶在熟悉操作前，建議先進行日質控，直至結果滿意可轉為周質控。日質控：按質控菌株表要求，沒種藥敏卡每

9、日用相應質控菌株進行質控，連續(xù)檢測20日并記錄結果。將某一種質控菌株及其對應的抗生素作為一個組合，連續(xù)檢測20日得出20個結果，只要每個組合的20個結果中，失控不超過2個，則可轉為周質控。周質控：每周用相應質控菌株進行質控并記錄結果。如抗生素種類改變，必須重新做日質控直至結果滿意再轉為周質控。新進藥敏卡質控：沒一新生產批號藥敏卡需要用需要質控菌株做質控，以檢測MIC結果的可靠性。材料和試劑批號必須記錄保存。鑒定卡和藥敏卡質控菌株應根據儀器品牌種類而定，表2-4以Vitek2Compact為例介紹常用反應卡使用的質控菌株。表2-4Vitek2Compact常用反應卡使用質控菌株GNI陰溝腸桿菌A

10、TCC700323產酸克雷伯菌ACTT700324GPI金黃色葡萄球菌ATCC25923鉛黃腸球菌ACTT700327YST葡萄牙念珠菌ATCC34449頭抱地霉ATCC28576NH流感嗜血桿菌ATCC9007乳糖奈瑟菌ATCC23970ANC普通擬桿菌ATCC8482產氣莢膜梭菌ATCC13124AST-GNXX大腸埃希菌ATCC25922銅綠假單胞菌ATCC27853AST-NXXX大腸埃希菌ATCC25922銅綠假單胞菌ATCC27853AST-GPXXAST-PXXX肺炎鏈球菌ATCC49619糞腸球菌ATCC29212金黃色葡萄球菌ATCC259134.2.3.3 檢測儀器要進行維

11、護、功能評估及穩(wěn)定監(jiān)測。參見儀器管理程序4.2.4 抗菌藥物敏感試驗紙片參見藥物敏感性試劑標準操作程序。4.2.5 染液質量質控見表2-5.表2-5染液質量質控染液陽性對照陰性對照監(jiān)測頻率革蘭染色金黃色葡萄球菌ATCC25923大腸埃希菌ATCC25922開啟新瓶及使用中每周1次抗酸染色分枝桿菌大腸埃希菌ATCC25922開啟新瓶及每次使用時4.2.6 標本預處理、涂片及接種（微生物標本接種崗位檢驗人員完成）4.2.6.1 嚴格按照呼吸系統(tǒng)標本細菌學檢驗標準操作規(guī)程預處理呼吸道標本,涂片革蘭染色以判定痰標本是否合格，正確選擇培養(yǎng)基接種。4.2.6.2 按照血液及骨髓標本細菌學檢驗標準操作規(guī)程將

12、血培養(yǎng)瓶放入全自動培養(yǎng)分析系統(tǒng)進行培養(yǎng)。如儀器報陽性，應立即取瓶，涂片革蘭染色，同時接種血平板。如果涂片陽性，應按照危機值報告程序將染色結果以初步報告形式電話通知臨床醫(yī)生，并記錄在危機值報告登記表上。4.2.6.3 按照腦脊液標本細菌學檢驗標準操作規(guī)程處理腦脊液標本，涂片革蘭染色，正確選擇培養(yǎng)基接種。如果涂片陽性，應按照危機值報告程序將染色結果以初步報告形式電話通知臨床醫(yī)生，并記錄在危機值報告登記表上。4.2.6.4 按照尿液標本細菌學檢驗標準操作規(guī)程定量培養(yǎng)。4.2.6.5 按照生殖標本細菌學檢驗標準操作規(guī)程正確選擇培養(yǎng)基，處理、接種生殖道標本。陰道炎病人標本須進行革蘭染色；孕婦需進行B群鏈

