生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)習(xí)題及參考答案

1、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)習(xí)題及解答一、名詞解釋1、pI：指氨基酸的正離子濃度和負(fù)離子濃度相等時的pH值，用符號pI表示。2、層析：按照在移動相和固定相（可以是氣體或液體）之間的分配比例將混合成分分開的技術(shù)。3、透析：通過小分子經(jīng)過半透膜擴(kuò)散到水（或緩沖液）的原理，將小分子與生物大分子分開的一種分離純化技術(shù)。4、SDS-聚丙烯酰氨凝膠電泳：在去污劑十二烷基硫酸鈉存在下的聚丙烯酰氨凝膠電泳。SDS-PAGE只是按照分子的大小，而不是根據(jù)分子所帶的電荷大小分離的。5、蛋白質(zhì)變性：生物大分子的天然構(gòu)象遭到破壞導(dǎo)致其生物活性喪失的現(xiàn)象。蛋白質(zhì)在受到光照，熱，有機(jī)溶濟(jì)以及一些變性濟(jì)的作用時，次級鍵受到破壞，導(dǎo)致天然構(gòu)

2、象的破壞，使蛋白質(zhì)的生物活性喪失。6、復(fù)性：在一定的條件下，變性的生物大分子恢復(fù)成具有生物活性的天然構(gòu)象的現(xiàn)象。7、 Tm值：核酸分子變性過程中，紫外吸收達(dá)到最大增量一半時的溶解溫度。8、同工酶：能催發(fā)相同的反應(yīng)類型但其理化性質(zhì)及免疫學(xué)性質(zhì)不同的酶。9、 Km值：反應(yīng)速度為最大反應(yīng)速度一半時的底物濃度。是酶的特征物理學(xué)常數(shù)之一。近似表示酶與底物的親和力。10、 DNA變性：DNA雙鏈解鏈，分離成兩條單鏈的現(xiàn)象。11、退火：既DNA由單鏈復(fù)性、變成雙鏈結(jié)構(gòu)的過程。來源相同的DNA單鏈經(jīng)退火后完全恢復(fù)雙鏈結(jié)構(gòu)的過程，同源DNA之間'DNA和RNA之間，退火后形成雜交分子。12、增色效應(yīng)：當(dāng)

3、雙螺旋DNA熔解（解鏈）時，260nm處紫外吸收增加的現(xiàn)象。二、基礎(chǔ)理論單項(xiàng)選擇題1、 A；2、C；3、B；4、A；5、A；6、B；7、B；8、C；9、D；10、A；11、A；12、D；13、A；1、用下列方法測定蛋白質(zhì)含量，哪一種方法需要完整的肽鍵？（）A雙縮月尿反應(yīng)B、凱氏定氮C、紫外吸收D、竣肽酶法2、下列哪組反應(yīng)是錯誤的？（）A、葡萄糖Molish反應(yīng)B、膽固醇Libermann-Burchard反應(yīng)C、色氨酸坂口（Sakaguchi）反應(yīng)D-氨基酸苛三酮反應(yīng)3、Sanger試劑是（）A、苯異硫氰酸B、2，4-二硝基氟苯C、丹磺酰氯D、-巰基乙醇4、肽鍵在下列哪個波長具有最大光吸收？（

4、）A、215nmB、260nmC、280nmD、340nm5、下列蛋白質(zhì)組分中，哪一種在280nm具有最大的光吸收？（）A、色氨酸的吲哚基B、酪氨酸的酚環(huán)C、苯丙氨酸的苯環(huán)D、半胱氨酸的硫原子6、SDS膠電泳測定蛋白質(zhì)的相對分子量是根據(jù)各種蛋白質(zhì)（）A、在一定pH值條件下所帶的凈電荷的不同B、分子大小不同C、分子極性不同D、溶解度不同7、蛋白質(zhì)用硫酸銨沉淀后，可選用透析法除去硫酸銨。硫酸銨是否從透析袋中除凈，你選用下列哪一種試劑檢查？（）A、茚三酮試劑B、奈氏試劑C、雙縮脲試劑D、Folin-酚試劑8、蛋白質(zhì)變性是由于（）A、一級結(jié)構(gòu)改變B、亞基解聚C空間構(gòu)象破壞D輔基脫落9、用生牛奶或生蛋清

