生物藥物分析練習(xí)題考試題及詳細(xì)答案

1、生物藥物分析練習(xí)題一、名詞解釋?zhuān)荷锼幬锓治觯簯?yīng)用微生物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、有機(jī)化學(xué)、數(shù)學(xué)、分析化學(xué)、生化工程等學(xué)科的理論及其技術(shù)成就，檢測(cè)和研究各種生物藥物質(zhì)量的一門(mén)綜合性學(xué)科。生物藥物：指的是生物體生命活動(dòng)過(guò)程中產(chǎn)生的，或者通過(guò)生物技術(shù)加工的，用作疾病的診斷、預(yù)防、治療的初級(jí)和次級(jí)代謝產(chǎn)物，包括微生物藥物、基因工程藥物、動(dòng)植物細(xì)胞組織制備的生化藥物。藥品標(biāo)準(zhǔn)：是指國(guó)家對(duì)藥品的質(zhì)量規(guī)格及其檢驗(yàn)方法所做的技術(shù)規(guī)定，是藥品的生產(chǎn)、流通、使用及檢驗(yàn)、監(jiān)督管理部門(mén)共同遵守的法定依據(jù)。藥典：一個(gè)國(guó)家記載藥品標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)格的法典，一般由國(guó)家藥品監(jiān)督管理局主持編撰頒布實(shí)施，具有法定約束力?；蚬?/p>

2、程藥物：是先確定對(duì)某種疾病有預(yù)防和治療作用的蛋白質(zhì)，然后將控制該蛋白質(zhì)合成過(guò)程的基因取出來(lái)，經(jīng)過(guò)一系列基因操作，最后將該基因放入可以大量產(chǎn)生的受體細(xì)胞中去，在受體細(xì)胞不斷繁殖的過(guò)程中，大規(guī)模生產(chǎn)預(yù)防和治療這些疾病的蛋白質(zhì)。藥物雜質(zhì)：藥物中存在的無(wú)治療作用或影響藥物的穩(wěn)定性和療效，甚至對(duì)人體健康有害的物質(zhì)。面積歸一法：計(jì)算各雜質(zhì)峰面積及其總和，并求出占總峰面積的百分率以測(cè)定雜質(zhì)含量。內(nèi)消法：是指將一定重量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物加到一定量的被分析樣品混合物中，然后對(duì)含有內(nèi)標(biāo)物的樣品進(jìn)行色譜分析，分別測(cè)定內(nèi)標(biāo)物和待測(cè)組分的峰面積及相對(duì)校正因子，按相應(yīng)公式和方法即可求得被測(cè)組分在樣品中的百分含量。外消法：

3、用已知不同含量的標(biāo)樣系列等量進(jìn)行分析，然后做出響應(yīng)信號(hào)與含量之間的關(guān)系曲線(xiàn)。定量分析樣品時(shí)，在測(cè)校正曲線(xiàn)相同條件下進(jìn)同等樣量的等測(cè)樣品，從色譜圖上測(cè)出峰高或峰面積，在從校正曲線(xiàn)查出樣品的含量。微生物限度檢查法：系指非規(guī)定滅菌制劑及其原、輔料受到微生物污染程度的一種檢查方法。放射性免疫測(cè)定法：利用免疫學(xué)上的抗原-抗體高度特異性反應(yīng)與放射性同位素測(cè)量技術(shù)的高度靈敏性相結(jié)合的超微量分析方法。酶免疫測(cè)定法：利用抗原和抗體的免疫學(xué)反應(yīng)和酶的高效催化作用來(lái)測(cè)定抗原或抗體含量的技術(shù)。抗血清的滴度酶免競(jìng)爭(zhēng)法：非競(jìng)爭(zhēng)法均相法：是指不需要將結(jié)合的與游離的酶標(biāo)志物分離便可測(cè)定的方法。非均相法：是指抗原抗體反應(yīng)后，需

4、要將結(jié)合的與游離的酶標(biāo)志物分離才能測(cè)定的方法。酶的交聯(lián)液相酶免疫測(cè)定法酶分析：指利用酶作為分析工具來(lái)測(cè)定特定物質(zhì)量的方法。（P97）終點(diǎn)法：指借助酶反應(yīng)使被測(cè)物質(zhì)定量地進(jìn)行轉(zhuǎn)變，在轉(zhuǎn)化完成后，測(cè)定底物、產(chǎn)物或輔酶物質(zhì)等的變化量的方法。反應(yīng)速度法：是指通過(guò)測(cè)定酶促反應(yīng)速度對(duì)被測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定量的方法。（P104）酶循環(huán)放大法：指利用底物的專(zhuān)一性，使微量的底物“增幅放大”以達(dá)到定量目的的方法。（P107）電泳：指帶電粒子或離子在電場(chǎng)作用下的定向移動(dòng)，依據(jù)帶電粒子在電場(chǎng)的作用下遷移行為不同進(jìn)行分離的技術(shù)。（P111）電滲：液體的涌動(dòng)現(xiàn)象。（P113）電泳遷移率：帶電粒子在單位電場(chǎng)強(qiáng)度下移動(dòng)的泳動(dòng)速度。S

