大黃中游離蒽醌的提取分離及鑒定

1、實(shí)驗(yàn)一 大黃中游離蒽醌的提取與分離和鑒定 實(shí)驗(yàn)編號(hào) :1日期 :學(xué)時(shí)數(shù) : 6學(xué)時(shí)地點(diǎn) :任課教師 :實(shí)驗(yàn)?zāi)康?:掌握從大黃中提取和分離游離蒽醌的方法實(shí)驗(yàn)原理 :大黃中有多種游離蒽醌及其苷類 , 總含量約 2-5%。主要有大黃 酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚以及它們的葡萄糖苷等。 從大黃中提取分離游離蒽醌時(shí) , 先用 20%硫酸加熱使苷類水解,保留濾餅, 濾餅用乙醚加熱回流提取總蒽醌苷元(游離蒽醌 ,提取液作 TLC 鑒識(shí)。 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 :大黃主要儀器、試劑 :電熱套、燒杯、 20%硫酸、薄層硅膠 G 、 0.5%CMC-Na。 實(shí)驗(yàn)操作步驟 :酸水解:取大黃 10g ,粉碎,加 2

2、0%硫酸水溶液 100ml , 水浴上加熱 3-4小時(shí) , 抽濾 , 濾餅水洗后自然干燥。鋪薄層硅膠 G 板 : 薄層硅膠 G :0.5%CMC-Na(1:3實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng) :加熱溫度不要太高。 溶液保持微沸,防止藥渣炭 化。 不斷攪拌。后記 :實(shí)驗(yàn)一 大黃中游離蒽醌的提取與分離和鑒定實(shí)驗(yàn)編號(hào) :2日期 :學(xué)時(shí)數(shù) : 6學(xué)時(shí)地點(diǎn) :任課教師 :實(shí)驗(yàn)?zāi)康?:1. 掌握從大黃中提取和分離游離蒽醌的方法。2.掌握蒽醌類的色譜鑒別方法。實(shí)驗(yàn)原理 :大黃中有多種游離蒽醌及其苷類 , 總含量約 2-5%。主要有大黃 酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚以及它們的葡萄糖苷等。 從大黃中提取分離游離蒽醌時(shí)

3、 , 先用 20%硫酸加熱使苷類水解,保留濾餅, 濾餅用乙醚加熱回流提取總蒽醌苷元(游離蒽醌 ,提取液作 TLC 鑒識(shí)。 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 :大黃濾餅主要儀器、試劑 :電熱套、圓底燒瓶、冷凝管、乙醚、硅膠薄層板、石油 醚、乙酸乙酯實(shí)驗(yàn)操作步驟 :總羥基蒽醌苷元的提取:取干燥濾餅,放入 100ml 圓底 燒瓶中,加入乙醚 50ml, 回流提取 3-4小時(shí),得乙醚提取液。乙醚提取液經(jīng)薄層層析檢查有大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素、大黃 素甲醚和大黃酚。 薄層板為硅膠 G-CMC-Na, 展開(kāi)劑為石油醚 (60-90 -乙酸乙酯(7:3 ,直立展開(kāi)。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng) :加熱回流時(shí)電熱套電壓小于 50v 。取石油醚(6

4、0-90 7ml, 乙酸乙酯 3ml, 混合均勻。 。 控制點(diǎn)樣量,注意點(diǎn)樣斑點(diǎn)位置。仔細(xì)觀察斑點(diǎn)、溶劑前沿移動(dòng)距離。后記 :結(jié)論:在可見(jiàn)光下可看到 4個(gè)斑點(diǎn), Rf 最大的黃色斑點(diǎn)為大黃酚和 大黃素甲醚的混合物,其余 3個(gè)斑點(diǎn)依 Rf 由大到小分別為大黃素(橙色 斑點(diǎn) ,蘆薈大黃素(黃色斑點(diǎn) ,大黃酸(黃色斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)二 蘆丁的提取及鑒定實(shí)驗(yàn)編號(hào) :1日期 :學(xué)時(shí)數(shù) : 8學(xué)時(shí)地點(diǎn) :新校區(qū) F 樓 6樓天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室任課教師 :實(shí)驗(yàn)?zāi)康?:學(xué)習(xí)和 掌握用堿提取 酸沉淀提取黃酮苷的原理和方法。 實(shí)驗(yàn)原理 :槐米中有黃酮苷 蕓香苷(蘆丁 , 蕓香苷(蘆丁 是由槲皮 素與蕓香糖連接而成的二糖苷,