5、解救重金屬鹽中毒是依據(jù)蛋白質(zhì)具有（）A、膠體性B、粘性C、變性作用D、沉淀作用10、有關(guān)變性的錯誤描述為（）A、蛋白質(zhì)變性后，其一級結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)改變B、蛋白質(zhì)變性后，其理化性質(zhì)和生物學(xué)活性改變C、加熱、紫外線照射、超聲波等可以引起蛋白質(zhì)變性D、變性蛋白質(zhì)粘度增加，易被酶水解，易沉淀11、雙鏈DNA熱變性后（）A、黏度下降B、沉降系數(shù)下降C、浮力密度下降D、紫外吸收下降12、酶的活化和去活化循環(huán)中，酶的磷酸化和去磷酸化位點(diǎn)通常在酶的哪一種氨基酸殘基上？（）A、天冬氨酸B、脯氨酸C、賴氨酸D、絲氨酸13、在生理?xiàng)l件下，下列哪種基團(tuán)既可以作為H+的受體，也可以作為H+的供體？（）A、His的咪哇基

6、B、Arg的麻基C、Cys的疏基D、Trp的口引味基三、填空1、脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)產(chǎn)生（）色物質(zhì)，而其他氨基酸與茚三酮產(chǎn)生（）色的物質(zhì)。2、通?？捎米贤夥止夤舛确y定蛋白質(zhì)的含量，這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)分子中的（）、（）、（）三種氨基酸的共軛雙鍵有紫外吸收能力。3、移液槍在每次實(shí)驗(yàn)后應(yīng)將刻度調(diào)至（），讓彈簧回復(fù)原型以延長移液槍的使用壽命，并嚴(yán)禁吸?。ǎ?。4、使用離心機(jī)時，如有噪音或機(jī)身振動時，應(yīng)立即（），并且離心管須對稱放入套管中，防止機(jī)身振動，若只有一支樣品管，則另外一支要用（）代替。5、測定蛋白質(zhì)濃度的方法主要有（）、（）、（）。6、利用蛋白質(zhì)不能通過半透膜的特性，使它和其他小分子物質(zhì)分

7、開的方法有（）和（）等。7、核酸在260nm附近有強(qiáng)吸收，這是由于（）。8、雙鍵DNA熱變性后，或在pH2以下，或在pH12以上時，其0的（），同樣條件下，單鍵DNA的OD260（）。9、硝酸纖維素膜可結(jié)合（）鏈核酸。將RN儂性后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上再進(jìn)行雜交，稱（）印跡法。10 、常用二苯胺法測定（）含量，用苔黑酚法測定（）含量。11、變性DNA的復(fù)性與許多因素有關(guān)，包括（）、（）、（）、（）、（）。12 、溫度對酶活力影響有以下兩方面：一方面（），另一方面（）。13 、維生素C是（）酶的輔酶，另外還具有（）作用。14 、在分光光度計(jì)的使用或檢定中，（）的準(zhǔn)確度是衡量儀器工作性能的一項(xiàng)重要指

8、標(biāo)，它的準(zhǔn)確程度直接關(guān)系到所測數(shù)據(jù)的可信性及科學(xué)性。（）的誤差越大，測試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。四、問答1、紫外分光光度法測定核酸含量的原理。答：核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵系統(tǒng)，能吸收紫外光，RNA和DNA的紫外吸收峰在260nm波長處。一般在260nm波長下，每1ml含1闖RNA溶液的光吸收值為0.0220.024,每1m1含1的DNA溶液的光吸收值約為0.020,故測定未知濃度RNA或DNA溶液在260nm的光吸收值即可計(jì)算出其中核酸的含量。此法操作簡便，迅速。若樣品內(nèi)混雜有大量的核苷酸或蛋白質(zhì)等能吸收紫外光的物質(zhì)，則測光誤差較大，故應(yīng)設(shè)法事先除去。2、蛋白

