抗腫瘤指導(dǎo)原則

1、抗腫瘤藥物藥效學(xué)指導(dǎo)原則A_m2%Mv&g0eJl1g"g*L0一、基本原則"nj%bg)01. 抗腫瘤藥物分類我的研究-首頁(yè)"IY1i dCX9ga(1) 細(xì)胞毒類藥物(cytotoxic agent)：包括干擾核酸和蛋白質(zhì)合成、抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶及作用于微管系統(tǒng)的藥物等；我的研究-首頁(yè):G;I:sd l Tk(2) 生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑(biological response modifier)；G8JUh"CM0(3) 腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑(resistance reversal agent)；,q2s-o-MG0(4) 腫瘤治療增敏劑(oncothera

2、py sensitizer)；4R4w"nD0F0(5) 腫瘤血管生成抑制劑(tumor angiogenesis inhibitor)；我的研究-首頁(yè)q tX&ojXN(6) 分化誘導(dǎo)劑(differentiation inducing agent)；R_v!h$S"? G3z D0(7) 生長(zhǎng)因子抑制劑(growth factor inhibitor)；我的研究-首頁(yè)A!Ro+Y1m6eIn(8) 反義寡核苷酸(antisense oligonucleotide) 。我的研究-首頁(yè)9b B/a'j4W&n:d;uq3z02. 抗腫瘤藥物藥效學(xué)需研

3、究?jī)?nèi)容%|eoB,S3Q!X)T F02.1   包括體外抗腫瘤試驗(yàn)，體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)。我的研究-首頁(yè)hNn0rYG2.2   評(píng)價(jià)藥物的抗癌活性時(shí)，以體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果為主，同時(shí)參考體外試驗(yàn)結(jié)果以做出正確的結(jié)論。我的研究-首頁(yè)j0B2AQ MS,p K2.3   I類抗腫瘤新藥應(yīng)進(jìn)行藥物作用機(jī)制初步研究。 我的研究-首頁(yè)XJ2T0 IF我的研究-首頁(yè)_.tbK B"h(y2I二、體外抗腫瘤活性試驗(yàn)我的研究-首頁(yè)*-f t!L.S,k1. 試驗(yàn)?zāi)康?我的研究-首頁(yè)H0y!?_7O5N9af3C)1.1 對(duì)候選化合物進(jìn)行初步篩選；我的

4、研究-首頁(yè)t!X;S.,kA/U|y9p1.2 了解候選化合物的抗瘤譜；,LnG5jD'T01.3 為隨后進(jìn)行的體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)提供參考，如劑量范圍、腫瘤類別等 。 q ;*wx Yl0我的研究-首頁(yè)o JtUTVo X9Z2. 試驗(yàn)方法5o$Q Kd3O P0選用10-15株人癌細(xì)胞株，根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康倪x擇相應(yīng)細(xì)胞系及適量的細(xì)胞接種濃度，按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)；推薦使用四氮唑鹽MTT還原法、XTT 還原法、磺酰羅丹明B染色法、或51Cr釋放試驗(yàn)、集落形成法等測(cè)定藥物的抗癌作用。藥物與細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)間一般為48-72 小時(shí)，貼壁細(xì)胞需先貼壁24 小時(shí)后再給藥。試驗(yàn)應(yīng)設(shè)陽(yáng)性及陰性對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)

5、照用一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗腫瘤藥，陰性對(duì)照為溶媒對(duì)照。 enE0iW1yk0我的研究-首頁(yè)4u8H?QnHs;,A3. 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)我的研究-首頁(yè) NF 2c-t0K$N以同一樣品不同濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制率作圖可得到劑量效應(yīng)曲線，然后采用Logit法計(jì)算半數(shù)有效濃度(IC50值或EC50值)。體外試驗(yàn)至少重復(fù)一次。我的研究-首頁(yè)o?0Pe1DuT4l我的研究-首頁(yè)+ih sEP"bkB附注：評(píng)價(jià)藥物抗癌活性的方法：65Pyc4To%v1c01.  MTT還原法我的研究-首頁(yè) fxQ Z'?rQ,Q1.1   基本原理： #?h#E+1U mZ