5、DS-PAGE向樣品加入還原劑和過(guò)量SDSSDS是陰離子去垢劑，是蛋白質(zhì)變性解聚，并與蛋白質(zhì)結(jié)合成帶強(qiáng)負(fù)電荷的復(fù)合物，掩蓋了蛋白質(zhì)之間原有電荷的差異，是各種蛋白質(zhì)的電荷/質(zhì)量比值都相同，因而在聚丙酰胺凝膠中電泳時(shí)遷移速率主要取決于蛋白質(zhì)分子大小。是分析蛋白質(zhì)和多肽、測(cè)定其分子量等常用的方法。梯度聚丙稀酰胺凝膠電泳比移值：色譜法中原點(diǎn)到斑點(diǎn)中心的距離與原點(diǎn)到溶劑前沿的距離的比值。等電聚焦：利用蛋白質(zhì)分子或其他兩性分子等電點(diǎn)的不同，在一個(gè)穩(wěn)定的、連續(xù)的、線(xiàn)性的pH梯度中進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離的一種電泳方法。（P126）兩性載體色譜法：指借助物質(zhì)在兩相間分配原理的不同，而使混合物中各組分分離的技術(shù)。（P1

6、31）邊緣效應(yīng)：指板層中部斑點(diǎn)的Rf值小于兩側(cè)斑點(diǎn)的Rf值的現(xiàn)象。（P137）放射性比度：?jiǎn)挝毁|(zhì)量或單位體積的放射性物質(zhì)的放射性活度。分離度：用以判斷分離物質(zhì)在色譜柱中的分離情況，常用為柱的總分離效能指標(biāo)。托尾因子：是通過(guò)計(jì)算5%竄高處峰寬與峰頂點(diǎn)至前沿的距離比來(lái)評(píng)價(jià)峰形的參數(shù)，目的是為了保證色譜分離效果和測(cè)量精度，常用T來(lái)表示。牛津單位：在標(biāo)準(zhǔn)情況下，能完全抑制50mL肉湯培養(yǎng)液中的金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株生長(zhǎng)的青霉素最低含量為一個(gè)牛津單位。（P159）稀釋單位：指能完全抑制1mL肉湯培養(yǎng)液中大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株生長(zhǎng)的最低含量。重量單位：指以抗生素的生物活性部分的重量作為效價(jià)單位。（P160）旋光

7、性：當(dāng)光通過(guò)含有某種物質(zhì)的溶液時(shí)，使經(jīng)過(guò)此物質(zhì)的偏振光平面發(fā)生旋轉(zhuǎn)的現(xiàn)象。比旋度：指偏振光通過(guò)長(zhǎng)1dm且每1ml含旋光物質(zhì)1g的溶液，在一定額波長(zhǎng)和溫度下的旋光度。稀釋法比濁法瓊脂擴(kuò)散法（管碟法）生物檢定：指利用藥物對(duì)生物體所引起的藥理作用來(lái)測(cè)定藥物的生物活性或效價(jià)的一種方法。（P210）容量分析法：依據(jù)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)試劑溶液與被測(cè)定的一定量供試品藥物完全作用所消耗的標(biāo)準(zhǔn)試劑的體積，來(lái)計(jì)算被測(cè)定藥物中有效物質(zhì)含量的方法。（224）直接滴定法：是用標(biāo)準(zhǔn)溶液直接滴定被測(cè)物質(zhì)的一種方法。（P224）逆滴定法:指加入定量且過(guò)量的滴定劑使之與待測(cè)物質(zhì)反應(yīng)，然后用另外的試劑滴定過(guò)量的滴定劑，進(jìn)而對(duì)待測(cè)物質(zhì)

8、進(jìn)行定量的方法。維生素：指一類(lèi)維持人體正常生理代謝功能所必需的低分子有機(jī)化合物。（p237電位滴定法：指在滴定過(guò)程中通過(guò)測(cè)量電位變化以確定滴定終點(diǎn)的方法。化學(xué)聚合117光聚合：利用光照加速化合物單位體之間共價(jià)鏈接的現(xiàn)象。微分比容：當(dāng)加入1g干物質(zhì)于無(wú)限大體積的溶劑中時(shí)，溶液的體積增量。苛三酮反應(yīng)：雙縮月尿反應(yīng)：雙縮月尿在堿性溶液中與銅離子結(jié)合生成復(fù)雜的紫紅色化合物。（p277）等電點(diǎn)：在某一pH的溶液中，氨基酸解離成陽(yáng)離子和陰離子的趨勢(shì)及程度相等，所帶凈電荷為零，呈電中性，此時(shí)溶液的pH稱(chēng)為該氨基酸的等電點(diǎn)。福林酚法：利用蛋白質(zhì)與福林酚試劑反應(yīng)后形成的化合物可在750nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，以