5、能溶于熱水。本試驗(yàn)采用堿提取 酸沉淀 提取蕓香苷。實(shí)驗(yàn)對(duì)象 :槐米主要儀器、試劑 :電熱套、燒杯、石灰水、 PH 試紙、抽濾瓶 。實(shí)驗(yàn)操作步驟 :1. 提取:槐花米 粉碎 堿水提取 加酸沉淀 - 放置 粗品 蘆丁 精制 蘆丁 (純品 。2.粉碎 :稱槐米 40克,粉碎。3.堿提 :在 1000ml 燒杯中加入 500ml 蒸餾水, 加熱煮沸后, 將槐米粗粉投入,繼續(xù)直火 煮沸 2-3分鐘,在攪拌下,加入石灰乳,調(diào) PH8-9,加熱保持微沸 30分鐘,趁熱過(guò)濾收集,濾渣加 160ml 蒸餾水 , 加入 石灰乳,調(diào) PH8-9,同上操作再提一次,濾液合并,濾渣棄去。4. 酸沉 :將濾液在 60-7

6、0,小心加濃 HCL ,調(diào) PH3-4,放 6小時(shí)以上,析出沉淀。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng) :堿提時(shí)加入石灰乳調(diào) PH8-9,不要太高。溶液保持微沸。酸化時(shí)將濾液在 60-70,小心加濃 HCL ,調(diào) PH3-4,不要太低。 后記 :實(shí)驗(yàn)二 蘆丁的提取及鑒定 (精制 實(shí)驗(yàn)編號(hào) :2日期 :學(xué)時(shí)數(shù) : 8學(xué)時(shí)地點(diǎn) :新校區(qū) F 樓 6樓天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室任課教師 :實(shí)驗(yàn)?zāi)康?:粗品蘆丁的精制實(shí)驗(yàn)原理 :粗品蘆丁能溶于熱水,去除不溶性雜質(zhì),最后用甲醇重結(jié)晶。實(shí)驗(yàn)對(duì)象 :粗品蘆丁主要儀器、試劑 :電熱套、圓底燒瓶、冷凝管、甲醇實(shí)驗(yàn)操作步驟 :精制 :粗品蘆丁放在 1000ml 燒杯中,加 500ml 蒸餾水,

7、加熱煮沸,至全部溶解,趁熱抽濾,濾液放冷,即析出黃色沉淀,待沉淀 完全后,抽濾,收集沉淀,干燥。用甲醇重結(jié)晶,得精品蘆丁。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng) :(1用甲醇重結(jié)晶時(shí)加熱回流時(shí)電熱套電壓小于 50v 。(2粗品蘆丁全部溶解,趁熱抽濾。(3重結(jié)晶時(shí)甲醇的用量應(yīng)適當(dāng),用量過(guò)多,則結(jié)晶不易析出;用量過(guò) 少,又會(huì)帶入較多的雜質(zhì)。后記 :實(shí)驗(yàn)二 蘆丁的提取及鑒定實(shí)驗(yàn)編號(hào) :3日期 :學(xué)時(shí)數(shù) : 8學(xué)時(shí)地點(diǎn) :新校區(qū) F 樓 6樓天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室任課教師 :實(shí)驗(yàn)?zāi)康?:(1 蘆丁的水解,鑒定;(2掌握黃酮類成分的主要性質(zhì)及黃酮苷、苷元和糖的鑒定 方法。實(shí)驗(yàn)原理 :,實(shí)驗(yàn)對(duì)象 :精品蘆丁主要儀器、試劑 :電熱套、圓