6、9;t$w.cy0四氮唑MTT,3-(4,5-dimethylibiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide是一種能接受氫原子的染料?；罴?xì)胞線粒體中與NADP相關(guān)的脫氫酶在細(xì)胞內(nèi)可將黃色的MTT轉(zhuǎn)化成不溶性的藍(lán)紫色的甲月替 (formazan)，而死的細(xì)胞則無(wú)此功能。用二甲基亞諷(DMSO)溶解甲月替后，在一定波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀測(cè)定光密度值，即可定量測(cè)出細(xì)胞的存活率。GNke1L L7M lOe601.2 操作步驟:我的研究-首頁(yè)pH$ZZG!M&x:CZ j1.2.1選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的貼壁腫瘤細(xì)胞，用胰酶消化后，用含10小牛血清的RPMI l6

7、40培養(yǎng)基配成5000個(gè)ml的細(xì)胞懸液，接種在96孔培養(yǎng)板中，每孔接種200l，37，5CO2 培養(yǎng)24 h。+K0I)p bs:D;b0r"dl01.2.2 實(shí)驗(yàn)組換新的含不同濃度被測(cè)樣品的培養(yǎng)基，對(duì)照組則換含等體積溶劑的培養(yǎng)基，每組設(shè)35平行孔，37，5CO2 培養(yǎng)45 d。s!W6d1_|01.2.3 棄去上清液，每孔加入200 l新鮮配制的含0.2 mgml MTT的無(wú)血清培養(yǎng)基37繼續(xù)培養(yǎng)4 h。小心棄上清，并加入200 l DMSO，用微型超聲振蕩器混勻后，在酶標(biāo)儀上以試驗(yàn)波長(zhǎng)為570 nm，參比波長(zhǎng)為450 nm測(cè)定光密度值。我的研究-首頁(yè)9g6q m5t1.3 結(jié)果評(píng)

8、定:YoW20按下式計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率：?|O4f8n0腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(1- OD實(shí)驗(yàn)/OD對(duì)照) ×100hX9MwzIC0fEm0以同一樣品的不同濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率作圖可得到劑量反應(yīng)曲線，從中求出樣品的半數(shù)殺傷濃度IC50。合成化合物或植物提取純品的IC5010 gm1或植物粗提物的IC5020 gm1時(shí)，則判斷樣品在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用。我的研究-首頁(yè) DDW_gE5E'Al$P.n+_02. 生長(zhǎng)曲線法的基本原理：5c"X EI3OMK0在最適條件下，腫瘤細(xì)胞在培養(yǎng)液中呈指數(shù)生長(zhǎng)，如取細(xì)胞數(shù)的對(duì)數(shù)與培養(yǎng)時(shí)間作圖可得一條直線，故稱此時(shí)

9、為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。隨著細(xì)胞密度不斷增高，由于代謝產(chǎn)物的積聚及營(yíng)養(yǎng)物的消耗，細(xì)胞生長(zhǎng)逐漸減慢以致停止，此時(shí)稱高坪期或穩(wěn)定期。因此藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響可通過(guò)生長(zhǎng)曲線反映出來(lái)。#h,yw1w2n0我的研究-首頁(yè)$U oS;Z+t(O&LH3. 染料排斥試驗(yàn)的基本原理：我的研究-首頁(yè)V5G,7A7j:w活細(xì)胞有排斥某些染料如伊紅、臺(tái)盼藍(lán)、苯胺黑等的能力，而死細(xì)胞由于膜完整性的破壞，可被著色。因此培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞中加入這些染料，一定時(shí)間后，對(duì)著色和未著色的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，即可算出被殺死的細(xì)胞比例。我的研究-首頁(yè)P(yáng)g+J/K&S2y tAP8aID 8|04. 集落形成法的基本原理：Nd8o e!

10、eo0克隆原細(xì)胞具有持續(xù)增殖能力，當(dāng)單個(gè)細(xì)胞分裂6代或6代以上時(shí)，其后代所組成的群體(集落)便含50個(gè)以上細(xì)胞。通過(guò)集落計(jì)數(shù)可對(duì)克隆原細(xì)胞作定量分析。它反映了單個(gè)細(xì)胞的增殖潛力，故能較靈敏地測(cè)定抗癌藥的活性，日前被認(rèn)為是一種較理想的檢測(cè)方法。常用的集落形成法可分為貼壁法及半固體培養(yǎng)法兩種。我的研究-首頁(yè)p0UnHtfv x du.r:qt05. SRB法的基本原理：我的研究-首頁(yè) TgZw UDSRB(sulforhodamine 是一種蛋白質(zhì)結(jié)合染料，粉紅色，可溶于水。 SRB可與生物大分子中的堿性氨基酸結(jié)合。其在515 nm波長(zhǎng)的OD讀數(shù)與細(xì)胞數(shù)呈良好的線性關(guān)系。故可用作細(xì)胞數(shù)的定量。MT