9、測(cè)定蛋白質(zhì)含量的分析方法。蛋白質(zhì)換算系數(shù)：指含有1g氮的蛋白質(zhì)重量，一般為6.25.甲醛滴定法：依據(jù)一分子氨基酸與兩分子甲醛反應(yīng)生成一個(gè)氫離子，在用已知濃度氫氧化鈉滴定氫離子以確定氨基酸含量的方法。非水滴定法：在冰醋酸中用高氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定測(cè)定氨基酸含量的方法。酶：是一種生物來(lái)源的特殊化學(xué)催化劑，即生物催化劑。是由生物細(xì)胞產(chǎn)生的具有催化能力的蛋白質(zhì)。酶的高效性：酶催化較一般催化反應(yīng)速度高1051013.酶的絕對(duì)專(zhuān)一性：即一種酶僅能催化一種底物的生化反應(yīng)。如月尿酶只能催化尿素降解成氨和碳酸鹽，即使是尿素衍生物也不能被月尿酶水解。酶的相對(duì)專(zhuān)一性：即一種酶僅能催化相應(yīng)的某一類(lèi)化合物或具有某種化學(xué)鍵的

10、物質(zhì)的變化，如脂肪水解酶能分解脂肪，蛋白質(zhì)水解酶分解蛋白質(zhì)，a-淀粉酶可水解淀粉，這些酶不能相互調(diào)換。酶的立體結(jié)構(gòu)專(zhuān)一性：及底物有立體異構(gòu)體時(shí)，酶只能以其中之一作為底物。酶的活力：酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。酶的活力單位：酶的活性單位（U）是酶活性高低的一種度量，用U/g或U/ml表示。酶的比活力：酶的比活力是指每毫克酶蛋白所含有的酶活力。用U/mg表示。恒比活力：多肽生長(zhǎng)因子：（1976年）定義：細(xì)胞生長(zhǎng)因子是指在體內(nèi)和體外對(duì)動(dòng)物細(xì)胞或機(jī)體的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用的物質(zhì)，它們不是營(yíng)養(yǎng)成分，主要由多肽構(gòu)成，故稱(chēng)多肽生長(zhǎng)因子。按現(xiàn)在細(xì)胞因子的作用性質(zhì)進(jìn)行定義：多肽調(diào)節(jié)因子實(shí)際上是一系列存在于機(jī)體內(nèi)的，對(duì)機(jī)

11、體有很強(qiáng)效應(yīng)的細(xì)胞調(diào)節(jié)因子。肽圖分析：肽圖分析可作為與天然產(chǎn)品或參考品作精密比較的手段。與氨基酸成分和序列分析合并研究，可作為蛋白質(zhì)的精確鑒別。同種產(chǎn)品不同批次的肽圖的一致性是工藝穩(wěn)定性的驗(yàn)證指標(biāo)。蛋白質(zhì)免疫印記法：將等電聚焦電泳后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素紙上。免疫印跡的基本原理是借助聚丙酰胺凝膠技術(shù)，將生物活性物質(zhì)高效分離，再與固相免疫學(xué)方法相結(jié)合。細(xì)胞病變抑制法：該法主要用于干擾素的效價(jià)測(cè)定，采用CPE卬制為基礎(chǔ)的抑制微量測(cè)定法。H5TdR摻入法：通過(guò)比較待測(cè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品之間對(duì)檢測(cè)細(xì)胞促增殖能力的強(qiáng)弱來(lái)確定待測(cè)樣品的活性。微量酶檢測(cè)法(MTT：通過(guò)比較待測(cè)樣品刺激檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的強(qiáng)弱來(lái)確

12、定樣品的活性。生物制品：生物制品系指以天然或人工改造的微生物、寄生蟲(chóng)、生物毒素或生物組織及其代謝產(chǎn)物等為起始原料，采用生物學(xué)、分子生物學(xué)或生物化學(xué)、生物工程等相應(yīng)技術(shù)制成，并以相應(yīng)分析技術(shù)控制其中間產(chǎn)物和成品質(zhì)量的生物活性制品，可用于某些疾病的預(yù)防、治療和診斷。異煙腫法：管體激素C3上酮基及其某些其他位置上的酮基都能與常用的厥基試驗(yàn)如異煙腫、2,4-二硝基苯腫及氨基月尿等縮合反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)，在一定波長(zhǎng)下可比色，作為含量測(cè)定的依據(jù)，異煙腫是目前使用較廣泛的一種。激素：由內(nèi)分泌細(xì)胞所產(chǎn)生的微量化學(xué)信息分子，這些物質(zhì)通過(guò)擴(kuò)散或被血液轉(zhuǎn)運(yùn)到作用細(xì)胞或器官，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞或器官的代謝，并有反饋性地調(diào)節(jié)機(jī)