13、球菌的篩查。4.2.6.6 根據醫(yī)生的要求，按照糞便標本細菌學檢驗標準操作規(guī)程正確選擇培養(yǎng)基，處理、接種糞便標本。有抗酸藥物治療史的嚴重腹瀉病人（6個月嬰兒除外），糞便常規(guī)培養(yǎng)無異常發(fā)現時，可檢測艱難梭菌毒素。4.2.6.7 按照濃及傷口標本細菌學檢驗標準操作規(guī)程處理、接種傷口標本。深部傷口感染應至少包括標本采集、需氧菌及厭氧菌的培養(yǎng)及鑒定。最好進行直接涂片革蘭染色檢查并報告結果。如果涂片陽性，將染色結果以初步報告形式電話通知臨床醫(yī)生。4.2.6.8 按照厭氧菌屬檢驗標準操作規(guī)程處理、接種厭氧菌細菌學檢測標本。4.2.6.9 按照分支桿菌屬檢驗標準操作規(guī)程處理。接種結核分支桿菌細菌學檢測標本應

14、置密封的防滲漏容器內；某些標本（如尿液、痰液）抗酸染色及培養(yǎng)前，應以密封的螺旋蓋試管密封的離心機內離心濃縮，以最大限度減少氣溶膠危害。分支桿菌培養(yǎng)最好接種2種培養(yǎng)基培養(yǎng)（包括液體、固體），置35-37孵箱培養(yǎng)。4.2.6.10 按照深部真菌檢驗標準操作規(guī)程處理接種真菌學檢查標本。4.2.6.11 核對檢驗單與接種平板信息，確保無誤后并記錄，按照檢驗要求將接種好的平板放置相應條件孵育箱培養(yǎng)。4.2.7 菌落觀察及鑒定（細菌鑒定崗位檢驗人員完成）細菌鑒定崗位檢驗人員取出充分孵育的平板按照標本標準操作程序，觀察初步檢測結果，制定進一步鑒定及藥敏試驗方案。涂片染色、手工或儀器判別細菌類型。根據按照質量

15、質控管理程序進行質控，并記錄在室內質控記錄表上，確保試驗質量。4.2.8 藥敏試驗（藥敏試驗崗位檢驗人員完成）藥敏試驗崗位檢驗人員根據細菌鑒定或初步鑒定結果審核藥敏試驗方案，按照紙片瓊脂擴散法、深部真菌藥敏試驗標準操作規(guī)程、稀釋法等標準操作規(guī)程進行藥敏試驗。要求按照質量控制管理程序進行質控，并記錄在藥敏試驗質控記錄表上。要求用頭孢西丁紙片檢測苯唑西林耐藥金黃色葡萄球菌，VRE、PISP和PRSP需用MIC法確定。4.2.9 嚴格遵守二級生物安全管理程序進行微生物標本檢測。4.3 分析后質量控制4.3.1 藥敏崗位檢驗人員綜合細菌鑒定和藥敏結果形成檢驗報告并簽名，微生物實驗室負責人或指定人按照相

16、關抗菌藥物試驗標準操作規(guī)程核對藥敏結果，尤其注意異常和少見結果，例如VRE、PRSP等。4.3.2 報告病人結果之前，應確定質控在可接受范圍。4.3.3 經雙人雙核后的報告單交報告發(fā)放員分發(fā)到各病房或門診病人，注意簽收并記錄。缺乏審核者得報告結果，應由微生物實驗室負責人或指定人在24小時內進行評估。4.3.4 血培養(yǎng)陽性、腦脊液涂片陽性的初步報告經核實后，按危急值報告程序報告。4.3.5發(fā)現傳染性疾病原菌應按照傳染病報告程序做好報告。4.3.6 完成分析后的微生物標本，檢驗人員應按照檢驗后標本保存程序安全保管標本和平板，要求有明確標識以備復查。3-5日后，由廢棄物處理崗位人員按照廢棄物處理程序處理。4.3.7 遇到來自臨床或病人對檢驗結果的抱怨，應按