微生物量碳的測定方法

1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上氯仿薰蒸浸提法測定土壤微生物生物量碳一、采樣與樣品預處理土壤樣品的采集方法和要求與測定其它土壤性質時沒有本質區(qū)別。采集到的新鮮土壤樣品立即去除植物殘體、根系和可見的土壤動物(如蚯蚓)等,然后迅速過篩(23 mm)，或放在低溫下(24)保存。如果土壤太濕無法過篩，進行晾干時，必須經常翻動土壤，避免局部風干導致微生物死亡。過篩的土壤樣品調節(jié)到田間持水量的50%左右，在室溫下于密閉裝置中預培養(yǎng)1周，密閉容器中要放入兩個50mL的燒杯，分別加入水和稀NaOH，以保持其濕度和吸收釋放的CO2。預培養(yǎng)后的土壤最好立即分析，若需要放置一段時間，在低溫下(24)最好不要超過10d。土

2、壤田間持水量采用改進的Shaw（1958）方法測定。在漏斗下端連接一帶夾子的橡膠管，漏斗用玻璃纖維堵塞。取50.00 g土壤于漏斗中，夾緊橡膠管，加入50 ml水，保持30 min，再打開夾子使多余的水流入量筒，30 min后測定流出的水量，同時測定土壤濕度，計算土壤田間持水量，用烘干土壤質量表示。林啟美老師文件內容二、方法氯仿薰蒸浸提法（FE）1、方法原理土壤經氯仿薰蒸處理，微生物被殺死，細胞破裂后，細胞內容物釋放到土壤中，導致土壤中的可提取的碳大幅度增加。通過測定浸提液中全碳的含量可以計算土壤微生物量碳。浸提液中碳可用重鉻酸鉀容量法測定，也可用微量碳分析儀測定。此處介紹比較簡單的重鉻酸鉀容

3、量方法。2、儀器及設備培養(yǎng)箱；真空干燥器；真空泵；往復式振蕩機(速率200rev/min)；冰柜；磷酸浴。3、試劑1. 無乙醇氯仿：量取500 mL 氯仿于1000 mL的分液漏斗中，加入50mL硫酸溶液j(H2SO4)=5%，充分搖勻，棄除上層硫酸溶液，如此進行3次。再加入50 mL去離子水，同上搖勻，棄去上部的水分，如此進行5次。得到純氯仿存放在棕色瓶中，并加入約20g無水K2CO3，在冰箱的冷藏室中保存?zhèn)溆?。（試劑濃硫?j(H2SO4)=9598% ，稀釋19倍）2. 硫酸鉀溶液c(K2SO4)= 0.5 molL-1: 稱取硫酸鉀（K2SO4,化學純）87.10g，加熱溶于去離子水中

4、，稀釋至1L。(需加熱溶解)3. 重鉻酸鉀c(1/6K2Cr2O7)=0.2000 molL-1: 稱取經130 oC烘干23h的重鉻酸鉀（K2Cr2O7，分析純）9.8110g，溶于1000mL的去離子水中。4. 重鉻酸鉀標準溶液：c(1/6K2Cr2O7)=0.1000 molL-1: 稱取經130 oC烘干23h的重鉻酸鉀（K2Cr2O7，分析純）4.9055g，溶于1000mL的去離子水中。5. 鄰啡羅啉指示劑：稱取鄰啡羅啉指示劑C12H8N2H2O，分析純1.49g，溶于含有0.70g FeSO47H2O的100mL去離子水中，密閉保存于棕色瓶中。6. 硫酸亞鐵溶液c(FeSO4)=