13、制以適應(yīng)機(jī)體內(nèi)環(huán)境的變化，也有協(xié)調(diào)體內(nèi)各部分之間相互聯(lián)系的作用。保護(hù)指數(shù)：動(dòng)物經(jīng)抗原免疫后，其耐受活菌或活毒攻擊相當(dāng)于未免疫動(dòng)物所耐受量的倍數(shù)?？苟舅貑挝唬阂粋€(gè)抗毒素單位定義為將抗毒素與一個(gè)L+量(致死限量，指與一個(gè)國(guó)際單位抗毒素混合后在一定時(shí)間殺死一只規(guī)定體重動(dòng)物的最小毒素量)的毒素作用后，注射小鼠仍能使該小鼠在96h左右才死亡的最小抗毒素量。絮狀單位：一個(gè)絮狀單位定義為能與一個(gè)單位抗毒素首先發(fā)生絮狀沉淀反應(yīng)的類(lèi)毒素或毒素的量。二、問(wèn)答題1、生物藥物分析的基本任務(wù)有哪四個(gè)方面？答：(1)藥檢，包括原料藥和制劑的檢驗(yàn)。(2)進(jìn)行生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)量控制。(3)進(jìn)行運(yùn)輸儲(chǔ)存質(zhì)量控制。(4)進(jìn)行臨床分析。

14、2、中國(guó)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分為哪幾種？答：藥典、部頒標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)。3、2000年版中國(guó)藥典的內(nèi)容分為幾部分？答：兩部。一部收載中藥材，中藥成方制劑。第二部收載化學(xué)藥品、抗生素、生化藥品等。4、生物藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的特征是什么？答：權(quán)威性、科學(xué)性、進(jìn)展性。5、試述生物藥物檢驗(yàn)工作的基本內(nèi)容？答：1、學(xué)習(xí)分析生物藥物的若干方法及新技術(shù)。2、生物藥物測(cè)定及藥品檢驗(yàn)。3、體內(nèi)藥物分析4、生物藥品制品的標(biāo)準(zhǔn)制定。6、一般雜質(zhì)檢查遵循的原則是什么？費(fèi)休法測(cè)水分的基本原理是什么？在平板菌落計(jì)數(shù)法中向培養(yǎng)基中加入TTC的原理是什么？如何鑒別大腸桿菌、沙門(mén)菌、綠膿桿菌？答：1、平行操作原則，包括儀器的配對(duì)性及供試管與對(duì)

15、照管的同步操作。2、原理：利用碘氧化二氧化硫時(shí)需要一定量的水分參加反應(yīng)，總反應(yīng)式H2O+I2+SO2+3C5H5N+CH3OH2c5H5N-HI+C5H5N-HSO4CH33、細(xì)菌體內(nèi)含有多種脫氫酶，進(jìn)行氧化作用時(shí)釋放出電子和氫離子，遇TTC指示劑菌落呈紅色。在培養(yǎng)基中加入適量TTC,既可限制細(xì)菌蔓延生長(zhǎng)又便于計(jì)數(shù)。7、放射性免疫測(cè)定法中競(jìng)爭(zhēng)法與非競(jìng)爭(zhēng)法的原理分別是什么？抗血清的質(zhì)量檢定分為哪三個(gè)方面？影響抗體產(chǎn)生的因素是什么？答：競(jìng)爭(zhēng)法：標(biāo)記抗原Ag+Ab-Ag+Ab/AgAb+Ag-FT(多)則待測(cè)抗原"B惻待測(cè)抗原J。非競(jìng)爭(zhēng)法：Ag+Ab(過(guò)量)一AgAb+Ab+-F(Ab+)

16、惻AgB(AgA6)cpm1則AgK抗血清的質(zhì)量檢定分為親和力、特異性、滴度。影響抗體產(chǎn)生的因素：佐劑、劑量、免疫競(jìng)爭(zhēng)。8、在酶免疫測(cè)定法中競(jìng)爭(zhēng)法與非競(jìng)爭(zhēng)法的原理分別是什么？它們分別有哪些類(lèi)型？在酶免測(cè)定法中胰島素測(cè)定實(shí)例。答：競(jìng)爭(zhēng)法：將待檢抗原和酶標(biāo)抗原與相應(yīng)固相抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，標(biāo)本中抗原越多，與固相抗體結(jié)合的酶標(biāo)抗原越少，與底物反應(yīng)生成的顏色越淺，因此根據(jù)顏色深淺可定量測(cè)定。1、固相法2、雙抗體法3、均相醇免疫測(cè)定4、酶免疫制劑免疫測(cè)定。非競(jìng)爭(zhēng)法：1、雙抗體夾心法2、免疫酶測(cè)定法9、酶免疫測(cè)定法中實(shí)驗(yàn)條件的建立包括哪五個(gè)過(guò)程？答：包被、洗滌、加待測(cè)物、溫育、檢測(cè)。10、在酶免疫分析中終點(diǎn)法的

17、條件和應(yīng)注意的問(wèn)題分別是什么？答：條件：1、要有專(zhuān)一地作用該被測(cè)物質(zhì)的酶。2、能夠確定使這種酶反應(yīng)接近進(jìn)行完全的條件。3、反應(yīng)中底物的減少，產(chǎn)物的增加、輔酶物質(zhì)的改變等可以借助某種簡(jiǎn)便的方法進(jìn)行測(cè)定。注意問(wèn)題：1、酶的底物特異性2、反應(yīng)的平衡3、反應(yīng)液4、反應(yīng)產(chǎn)物的抑制。11、酶法分析有哪三種方法？答：終點(diǎn)法，反應(yīng)速度法、循環(huán)放大法。12、如何在一個(gè)比色杯中同時(shí)定量丙酮酸、磷酸烯醇式丙酮酸和D2一磷酸甘油酸？答：對(duì)于丙酮酸、磷酸烯醇式丙酮酸和D-2-磷酸甘油酸共存的混合液來(lái)說(shuō)，用乳酸脫氫酶作用時(shí)，由于乳酸脫氫酶反應(yīng)定量地向右方進(jìn)行，因此根據(jù)340nm吸收度的減少便可以容易地算出丙酮酸含量。如像