11、T法的一個(gè)缺點(diǎn)是OD值可隨放置時(shí)間而變，而SRB法無(wú)此現(xiàn)象。因此更適用于進(jìn)行大規(guī)模的試驗(yàn)。3Hj $o+PLk0三、體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)9eo'V'h/r. n 0體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)必須選用三種以上腫瘤模型，其中至少一種為人癌裸小鼠移植模型或其它人癌小鼠模型。試驗(yàn)結(jié)果三種模型均為有效，再重復(fù)一次也為有效，評(píng)定該化合物對(duì)這些實(shí)驗(yàn)性腫瘤具有治療作用。 我的研究-首頁(yè)$P: Fq0B&b鼓勵(lì)使用人類腫瘤裸鼠移植瘤模型和多種類的移植瘤模型、原位接種模型和中空纖維測(cè)定(hollow-fiber assay)等方法。%fu.pa'(l0我的研究-首頁(yè),K/DP.e4Xh1. 動(dòng)物0w

12、7ZY2z0動(dòng)物要求健康，符合等級(jí)動(dòng)物要求，有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證。雌雄均可，但同一批實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物性別必須相同。小鼠鼠齡為5-6周，體重為18-22克。評(píng)價(jià)同一物質(zhì)的活性時(shí)，不同批次的實(shí)驗(yàn)必須采用同一品系的小鼠。 我的研究-首頁(yè),Z&Cbb$J)Z我的研究-首頁(yè)Urhs#odV/2. 腫瘤模型我的研究-首頁(yè) P g)a#TB;U:f)v"d2.1   小鼠腫瘤模型 我的研究-首頁(yè).g'|/L.RI+D u淋巴細(xì)胞白血病腹水瘤L1210和P388、白血病L-615、宮頸癌U14、肝癌H22、Lewis肺癌、黑色素瘤B16、網(wǎng)織細(xì)胞瘤M5076、腸癌26、腸腺

13、癌38、乳腺癌CD8F1、艾氏腹水瘤（EAC）、肉瘤-180等，以及各種小鼠腫瘤的亞型和耐藥株等。 我的研究-首頁(yè)-G2kG&M o?vB.bF76xK9v u G|02.2 人癌裸小鼠移植瘤模型 我的研究-首頁(yè)G,XB4k(bZ(|6a應(yīng)選用體外試驗(yàn)敏感細(xì)胞株進(jìn)行體內(nèi)抗人癌裸小鼠移植瘤試驗(yàn)。 模型建立和使用應(yīng)注意：我的研究-首頁(yè)U z1ueqqQ)da(1)  移植瘤一般由相應(yīng)的細(xì)胞株移植而建立，對(duì)細(xì)胞株和移植瘤的化療敏感性應(yīng)予了解。.ww+r'X abFN0(2)  移植瘤復(fù)蘇后一般應(yīng)傳2-3代后再用于體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)。#H;/X0U;

14、tkG0(3)  對(duì)模型生長(zhǎng)情況應(yīng)全面了解，尤其是生長(zhǎng)快的模型我的研究-首頁(yè)2t TI4j+iyq(4)  為了保持移植瘤的生物學(xué)特性和遺傳特性，復(fù)蘇后移植瘤體內(nèi)傳代應(yīng)少于 15-20代 5F#%M/p(H-Tj"j H*|0我的研究-首頁(yè)$?'+Y l eH3. 試驗(yàn)過(guò)程QDhM|*L:_ H"KB03.1 接種：我的研究-首頁(yè)5V$s8e%PW腫瘤接種方法主要有皮下接種、腹腔接種和原位接種。 我的研究-首頁(yè)k+P%66YB%l3.1.1 皮下腫瘤模型我的研究-首頁(yè)1A5LmMWD.l7l:R選擇腫瘤生長(zhǎng)旺盛且無(wú)潰破的荷瘤小