5、0.05 molL-1：稱取硫酸亞鐵(FeSO47H2O)約13.9005g，溶解于600800mL去離子水中，加濃硫酸（化學純）20mL，攪拌均勻，定容至1000mL，于棕色瓶中保存。此溶液不穩(wěn)定，需在用時每天標定其濃度。7. 硫酸亞鐵溶液濃度的標定： 吸取重鉻酸鉀標準溶液5.00mL，放入100mL三角瓶中，加水約20mL,加濃硫酸5mL和鄰啡羅啉指示劑2滴，用FeSO4溶液滴定，根據(jù)FeSO4溶液的消耗量即可計算FeSO4溶液的準確濃度。硫酸亞鐵溶液標定方法：吸取0.1000 mol L-1（1/6 K2Cr2O7）標準溶液(試劑4)5.0ml，放入150ml三角瓶中，加濃硫酸5ml和鄰

6、啡羅啉指示劑2滴，用硫酸亞鐵溶液滴定，滴至溶液由藍綠色變?yōu)樽丶t色即為終點。根據(jù)滴到終點消耗的硫酸亞鐵溶液量計算其準確濃度，即C2 =（C1 V1）/ V2。式中：C1重鉻酸鉀標準溶液濃度（0.1000mol L-1）；C2硫酸亞鐵標準溶液濃度（mol L-1）；V1吸取的重鉻酸鉀標準溶液體積（5ml）；V2滴到終點時消耗硫酸亞鐵溶液體積（ml）。4、操作步驟4.1薰蒸 稱取相當于20.0g烘干土重的濕潤土壤3份，分別放在約100 mL的燒杯中，一起放入同一干燥器中，干燥器底部放置小燒杯盛裝少量的水以保持濕度，同時放入一個裝有50mL NaOH溶液和一個裝有約50mL的無乙醇氯仿的小燒杯(根據(jù)干

7、燥器的大小可以增加氯仿的用量，同時加入少量的直徑約為0.5mm的碎瓷片)，用少量凡士林密封干燥器，用真空泵抽氣至氯仿沸騰并保持至少2 min。關閉干燥器的閥門，在25oC的黑暗條件下放置24h。打開閥門，如果沒有空氣流動的聲音，表示干燥器漏氣，應重新稱樣進行薰蒸處理。當干燥器不漏氣時，取出裝有水、堿液和氯仿的燒杯，氯仿倒回瓶中可重復使用。擦盡干燥器底部，用真空泵反復抽氣，每一次都要打開干燥器，以加快除去氯仿的速度，直到土壤聞不到氯仿氣味為止。薰蒸開始的同時，稱取等量土壤3份，用K2SO4溶液(見下一步驟，試劑2)浸提，同時做不加土壤為空白對照。浸提液在室溫下可以放置1周，4下放置1個月或在-1

8、5oC下保存。4.2浸提 薰蒸結束后，將土壤全部轉移到250 mL的塑料震蕩瓶中，加入80 mL 0.5mol/LK2SO4溶液(1:4水土比)，在振蕩機上振蕩浸提30min（25，185 rev/min）（轉速根據(jù)儀器進行調整，必須使得土壤完全振蕩開,過濾。4.3測定 準確吸取浸出液10.00 mL放入硬質消煮管中，加入重鉻酸鉀標準溶液(試劑3)5.00 mL、濃H2SO4 5mL，加入少量的抗暴物質,在170-180磷酸浴上煮沸10min，冷卻后用去離子水洗滌消化管全部轉移至150mL三角瓶中，總體積為70mL左右，。加入2滴鄰啡羅啉指示劑，用硫酸亞鐵溶液(試劑6)滴定剩余的K2Cr2O7。溶液顏色由橙黃色變?yōu)樗{綠色，再變?yōu)樽丶t色即為滴定終點。4.4 測定土壤含水量稱5.00g 上述濕潤土壤，放在鋁盒中，在105烘箱中烘8h，然后稱其干重。5、結果計算1.有機碳(Oc)的計算W(C) =（V0-V1）c3ts 1000 /DW 式中：W(C) 有機碳(Oc)質量分數(shù)，mgkg-1； V0 滴定空白樣時所消耗的FeSO4體積，mL； V1 滴定樣品時所消耗的FeSO4體積,mL； c FeSO4溶液的濃度,molL-1； 3 碳(1/4C)的毫摩爾質量，M(1/4C)=3mg/mmol； 1000 轉換為kg的系數(shù)；