18、這種反應(yīng)液中再加入丙酮酸激酶，使丙酮激酶反應(yīng)與乳酸脫氫酶反應(yīng)成偶聯(lián)反應(yīng)，則NADH的減少和磷酸烯醇式丙酮酸量成正比。如果進(jìn)一步向該反應(yīng)系統(tǒng)中加烯醇化酶，使烯醇化酶反應(yīng)與丙酮激酶及乳酸脫氫酶偶聯(lián)，那么此時(shí)NADKA與D-2磷酸甘油酸的量成正比例。這樣在一個(gè)比色杯內(nèi)就能依次進(jìn)行丙酮酸、磷酸烯醇式丙酮酸和D-2-磷酸甘油酸的定量。13、如何在樣品中同時(shí)測(cè)定葡萄糖和果糖？如何進(jìn)行G-1-P的定量測(cè)定？14、酶循環(huán)放大法的基本原理和注意事項(xiàng)分別是什么？酶循環(huán)放大法特點(diǎn)是什么？答：基本原理：酶循環(huán)放大法是一種超微量分析方法，本分析法分為三步，第一步，轉(zhuǎn)換反應(yīng)：以試樣中的待測(cè)組分為底物，經(jīng)特異性反應(yīng)生成與待

19、測(cè)組分相當(dāng)?shù)亩垦h(huán)底物。第二步，循環(huán)反應(yīng)：生成的循環(huán)底物反復(fù)參加由兩個(gè)酶反應(yīng)組成的耦連反應(yīng)，所得產(chǎn)物量為循環(huán)底物的若干倍。第三步，指示反應(yīng)：采用酶法測(cè)定反應(yīng)產(chǎn)物。由反應(yīng)產(chǎn)物量及循環(huán)次數(shù)，計(jì)算出循環(huán)底物量，再推算試樣中待測(cè)組分的量。注意事項(xiàng)：1、NAD酸性穩(wěn)定，堿性條件下23分鐘被破壞，NADHW之相反。2、在循環(huán)反應(yīng)中除循環(huán)底物外，其他物質(zhì)是過(guò)量的。3、用對(duì)照實(shí)驗(yàn)，用已知NADHt循環(huán)次數(shù)n。特點(diǎn)：1、靈敏度高，能測(cè)定出10的負(fù)18次方摩爾物質(zhì)。2、特異性高3、循環(huán)效率高，2萬(wàn)次每小時(shí)。4、測(cè)定物質(zhì)靈活。15、電泳法的基本原理是什么？影響電泳遷移率的因素有哪些？答：原理：依據(jù)帶帶電粒子在電場(chǎng)

20、作用下遷移行為的不同進(jìn)行分離的方法。因素：顆粒性質(zhì)、電場(chǎng)強(qiáng)度，溶液性質(zhì)、電滲、焦耳熱、篩孔16、聚丙烯酰胺凝膠的制備方法有拿兩種？它們的催化劑、加速劑是什么？答：化學(xué)聚合：催化劑，過(guò)硫酸錢(qián)或過(guò)硫酸鉀。加速劑：脂肪族叔胺光聚合：催化劑：核黃素。加速劑：TEMED17、聚丙烯酰胺凝膠電泳的基本原理是什么？聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)分為不連續(xù)電泳和連續(xù)電泳。不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳建立在區(qū)帶電泳院里的基礎(chǔ)上滿(mǎn)意孔徑大小不同的聚丙烯酰胺凝膠作為支持物，采用電泳基質(zhì)的不連續(xù)體系（即凝膠層、緩沖液離子成分、ph及電位梯度均不連續(xù)），使樣品在不連續(xù)的兩相間集聚濃縮成很薄的起始區(qū)帶，然后進(jìn)行電泳。18、SDS-PAG

21、E勺基本原理是什么？答：在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中引進(jìn)SDS（十二烷基硫酸鈉），SDS會(huì)與變性的多肽，并使蛋白帶負(fù)電荷，由于多肽結(jié)合SDS的量幾乎總是與多肽的分子量成正比而與其序列無(wú)關(guān)，因此SDS多肽復(fù)合物在丙稀酰胺凝膠電泳中的遷移率只與多肽的大小有關(guān)，在達(dá)到飽和的狀態(tài)下，每克多肽可與1.4g去污劑結(jié)合。當(dāng)分子量在15KD到200KD之間時(shí)，蛋白質(zhì)的遷移率和分子量的對(duì)數(shù)呈線(xiàn)性關(guān)系，符合下式：logMW=K-bX式中：MW為分子量，X為遷移率，k、b均為常數(shù)，若將已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的遷移率對(duì)分子量對(duì)數(shù)作圖，可獲得一條標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，未知蛋白質(zhì)在相同條件下進(jìn)行電泳，根據(jù)它的電泳遷移率即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上求得