8、底燒瓶、冷凝管、甲醇、正丁醇、醋酸、葡 萄糖、鼠李糖、鹽酸、鎂粉、醋酸鎂、醋酸鉛、氧氯化鋯、三氯化鋁實(shí)驗(yàn)操作步驟 :1. 水解 :取 1克蘆丁加 1%H2SO 4100ml 與燒杯中, 加熱微沸, 30分鐘,開(kāi)始為澄清,逐漸析出黃色針狀結(jié)晶,待沉淀完全后,抽濾,收 集沉淀,水解母液留作糖的紙層析鑒定。2. 蘆丁、槲皮素的鑒定:(1糖的檢出 圓形濾紙層析取水解蘆丁的濾液 20ml ,加 Ba(OH2細(xì)粉中和至 pH7,濾除生成的 BaSO 4白色沉淀,濾液在水浴上小心濃縮近干(約 1ml 注意防止炭化,加甲醇 5ml, 作為檢識(shí)糖的樣品溶液。展開(kāi)劑:正丁醇 -醋酸 -水(4-1-5上層 。對(duì)照品

9、:葡萄糖、鼠李糖(各 2mg ,分別溶于 2ml 甲醇中展開(kāi)方式:徑向展開(kāi)顯色劑:苯胺鄰苯二甲酸鹽試劑 (或, 鄰苯甲酸苯胺 , 噴霧后, 105 加熱 35分鐘,有糖處顯棕色或棕紅色斑點(diǎn)。(2化學(xué)方法鑒別黃酮類成分a. 鹽酸 -鎂粉反應(yīng)b. 醋酸鎂反應(yīng)c. 醋酸鉛沉淀反應(yīng)d. 氧氯化鋯e. 點(diǎn)滴反應(yīng)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng) :糖的檢出 圓形濾紙層析點(diǎn)樣量不要太多。后記 :實(shí)驗(yàn)三 氧化苦參堿的提取分離與純制實(shí)驗(yàn)編號(hào):1實(shí)驗(yàn)日期:實(shí)驗(yàn)地點(diǎn):任課教師:學(xué)時(shí)數(shù):2+8實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握滲漉法和離子交換法提取生物堿的方法和原理實(shí)驗(yàn)原理:1. 生物堿溶于酸水2.陽(yáng)離子交換樹(shù)脂提取、分離生物堿實(shí)驗(yàn)對(duì)象:苦參主要儀器、試劑

10、:滲漉筒、燒杯、玻璃棒陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱、陽(yáng)離子交換樹(shù)脂、 pH 試紙、培養(yǎng)皿 0.5%鹽酸、碘化鉍鉀、蒸餾水主要操作步驟:總堿的提取:(1酸水提取:稱取 250g 風(fēng)干粉碎的苦參中加入適量 0.5%的鹽酸液,使 其浸沒(méi)藥料,充分濕潤(rùn),放置一小時(shí)。將如上酸水浸泡好的藥材及溶液裝入滲 漉筒,待全部加完,繼續(xù)補(bǔ)充加入 0.5%的鹽酸液,浸過(guò)藥面,放置過(guò)夜(此步 驟在實(shí)驗(yàn)前一天提前完成 。繼續(xù)加入 0.5%的鹽酸液或蒸餾水, (當(dāng)滲漉液的酸性過(guò)大, 改加蒸餾水滲漉, 將滲漉液的 pH 控制在 3-4之間以 1mL/min的流速進(jìn)行滲漉,收集滲漉液約 3750Ml, 到滲漉液生物堿反應(yīng)微弱為止。(2交換

11、:將上述滲漉液 pH 控制在 3-4之間,上柱交換,流速自快至慢, 流出液要經(jīng)常以碘化鉍鉀檢查,如發(fā)現(xiàn)有未被交換的生物堿流下時(shí),可調(diào)整流 速繼續(xù)進(jìn)行交換,待滲漉液全部通過(guò)樹(shù)脂后,把樹(shù)脂倒入燒杯中,用蒸餾水洗 滌數(shù)次,除去非陽(yáng)離子雜質(zhì),然后濾干,放入大培養(yǎng)皿中自然干燥。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):裝滲漉筒時(shí),藥材應(yīng)壓實(shí),盡趕空氣,滲漉筒切勿走干。當(dāng)滲漉液的酸性過(guò)大,改加蒸餾水滲漉,將滲漉液的 pH 控制在 3-4之間。 如發(fā)現(xiàn)有未被交換的生物堿流下時(shí),可調(diào)整流速繼續(xù)進(jìn)行交換。離子交換樹(shù)脂柱切勿走干。后記:(教學(xué)體會(huì)、學(xué)生對(duì)教學(xué)內(nèi)容的反應(yīng)等實(shí)驗(yàn)二 實(shí)驗(yàn)編號(hào)：2 實(shí)驗(yàn)日期： 學(xué)時(shí)數(shù)： 8 實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)： 任課教師：