15、鼠，頸椎脫臼處死，在無(wú)菌條件下（超凈臺(tái)或接種罩），用碘酒、酒精或新潔爾滅消毒動(dòng)物皮膚，切開皮膚，剝離腫瘤。將瘤組織剪成1.5 mm3左右，用套管針接種于動(dòng)物一側(cè)或雙側(cè)腋窩皮下；或制成細(xì)胞懸液，然后按一定比例加入無(wú)菌生理鹽水，一般每只小鼠接種腫瘤細(xì)胞數(shù)量為（1-5）×106。 我的研究-首頁(yè)3w&|Lb)g我的研究-首頁(yè):m Bm$T/d3.1.2 腹水瘤模型我的研究-首頁(yè)a/f G$Kl#N ws Tzq無(wú)菌條件下，消毒動(dòng)物皮膚，吸取生長(zhǎng)良好的動(dòng)物腹水，以生理鹽水按一定比例稀釋后接種于動(dòng)物腹腔，接種細(xì)胞數(shù)量一般為（1-5）×106。i$S3J,G6cN)04To-m

16、r#D(w 03.1.3 原位接種模型s#Z"El |k P0原位接種是指將來(lái)源于某臟器的腫瘤接種在動(dòng)物的某臟器，如將人肝癌接種在裸小鼠的肝臟。原位接種不是常規(guī)的方法，但有其優(yōu)越性，是鼓勵(lì)使用的方法。主要有肺、肝、胃、腸、乳腺、顱內(nèi)等原位接種方法。我的研究-首頁(yè)'|ajVx我的研究-首頁(yè)j'&O%zxs3.2 動(dòng)物分組'y Wm+E$H.JG03.2.1 試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、治療組。w;f.PEfm2h-a03.2.2 治療組設(shè)高、中、低三個(gè)劑量組。小鼠腫瘤和腹水瘤接種后次日將動(dòng)物隨機(jī)分組，裸鼠移植瘤用游標(biāo)卡尺測(cè)量移植瘤直徑，待腫瘤生長(zhǎng)至10

17、0300mm3后將動(dòng)物隨機(jī)分組。我的研究-首頁(yè):K1D|q'o EM O3.2.3  動(dòng)物數(shù)普通小鼠每組10只，裸鼠6只。 陰性對(duì)照組動(dòng)物數(shù)為治療組動(dòng)物數(shù)×實(shí)驗(yàn)組數(shù)1/2我的研究-首頁(yè)D;yExC+d我的研究-首頁(yè)-jDhmR"mS 3.3 劑量設(shè)置qz+|%Pb n nt/S3w03.3.1 治療組設(shè)高、中、低劑量治療組，一般按4:2:1設(shè)置，高劑量使用最大耐受量或LD10的劑量。TQI%n+ds8 +03.3.2  陰性對(duì)照組給予相應(yīng)的溶劑；我的研究-首頁(yè))S ta(S.x.L3.3.3  陽(yáng)性對(duì)照藥選

18、用對(duì)該動(dòng)物敏感的、臨床應(yīng)用的抗腫瘤藥物，Y1xL N|Id+D03.3.4  如受試物為一抗癌藥物的衍生物或類似物時(shí)，必須選用該抗癌藥物作為陽(yáng)性對(duì)照藥。 我的研究-首頁(yè)K Y6Z lB:c0!F我的研究-首頁(yè):V9F#gE/uu13.4 陽(yáng)性對(duì)照藥選擇原則Nm9I|k2H2c;v/G0療效確切；與被試物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)類似；與被試物質(zhì)有類似的作用機(jī)理。aO mEww40te v"BT$O.y03.5 藥物配制7x2J#JI#3P+G.R0溶于水的藥物，用生理鹽水或蒸餾水配制；如用酸、堿溶解者，可先用小量酸(0.1-0.5N HCl)或堿(NaHCO3、Na2CO3、Na

19、OH)溶解，調(diào)節(jié)pH在4.5-9.0的范圍內(nèi)。用乙醇、丙二醇、吐溫80、DMSO助溶的藥物，或用吐溫60、吐溫80、2-3%淀粉、0.5%羧甲基纖維素制成混懸液的藥物，可腹腔注射或口服，但必須設(shè)相同濃度的溶劑對(duì)照組。用注射用花生油配制的溶液或乳劑可口服、皮下或肌肉注射。我的研究-首頁(yè)q+g5Jo.Oas'Wpg P:tdY|G03.6 給藥方案和給藥途徑我的研究-首頁(yè)qvPd(Af"n分組當(dāng)日開始給藥，根據(jù)不同藥物的代謝動(dòng)力學(xué)和毒性反應(yīng)等確定給藥方案。給藥途徑應(yīng)與推薦臨床用藥的途徑相同。 給藥次數(shù)較多，或被試物質(zhì)溶解性較差，靜脈給藥有困難時(shí)，可考慮使用腹腔給藥，但在評(píng)價(jià)藥效時(shí)