22、分子量。19、影響SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合的因素有哪些？（1）溶液中SDSII體的濃度（2）樣品緩沖液的離子強(qiáng)度（3）二硫鍵是否完全被還原20、梯度聚丙烯酰胺凝膠的基本原理是什么？蛋白質(zhì)染色的方法有哪五種？原理：凝膠濃度由小變大，膠的孔徑由大變小，在電泳開(kāi)始時(shí)，由于凝膠孔徑大，沒(méi)有分子篩效應(yīng)，此時(shí)電泳的遷移率與被分離的物質(zhì)所帶電荷、形狀、分子量大小相關(guān)，隨著電泳的進(jìn)行，孔徑越來(lái)越小，由分子篩效應(yīng)產(chǎn)生的阻力越來(lái)越大，當(dāng)阻力足以阻擋被分離物質(zhì)向前移動(dòng)時(shí)，被分離物質(zhì)停留在相應(yīng)孔徑的凝膠中，此時(shí)只有分子篩效應(yīng)，無(wú)電荷效應(yīng)。所以物質(zhì)分子的最后分離是依據(jù)分子篩效應(yīng)分開(kāi)，蛋白質(zhì)的相對(duì)遷移率在一定范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)分子

23、量的對(duì)數(shù)成線(xiàn)性關(guān)系。方法：1、氨基黑10B法2、考馬斯亮藍(lán)R250法3、考馬斯亮藍(lán)G250法4、1-苯胺基-8-奈磺酸5、銀染色法21、色譜法的基本原理是什么？紙色譜的影響因素有哪些？原理：混合物中各組分在兩相間進(jìn)行分配，其中一組是不動(dòng)的，稱(chēng)為固定相；另一相是攜帶混合物流過(guò)固定相的，稱(chēng)為流動(dòng)相。當(dāng)流動(dòng)相中所含的混合物經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，就會(huì)與固定相發(fā)生作用，由于混合物中各組分在結(jié)構(gòu)和性質(zhì)上存在差異，他們與固定相發(fā)生作用的大小、強(qiáng)弱就有差異，因此，在同一條件下，不同組分在固定相中滯留時(shí)間不同，從而按先后不用次序從固定相中流出而得到分離。影響因素：（1）物質(zhì)極性的影響（2）溶劑的影響（3）ph的影響（4

24、）濾紙的影響（5）溫度和時(shí)間的影響22、HPLC的基本原理是什么？HPLC的色譜類(lèi)型有哪幾種？原理：HPLC的流動(dòng)相和固定相都是液體。流動(dòng)相與固定相之間應(yīng)互不相溶，有一個(gè)明顯的分界面。當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行多次分配。從而使流出時(shí)間不同，進(jìn)而達(dá)到分離。類(lèi)型：正相色譜、反相色譜、離子交換色譜、凝膠色譜23、氣相色譜的基本原理和類(lèi)型分別是什么？原理：原理：混合物的分離依據(jù)色譜柱的性質(zhì)和相關(guān)的保留或固定相的性質(zhì)。利用被測(cè)物質(zhì)各組分在不同兩相間分配系數(shù)的微小差異，當(dāng)兩相做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，這些物質(zhì)在兩相之間進(jìn)行反復(fù)多次的分配，使原來(lái)只有微小的性質(zhì)差異產(chǎn)生很大的效果，而使不同組分得到分離。類(lèi)型：氣-

25、固色譜法、氣-液色譜法24、抗生素的鑒別常用方法有哪三類(lèi)？物理方法、化學(xué)方法、生物學(xué)方法25、怎樣進(jìn)行抗生素類(lèi)藥物的鑒別？抗生素類(lèi)藥物的鑒別包括抗生素及其衍生物的鑒別。前者是鑒別抗生素的種屬，后者是鑒別抗生素是屬何種鹽類(lèi)、脂類(lèi)、復(fù)合物等。常用的鑒別方法有物理方法、化學(xué)方法、生物學(xué)方法。物理方法有紫外光吸收?qǐng)D譜、紅外光吸收?qǐng)D譜、色譜分析及溶解度等?；瘜W(xué)方法常用的有功能基團(tuán)反應(yīng)、特異性的橙色反應(yīng)等。生物學(xué)方法利用特異的酶反應(yīng)，如用青霉素在一定條件下水解青霉素，使其喪失抗菌活性，以此鑒別青霉素。26、如何鑒別氨基糖昔類(lèi)抗生素？（1）呈色反應(yīng)：苛三酮反應(yīng)、坂口反應(yīng)、糖類(lèi)試劑反應(yīng)、埃爾松-摩根反應(yīng)、麥芽

