AU150使用CarboPacPA200測(cè)定植物提取的中性寡糖和的多聚糖

1、The world leader in servingscience雙三元液相色譜應(yīng)用DGLC-M-05在線(xiàn)固相萃取 - 高效液相色譜法測(cè)定血漿中的抗真菌藥關(guān)鍵詞：在線(xiàn)固相萃??；高效液相色譜法；抗真菌藥物；血漿引言以酮康唑?yàn)榇淼目拐婢幱糜诘挚垢鞣N真菌疾病。定量測(cè)定血漿中此類(lèi)藥物可用于治療監(jiān)測(cè)。 傳統(tǒng)測(cè)定血漿中此類(lèi)藥物一般要經(jīng)過(guò)沉淀蛋白/離心，液液萃取， 過(guò)濾以及離線(xiàn)SPE處理，操作繁瑣、費(fèi)時(shí)，樣品通量低，費(fèi)用高昂。目前，在線(xiàn)SPE-HPLC 技術(shù)正好可以克服上訴缺點(diǎn)。本文描述了Dionex 公司提供的在線(xiàn)SPE-HPLC 技術(shù)測(cè)定血漿中抗真菌藥物的方法。測(cè)試條件儀器： Ultimate D

2、GP 3600 系列，包括有帶在線(xiàn)脫氣單元的雙三元梯度泵；配有2500 L半制備進(jìn)樣組件的自動(dòng)進(jìn)樣器；帶有一個(gè)六通閥的柱溫箱；紫外檢測(cè)器。在線(xiàn)過(guò)濾裝置：FK7400（ Recipe GmbH ，德國(guó)慕尼黑）分析柱 : Acclaim 120 C8 ， 3 m， 150×4.6 mm保護(hù)柱： Acclaim 120C8， 5m， 10×4.3 mm富集柱 : LiChrospher ADS RP-4 ， 25 m, 25 ×4 mm，截留分子量 15000道爾頓柱溫： 40；檢測(cè)波長(zhǎng)： 260nm ；進(jìn)樣量： 100uL ；淋洗液組成及流速：見(jiàn)表1；梯度淋洗條件：見(jiàn)

3、表2。表 1淋洗液組成及流速left pump （分析泵）right pump （富集泵）流動(dòng)相 A純水流動(dòng)相 B乙腈流動(dòng)相 C0.01 mol/L 醋酸銨表 2梯度淋洗條件時(shí)間Left Pump ( 分析泵 )Right Pump ( 富集泵 )閥On-line SPE Applications第 1 頁(yè)兩個(gè)梯度泵中， 一個(gè)梯度泵用來(lái)做流速流速(min)A%B%C%A%B %C%(mL/min)(mL/min)0.00455598202.00455521-22.11-69.00851598209.11.219001010.0045551090010.19821-20130455522098樣

4、品前處理方法血漿樣品保存在-20冰箱中，分析前在15000g 下離心 10min 。取上清液，待測(cè)。結(jié)論該方法需要兩種關(guān)鍵技術(shù)：一是需要采用限制性媒介固相萃?。?RAM-SPE ）小柱。此種小柱的填料為多孔硅膠或者交聯(lián)聚合物，具有體積排阻（ SEC）和反相作用（ RP），能夠阻擋血漿中大分子（如蛋白質(zhì)，核酸， 多糖）進(jìn)入分析柱并同時(shí)保留藥物成分， 從而降低血漿中大分子的干擾并延長(zhǎng)分析柱壽命。二是需要兩個(gè)梯度泵以及能與之相應(yīng)的色譜工作站。on-line SPE ；一個(gè)泵用來(lái)平衡分析柱并進(jìn)行分析。色譜工作站要能夠滿(mǎn)足控制雙泵協(xié)同作用、控制閥切換等功能。而戴安公司的雙三元高效液相色譜儀以及Choro

5、meleon 色譜工作站恰恰能滿(mǎn)足這個(gè)要求。在線(xiàn) SPE-HPLC 的基本過(guò)程如圖1：樣品首先載入SPE 柱上進(jìn)行凈化富集（圖1 左），凈化富集完畢后轉(zhuǎn)移到分析柱上（圖1 中），然后進(jìn)行分離檢測(cè)（圖 1 右）。圖1 典型的 On-line SPE-HPLC 過(guò)程本方法可以使血漿中的四種抗菌素：酮康唑，伏立康唑，伊曲康唑以及其代謝產(chǎn)物1-羥基伊曲康唑在 13min 中內(nèi)完成分離（圖 2.圖 3）。使用 RAM-SPE 固相萃取柱，以每針進(jìn)樣100uL 體積計(jì)，可以重復(fù)進(jìn)樣300 次。On-line SPE Applications第 2 頁(yè)1 伏立康唑1015ug/L; 2酮康唑980ug/L; 31- 羥基伊曲康唑1254ug/L; 4伊曲康唑1327ug/L圖 2 空白血漿加標(biāo)色譜圖1 伏立康唑322.9