20、要注意這兩種給藥途徑是有差別的。 可采取瘤周、瘤內(nèi)、肌肉、皮下給藥途徑。腹水瘤試驗(yàn)時(shí)一般不能應(yīng)用腹腔給藥途徑。 Eb/Q$Q$?g.x0&F0我的研究-首頁(yè)v:x2Kp$8d3Y oG4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) &CY|gX04.1 腹水瘤模型我的研究-首頁(yè)#f0C'f#V%cg接種給藥后，觀察和記錄動(dòng)物死亡時(shí)間，計(jì)算生存天數(shù)。如陰性對(duì)照組20%動(dòng)物存活時(shí)間超過(guò)4周，表明腹水瘤生長(zhǎng)不良，實(shí)驗(yàn)作廢。1ICMzo5k%zz:L0采用中位生存時(shí)間（即median survival time,MST）來(lái)評(píng)價(jià)每組的生存時(shí)間 ，其計(jì)算公式為： 我的研究-首頁(yè):sfgEQJ:我的研究-首頁(yè)J+b.

21、C7GA l(t每組鼠數(shù)的中間數(shù)-中間生存天數(shù)前死亡的鼠數(shù)我的研究-首頁(yè)(m|;d(s I(apMST=（中間生存天數(shù)-0.5）+"0inG0中間生存天數(shù)死亡的鼠數(shù)我的研究-首頁(yè)"sEV(|4u!j'b8HKb|.Y$Hg0治療組與對(duì)照組的比較，采用T/C（%）來(lái)表示，計(jì)算公式為：&Jw&F j4c5Q.af:P0             T MST我的研究-首頁(yè)5s,nM+yK!P4 MHx$ xT/C % = ×100

22、%我的研究-首頁(yè)/w*Ezx-F             C MST我的研究-首頁(yè)w,H J*E:_ r.FT MST：治療組MST ；C MST：陰性對(duì)照組MST。我的研究-首頁(yè)0t+X5F+|1Bst評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以125%為界，當(dāng)T/C%125% 時(shí)。視為有效，反之則無(wú)效。我的研究-首頁(yè)(a Q qG/n9+E%XX/NmUG04.2 裸鼠移植瘤模型f!L:d9X3q0推薦使用測(cè)量瘤徑的方法，動(dòng)態(tài)觀察受試物抗腫瘤的效應(yīng)。腫瘤直徑的測(cè)量次數(shù)根據(jù)移植瘤的生長(zhǎng)情況而定，一般為每周2

23、-3次,每次測(cè)量同時(shí)還需稱鼠重。 W-Xhzv4p$m"q7D0腫瘤體積(tumor volume,TV)的計(jì)算公式為：i/X7Zs V;x v4D0V = 1/2×a×b2 或/6×a×b×c我的研究-首頁(yè) )E%A0Z'Q其中a、b、c分別表示長(zhǎng)寬高。兩公式的相關(guān)性極好，可采用任一公式。:n(Y9XA p0根據(jù)測(cè)量結(jié)果計(jì)算出相對(duì)腫瘤體積（relative tumor volume，RTV）， RTV = Vt / V0。其中V0為分籠給藥時(shí)(即d0)測(cè)量所得腫瘤體積，Vt為每一次測(cè)量時(shí)的腫瘤體積。我的研究-首頁(yè)5hQ P7

24、hr8k&Y9|抗腫瘤活性評(píng)價(jià)指標(biāo)為相對(duì)腫瘤增殖率T/C（%）      我的研究-首頁(yè)+jrEj,V)Nyb|d我的研究-首頁(yè)-cQ;o&pR&Vh              TRTVE N-V)9F0T/C % = ×100%我的研究-首頁(yè))yKy1x0ow:K         &