26、酚反應(yīng)（2）薄層色譜27、測(cè)定青霉素中過(guò)敏原青霉曝嚏衍生物的原理是什么？氧化汞與青霉曝口坐衍生物形成penamaldate衍生物，H!生物在285nm處有吸收峰?？上韧ㄟ^(guò)凝膠過(guò)濾分離青梅曝陛衍生物，以磷酸鹽緩沖液位對(duì)照品，測(cè)定285nm處的吸收度，再與以青霉曝陛正丙胺為標(biāo)準(zhǔn)品所做的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)作為對(duì)比，即可定量。28、抗生素的效價(jià)微生物測(cè)定方法有哪三種？管碟法測(cè)定生抗素的效價(jià)基本原理是什么？方法：稀釋法、比濁法、瓊脂擴(kuò)散法原理：管碟法測(cè)定生抗素的效價(jià)基本原理：利用抗生素在攤布特定試驗(yàn)菌的瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)擴(kuò)散，形成含一定濃度的球型區(qū)，抑制了試驗(yàn)菌的繁殖，通過(guò)透明瓊脂培養(yǎng)基，可觀察到透明的抑菌圈；并且在一

27、定的抗生素濃度范圍內(nèi)，對(duì)數(shù)濃度（劑量）與抑菌圈面積或直徑成正比。方法設(shè)計(jì)是在同樣條件下將已知效價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)品溶液與未知效價(jià)的供試品溶液的劑量反應(yīng)（抑菌圈）進(jìn)行比較；當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品和供試品是屬于同一性質(zhì)的抗生素時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液，對(duì)一定試驗(yàn)菌所得的劑量反應(yīng)曲線(xiàn)，在一定劑量范圍內(nèi)應(yīng)相互平行。根據(jù)以上原理，可設(shè)計(jì)為一劑量法、二劑量法及三劑量法等，從而可以較為準(zhǔn)確地測(cè)定供試品的效價(jià)。29、試述管碟法中影響抗生素抑菌圈形狀的因素及控制？1、稀釋抗生素用的緩沖液的ph值、鹽濃度的影響2、制備瓊脂培養(yǎng)基菌層，加菌時(shí)培養(yǎng)基溫度的影響3、測(cè)試用的器材洗凈度的影響4、雙碟培養(yǎng)溫度的影響5、其他操作的影響30、試述管

28、碟法中影響抗生素抑菌圈清晰度的因素及控制？1、實(shí)驗(yàn)菌的特性與數(shù)量2、培養(yǎng)基的原材料品種與質(zhì)量3、調(diào)節(jié)培養(yǎng)基ph值或增加鹽濃度可使抑菌圈清晰4、不適當(dāng)延長(zhǎng)雙碟的培養(yǎng)時(shí)間31、量反應(yīng)平行法測(cè)定生抗素的效價(jià)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)類(lèi)型有哪些？隨機(jī)設(shè)計(jì)、隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)、拉平方設(shè)計(jì)、交叉設(shè)計(jì)32、簡(jiǎn)述量反應(yīng)平行法實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性分析？實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性是以方差分析法測(cè)驗(yàn)，測(cè)驗(yàn)多組均數(shù)之間的差別是否顯著?？股匦r(jià)測(cè)定中，存在有S（標(biāo)準(zhǔn)差）和T的差別，直線(xiàn)及平行線(xiàn)關(guān)系，劑量間和雙碟間的關(guān)系。通過(guò)統(tǒng)計(jì)以上各組均數(shù)間的方差，以試品間、回歸、劑間（列）、蝶間（行）等的方差與誤差項(xiàng)（S平方）的比值（稱(chēng)F值），來(lái)確定各自差異的顯著性

29、程度和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，因此F值（F值=該項(xiàng)方差/誤差項(xiàng)）可作為觀察實(shí)驗(yàn)顯著性程度的一個(gè)指標(biāo)。計(jì)算出的F值，可通過(guò)F值表得知計(jì)算F值是處于P>0.05、P<0.05、還是P<0.01。一般差別顯著意義的表示法，常用：P<0.05,差別有顯著意義；P<0.05,差別有非常顯著意義；P>0.01,差別無(wú)顯著意義。33、抗生素類(lèi)藥物的含量測(cè)定的物理化學(xué)方法有哪幾種類(lèi)型？1、容量法：酸堿滴定法、碘量法2、光譜學(xué)測(cè)定法：旋光法、紫外分光光度法、比色法3、色譜測(cè)定法：洗脫法、直接測(cè)量法、生物自顯法4、高效液相色譜法34、容量分析法分為哪幾種類(lèi)型？光譜分析法又分為哪幾種類(lèi)

30、型？容量法：酸堿滴定法、碘量法光譜學(xué)測(cè)定法：旋光法、紫外分光光度法、比色法35、在抗生素的色譜分析中洗脫法哪三個(gè)步驟？答：斑點(diǎn)定位、洗脫、測(cè)量。36、維生素C的從哪三個(gè)方面進(jìn)行鑒別？答：利用還原性、利用糖類(lèi)的性質(zhì)、紫外分光光度法。37、維生素C的含量測(cè)定方法有哪些？其基本原理分別是什么？答：1、容量分析法（碘量法，2,6-二氯口引味酚法，NBS滴定法，比色法，紫外紫外分光光度法）38、如何進(jìn)行的維生素C中鐵和銅鹽檢查？鐵鹽檢查：取本品5.0g兩份，分別置25ml量瓶中，一份中加入0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液（B）,另一份中加入標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液（精密稱(chēng)取硫酸鐵鏤863

31、mg置1000ml量瓶中，力口1mol/L硫酸溶液25ml,加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml,置100ml量瓶中，力口水稀釋至刻度，搖勻）1.0ml,加0.1mol/ml硝酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液（A）。照原子吸收分光光度法，在248.3nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定，應(yīng)符合規(guī)定。銅鹽檢查：取本品2.0g兩份，分別置25ml量瓶中，一份中加入0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液（B）,另一份中加入標(biāo)準(zhǔn)銅溶液（精密稱(chēng)取硫酸鐵鏤393mg，置1000ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml,置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻）1.0ml,加0.