12、氧化苦參堿的提取分離與純制 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)索氏提取器的使用方法 實(shí)驗(yàn)原理：1.生物堿堿化后，溶于氯仿 2.索氏提取器氯仿連續(xù)提取將生物堿從陽(yáng)離子交換樹(shù)脂上洗脫下來(lái) 實(shí)驗(yàn)對(duì)象：交換了生物堿的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂 主要儀器、試劑：索氏提取器、燒杯、水浴鍋 陽(yáng)離子交換樹(shù)脂、圓底燒瓶、冷凝管、漏斗、濾紙 濃氨水、氯仿、丙酮 主要操作步驟： 總堿的提?。?（1） 總堿洗脫： 將晾干后的樹(shù)脂放入燒杯中，加濃氨水 20mL，充分?jǐn)噭?，使?jié)駶?rùn)度合 適， （樹(shù)脂充分膨脹，但又無(wú)不吸收的過(guò)剩水份溢出）蓋好， 靜置 20 分鐘后，裝入索氏提取器中，用 300mL 氯仿在水浴上回流洗脫，至提 盡生物堿為止。回收氯仿，盡力抽

13、干。殘剩物用 2-3 倍量丙酮溶解， 盡快出現(xiàn)結(jié)晶，放置一定時(shí)間，過(guò)濾，得氧化苦參堿粗晶， （實(shí)際是 總堿）用丙酮重結(jié)晶一次，得精品。 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)： 加濃氨水 20mL，充分?jǐn)噭?，使?jié)駶?rùn)度合適，使樹(shù)脂充分膨脹，但又無(wú)不吸 收的過(guò)剩水份溢出。 索氏提取器使用時(shí)要小心，易碎裂。 后記： （教學(xué)體會(huì)、學(xué)生對(duì)教學(xué)內(nèi)容的反應(yīng)等） 實(shí)驗(yàn)二 實(shí)驗(yàn)編號(hào)：3 實(shí)驗(yàn)日期： 學(xué)時(shí)數(shù)： 8 實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)： 任課教師： 氧化苦參堿的提取分離與純制 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)使用 Al2O3 薄層、柱層析法分離鑒定生物堿的方法 實(shí)驗(yàn)原理：生物堿可以采用 Al2O3 薄層、柱層析法分離 實(shí)驗(yàn)對(duì)象：總堿粗品，Al2O3 薄層，Al2O3

14、柱層析 主要儀器、試劑：層析柱、棉花、點(diǎn)滴板、試管、玻璃板、毛細(xì)管、 Al2O3、碘化鉍鉀、圓底燒瓶、冷凝管、漏斗、濾紙 甲醇、氯仿、丙酮 主要操作步驟： 氧化苦參堿的分離與純制： 取一根洗凈干燥的 1：45 的層離柱，在下端塞一點(diǎn)棉花，倒入一些氯仿，使 棉花濕潤(rùn)，并放出氯仿液，以趕盡氣泡后，緩緩加入 30g 氧化鋁，以氯仿作媒 介濕法裝柱，最后加入拌有 200mg 氧化苦參堿精品，薄層檢查兩個(gè)點(diǎn)的少量氧 化鋁，再放入一點(diǎn)棉花，先用 30mL 氯仿，后用氯仿:甲醇（99：1）的混合溶 劑洗脫，流速控制 1mL/min，流分每 10 mL 收集一份，收集中要經(jīng)常以點(diǎn)滴板 做生物堿顯色反應(yīng)的檢查，薄層檢識(shí)后，相同流分合并，回收溶劑至干，得氧 化苦參堿部分