25、#160;    CRTV_U!u(N%Gx kX b8T l,p%tb)e0;b#NJ fSs;g7q0TRTV：治療組RTV ；CRTV：陰性對(duì)照組RTV。我的研究-首頁(yè)Y3P3vz.Q"w-k療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：T/C % >40 %為無(wú)效；T/C % 40%，并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P<0.05為有效。 我的研究-首頁(yè)h0F/A O7C9nd%rToA Dz"a6i_04.3 小鼠腫瘤模型0G yQh%xz)k0生長(zhǎng)較慢小鼠腫瘤采用與裸鼠移植瘤同樣的測(cè)量瘤徑的評(píng)價(jià)方法。D E ffdNE%B0生長(zhǎng)較快小鼠腫瘤可采用稱瘤重的方法評(píng)價(jià)。試驗(yàn)結(jié)束

26、后處死動(dòng)物，稱體重，解剖剝離瘤塊，稱瘤重。陰性對(duì)照組腫瘤平均瘤重小于1克，或20%腫瘤重量小于400毫克，表示腫瘤生長(zhǎng)不良，試驗(yàn)作廢。我的研究-首頁(yè)e#S8j/U0U療效評(píng)價(jià)公式：Y1h/cy|/YA0                                  

27、 給藥組平均瘤重-陰性對(duì)照組平均瘤重le hm#nL.LF,f0腫瘤生長(zhǎng)抑制率 = ×100%L0c(Pj D0                                        

28、;         陰性對(duì)照組平均瘤重 我的研究-首頁(yè)$8e:?b!X kSw我的研究-首頁(yè)'Pb37dd,T&nP#x8T"Y'?評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：%c%EP0y;x0N0腫瘤生長(zhǎng)抑制率<40% 為無(wú)效；腫瘤生長(zhǎng)抑制率40%，并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P<0.05為有效。我的研究-首頁(yè),o2h XM1mVw7E-o9xY/wkU04.4 原位接種模型我的研究-首頁(yè)"d0j %n+O不同原位接種模型可采用不同評(píng)價(jià)方法，主要有瘤重和生存時(shí)間評(píng)價(jià)法。如肝原位接種可用瘤重評(píng)價(jià)，顱內(nèi)接種

29、可用生存時(shí)間評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)方法、標(biāo)準(zhǔn)和注意事項(xiàng)同腹水瘤模型和小鼠腫瘤模型。ZF7zIh x9i0我的研究-首頁(yè)-W q*JAtZ+L7O#r2y;四、抗腫瘤藥物的特殊要求3dqW3v&p0I類抗腫瘤新藥應(yīng)進(jìn)行藥物作用機(jī)制的初步研究。非細(xì)胞毒類藥物除完成體內(nèi)外抗腫瘤試驗(yàn)，還應(yīng)進(jìn)行特定抗腫瘤作用研究。 E;q!c.SY'V)BE01. 生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑jFwKZ0藥效學(xué)包括 ：體內(nèi)抗癌試驗(yàn)和免疫功能研究。p _(v;nQMU01.1   體內(nèi)抗癌試驗(yàn)注意點(diǎn)：wR4C QX#ZZHr0模型：裸鼠是免疫缺陷動(dòng)物，一般應(yīng)用正常免疫鼠腫瘤模型。;zpq"bpi0給藥

30、時(shí)間：可按常規(guī)給藥，也可在接種前預(yù)先給藥，接種后繼續(xù)給藥或停藥。(k;y5c6i+0105個(gè)瘤細(xì)胞/小鼠。´腫瘤細(xì)胞接種量：可比細(xì)胞毒類藥物低一個(gè)數(shù)量級(jí)，一般為(1-5)我的研究-首頁(yè)C6F|QNp'給藥方法：可單獨(dú)給藥，也可與其它抗腫瘤藥物合并使用，觀察增效或減毒作用。我的研究-首頁(yè)0F" GMd9u/y2我的研究-首頁(yè),Pl;z3yq f9V1.2   免疫功能試驗(yàn)方法 我的研究-首頁(yè)i7lfO具有抑瘤作用的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，還需作免疫功能測(cè)定,以明確其抑瘤作用是否與免疫功能調(diào)控有關(guān)。免疫功能測(cè)定包括細(xì)胞免疫和體液免疫兩方面。 我的研究-首頁(yè)