32、1mol/ml硝酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液（A）。照原子吸收分光光度法，在324.8nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定，應(yīng)符合規(guī)定。39、如何判定純DNARNA?答：用紫外分光光度法測(cè)定A260/A280來(lái)判定。純DNA勺比值應(yīng)為1.8,純RNA為2.0。40、喋吟類(lèi)藥物如何進(jìn)行鑒別？答：1、戊糖的鑒別2、喋吟的鑒別3、磷酸的的鑒別4、特征吸收光譜5、熔點(diǎn)鑒別41、喋吟類(lèi)藥物的含量測(cè)定方法有哪兩種？答：1、紫外分光光度法2、先經(jīng)前處理（如層析或電泳得到樣品的斑點(diǎn)，然后剪下），再測(cè)定。42、氨基酸的生產(chǎn)制備方法有哪四種？答：水解法，發(fā)酵法，酶轉(zhuǎn)化法，化學(xué)合成法。43、氨基酸的.氨基和.竣基分別有

33、哪些主要反應(yīng)？答：a-氨基：氨基酸與亞硝酸反應(yīng)、氨基酸的氨基與?；噭?、煌基化反應(yīng)、與甲醛反應(yīng)a-竣基：成鹽、成酯、成酰氯、成酰胺44、氨基酸的a-氨基和a-竣基同時(shí)參與的反應(yīng)有哪些？答：與苛三酮反應(yīng)、成肽反應(yīng)45、氨基酸的R基團(tuán)特殊反應(yīng)有哪些？答：1、絡(luò)氨酸的酚基反應(yīng)2、組氨酸的側(cè)鏈咪陛基于重氮苯磺酸反應(yīng)形成紅棕色化合物3、精氨酸的側(cè)鏈月瓜基在硼酸鈉緩沖液中與1,2-環(huán)己二酮反應(yīng)，生成縮合物4、色氨酸的側(cè)鏈口引喋基在溫和條件下被N-澳代琥珀酰亞胺氧化5、半胱氨酸的疏基能打開(kāi)乙撐亞胺的環(huán)，生成的側(cè)鏈帶正電荷。46、怎樣進(jìn)行AA的鑒別？答：旋光性、紅外光譜、紫外吸收、紙層析、苛三酮反應(yīng)47、從

34、哪幾個(gè)方面鑒別蛋白質(zhì)？答：顏色反應(yīng)、福林酚反應(yīng)或雙縮月尿反應(yīng)、紫外吸收。48、苛三酮反應(yīng)測(cè)AA有哪三種方法？答：Yem滋、Rosen法、Hydrindantin法。49、AA的含量測(cè)定有哪五種方法？其中非水滴定法的原理和種類(lèi)分別是什么？答：苛三酮反應(yīng)法、甲醛滴定法、非水滴定法、電泳法、色譜法、原理：即溶劑的區(qū)分效應(yīng)，本來(lái)在水溶液中不能滴定的弱酸或弱堿，如果選擇適當(dāng)?shù)娜軇┦蛊鋸?qiáng)度增加，則可以順利滴定氨基酸有氨基和竣基，在水中呈中性，在冰醋酸中就顯出堿性，因此可用高氯酸等強(qiáng)酸進(jìn)行滴定。種類(lèi)：直接滴定法、回滴法。50、胰島素的效價(jià)測(cè)定有哪三種方法？答：兔血糖法、小鼠血糖下降法，小鼠驚厥法51、簡(jiǎn)述酶的特性。答：1、酶是高效催化劑2、酶對(duì)底物的結(jié)構(gòu)具有嚴(yán)格的選擇性3、酶催化反應(yīng)的反應(yīng)條件溫和4、酶的催化活性在生物體內(nèi)受到多種因素的調(diào)節(jié)。52、酶與底物復(fù)合物促進(jìn)反應(yīng)速度的原因是什么？答：1、定向作用與底物濃縮2、酶使底物分子變形3、酸堿催化4、共價(jià)催化53、米氏方程是什么？其中Ks與Km的意義分別是什么？求取Vn和Km的方法有哪兩種方法？答:即二Ks反目值稱(chēng)為米氏常數(shù)。方法：Lineweaver-Burk 作圖法，Langmuir作par54、影響酶催化速度的因素有哪些？答：底物濃度、酶濃度、抑制劑、激活劑、溫度、pH值和離子強(qiáng)度55、酶除蛋白質(zhì)的鑒別常用方法以外，還有哪三種鑒別方法