31、y0taF9a6Q/t%K_ J免疫功能測(cè)定有：我的研究-首頁(yè)'I9u cm4&E（1）  巨噬細(xì)胞功能測(cè)定)FqJH4p3c0（2）  天然殺傷細(xì)胞(natural kill cell) 測(cè)定我的研究-首頁(yè)SC.yy6O!G（3）  淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)4ltbG-'Z0（4）  淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞測(cè)定(lymphocyte- activated killer cell)我的研究-首頁(yè)EkpQOi1F a（5）  各種細(xì)胞因子測(cè)定，如IL-2、IL-6、IL-12、IF

32、N-、TNF-等。!tmmVN0（6）  遲發(fā)型超敏反應(yīng)檢測(cè)9N v)k!g:yk q0我的研究-首頁(yè)1?gE+m+QS_;j2. 腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑l J3m"UR02.1   體外抗耐藥活性試驗(yàn) 我的研究-首頁(yè)v&B4YX選擇2-3對(duì)腫瘤耐藥/敏感細(xì)胞株，采用MTT法或SRB法測(cè)定細(xì)胞毒性。一般在無(wú)毒劑量或相當(dāng)于IC10的劑量下設(shè)三個(gè)劑量，并設(shè)立相應(yīng)的陽(yáng)性和陰性對(duì)照組。評(píng)價(jià)逆轉(zhuǎn)效果用逆轉(zhuǎn)倍數(shù)(fold reversal, FR)表示：FR=IC50(不加逆轉(zhuǎn)劑)/IC50(加逆轉(zhuǎn)劑)。Z9M G2:_Z0我的研究-首頁(yè)3vX 7z/l#

33、V$hV;hOg1注意的方面：sJ a+L3|7d_Su0耐藥株的耐藥性：耐藥株因傳代，尤其是撤藥后耐藥性可改變或消失；試驗(yàn)前必須對(duì)試驗(yàn)?zāi)退幹赀M(jìn)行耐藥倍數(shù)(FR)測(cè)定，確保試驗(yàn)的可*性。若非逆轉(zhuǎn)多藥耐藥 (MDR) 而是逆轉(zhuǎn)單藥耐藥，則實(shí)驗(yàn)的瘤株中需有針對(duì)該藥的耐藥細(xì)胞株。我的研究-首頁(yè)5K7u6j$At g7Z!iTrETm0陽(yáng)性對(duì)照藥建議采用 Rbjj L0維拉帕米 (verapamil) 10M我的研究-首頁(yè)e)g$yw#J8R-z環(huán)孢菌素A (cyclosporin A) 3M 。)y3| W5a 0我的研究-首頁(yè)0DF mk2.2   體內(nèi)抗腫瘤耐藥活性試驗(yàn) 我的

34、研究-首頁(yè)UsK7F xS3a小鼠敏感和對(duì)應(yīng)的耐藥腫瘤和人癌裸鼠敏感和對(duì)應(yīng)的耐藥移植瘤。-k0Z|fx;t#ha0我的研究-首頁(yè)vs:W1d1w2.3 耐藥基因及其表達(dá)產(chǎn)物測(cè)定 我的研究-首頁(yè)"Y2nS.qAEN%r可測(cè)定腫瘤細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度變化和耐藥基因及其表達(dá)產(chǎn)物，初步明確其逆轉(zhuǎn)耐藥機(jī)制。包括多藥耐藥基因及其編碼蛋白(multidrug resistance gene/p-glycoprotein,Mdr1/Pgp)、多藥耐藥相關(guān)蛋白(multidrug resistance-related protein, MRP)、肺耐藥相關(guān)蛋白(lung resistance-relate

35、d protein, LRP)、其它與耐藥相關(guān)的基因/蛋白及酶等。|q"e56sa0我的研究-首頁(yè)|-Yb3. 抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物我的研究-首頁(yè)/y|,F腫瘤是否轉(zhuǎn)移不僅依賴于腫瘤細(xì)胞本身具有的內(nèi)在轉(zhuǎn)移潛能，而且也取決于機(jī)體抗轉(zhuǎn)移因素的消長(zhǎng)。所以，抗轉(zhuǎn)移藥物只有在動(dòng)物體內(nèi)模型上才能得出符合實(shí)際的結(jié)果。 我的研究-首頁(yè)4bK4k b我的研究-首頁(yè)7lio9c5Gm3.1 體外試驗(yàn) 3G&I6TT0測(cè)定候選化合物作用下腫瘤細(xì)胞對(duì)基底膜的侵襲、粘附和腫瘤細(xì)胞趨化性運(yùn)動(dòng)的能力。e /dHWI Q0我的研究-首頁(yè)sn' m3.2 體內(nèi)試驗(yàn) W2PL*v:Q*Q#j_%ih03.2.

36、1模型：t#C4Dt9iv%0小鼠B16黑色素瘤、小鼠Lewis肺癌等和人癌裸鼠移植高轉(zhuǎn)移瘤模型。我的研究-首頁(yè);Y)e,d tjG$v&F3.2.2 接種方法：我的研究-首頁(yè) d0NW-y; x!vn!N常用靜脈注射方法，也可用皮下接種等方法。 我的研究-首頁(yè)?!z#k-a+9o3.2.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) 1(C.y9X1H RU0接種給藥后，觀察記錄動(dòng)物死亡時(shí)間，計(jì)算生存天數(shù)。試驗(yàn)結(jié)束后，稱動(dòng)物體重、肺重、移植瘤重，解剖顯微鏡下計(jì)數(shù)肺轉(zhuǎn)移瘤灶、測(cè)瘤徑(計(jì)算肺轉(zhuǎn)移瘤體積)和病理組織學(xué)切片觀察等；!0r+L8y"kt3wg0計(jì)算轉(zhuǎn)移率 2%Zz8bw0轉(zhuǎn)移抑制率 = 1 - (治療

37、組轉(zhuǎn)移率/對(duì)照組轉(zhuǎn)移率)×100%。我的研究-首頁(yè)7f/Xa&?D3c; r我的研究-首頁(yè)%N5Om&d6l-T4. 腫瘤血管生成抑制劑我的研究-首頁(yè)4s/w?j7 s8q/Ib4.1 體外試驗(yàn) t48BN0體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ陀?我的研究-首頁(yè)1jt9G"wP+s(Mt/bT:P（1）人血管內(nèi)皮細(xì)胞模型：n5DD#J*t2lVN*V0人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞和人微血管（肺、皮膚等）內(nèi)皮細(xì)胞。我的研究-首頁(yè)I z1eH3!L2E（2）血管形成促進(jìn)因子等刺激細(xì)胞DNA合成、增殖、遷移、血管形成(tube formation)來(lái)觀察藥物的抗血管形成作用。我的研究-首頁(yè)nj3

38、Pk G如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)或堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)nDq8-oZ0（3）腫瘤細(xì)胞模型：我的研究-首頁(yè)M(_/G A, S主要應(yīng)用國(guó)內(nèi)已建立的人實(shí)體癌細(xì)胞系，確定VEGF、FGF等高分泌的細(xì)胞株。檢測(cè)細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移能力及血管形成因子的基因表達(dá)狀況來(lái)評(píng)價(jià)藥物。i:H_3BH0我的研究-首頁(yè)C$IPSM 4.2 體內(nèi)試驗(yàn) 我的研究-首頁(yè)"rw'xnk&XE74.2.1 血管抑制試驗(yàn) NP"g T!x'S

39、K0ua4IN0經(jīng)典的血管形成評(píng)價(jià)方法有：雞絨毛膜尿囊和卵黃膜囊（CAM）、嚙齒動(dòng)物虹膜和角膜等。也可用如皮下移植塑料或多孔的polytetrafluoroethylene管、皮下移植無(wú)菌的海綿；一些自然的或化學(xué)修飾的物質(zhì)如Matrigel 和纖維凝膠等用于體內(nèi)模型。tC5dV Ow$ b04.2.2  抗腫瘤試驗(yàn) 我的研究-首頁(yè)c ik.S.df;通過(guò)觀察新生血管生成抑制劑的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)檢測(cè)移植瘤的血管密度、血管生成因子和抑制因子的分泌和表達(dá)，以及腫瘤的轉(zhuǎn)移情況等綜合評(píng)價(jià)腫瘤血管生成抑制劑的作用和作用機(jī)制。 我的研究-首頁(yè)9n:zj a:Fy:j我的研究-首頁(yè)K7e f*f15. 分化誘導(dǎo)劑 我的研究-首頁(yè)q?oN8Sg+E2H分化誘導(dǎo)劑的藥效學(xué)研究包括體外和體內(nèi)研究模型；目前的藥物主要能