9、質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。答：沉淀可以是由蛋白質(zhì)變性從而產(chǎn)生沉淀，也可以是由于鹽析。蛋白質(zhì)變性是指光照，熱，有機(jī)溶濟(jì)以及一些變性劑（如重金屬鹽）的作用時蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)被破壞，使得蛋白質(zhì)喪失活性，該過程不可逆。鹽析是指向蛋白質(zhì)的溶液中加入輕金屬鹽，使得蛋白質(zhì)沉淀析出，這是由于加入鹽降低了蛋白質(zhì)得溶解度而析出，該過程可逆，加水蛋白質(zhì)又會溶解。二者本質(zhì)上是不同的。3、牛乳中制備酪蛋白的原理和方法。答：牛奶含有半乳糖、蛋白質(zhì)、脂肪成分。蛋白質(zhì)中的酪蛋白通過等電點(diǎn)沉淀，再通過離心而獲得，糖類小分子由于處于清夜中而分離，沉淀物中所含有的脂肪通過有機(jī)溶劑抽提而去除，最終得到純白色、晶狀酪蛋白。方法：取新鮮牛乳，

10、用酸堿調(diào)PH到酪蛋白的等電點(diǎn)沉淀析出酪蛋白，然后洗滌，醇醒吸水至干燥得粉末稱重，計(jì)算提取率。步驟：保溫f調(diào)PH沉淀-離心-洗滌-干燥-稱量4、試述凝膠成像系統(tǒng)操作時應(yīng)注意的事項(xiàng)。答：1）紫外凝膠照相時要防止EB污染儀器，在紫外透射燈樣品臺上墊上藍(lán)色和白色膠片，開關(guān)凝膠成像系統(tǒng)前面板那、操彳GeneSnap軟件之時都不可以戴手套。白光透射光源放置在紫外透射光源上面時要把藍(lán)色和白色膠片取出。2）注意開機(jī)順序，先開凝膠成像系統(tǒng)，再打開電腦進(jìn)入GeneSnap軟件。3）在使用紫外光源照相的過程中，不可以打開凝膠成像系統(tǒng)前面板。5、若樣品中含有蛋白質(zhì)和核苷酸等雜質(zhì)，如何排除干擾？答：用去垢劑（如SDS，

11、十二烷基磺酸鈉）使蛋白質(zhì)變性，RNA通過RNase消化清除。6、體液血糖測定有哪些方法？答：測定血糖的方法常用的有三種：靜脈血漿葡萄糖（VPG）,毛細(xì)血管全血葡萄糖（CBG）和靜脈全血葡萄糖（VBG）。7、DNA在電場中的遷移率取決于哪些因素？答：1）DNA的分子大小及構(gòu)型：？8人不同型DNA的移動速度次序?yàn)椋汗﹥r閉環(huán)DNA（covalentlyclosedcircular，cccDNA）>直線DNA>開環(huán)的雙鏈環(huán)狀DNA。2）瓊脂糖濃度：一個給定大小的線狀DNA分子,其遷移速度在不同濃度的瓊脂糖凝膠中各不相同。DNA電泳遷移率的對數(shù)與凝膠濃度成線性關(guān)系。凝膠濃度的選擇取決于DNA

12、分子的大小。3）DNA分子的構(gòu)象：當(dāng)DNA分子處于不同構(gòu)象時,它在電場中移動距離不僅和分子量有關(guān),還和它本身構(gòu)象有關(guān)。相同分子量的線狀、開環(huán)和超螺旋DNA在瓊脂糖凝膠中移動速度是不一樣的,超螺旋DNA移動最快,而線狀雙鏈DNA移動最慢。"4）電源電壓：瓊脂糖凝膠分離大分子DNA實(shí)驗(yàn)條件的研究結(jié)果表明，在低濃度、低電壓下，分離效果較好。5）嵌入染料的存在：熒光染料溴化乙啶用于檢測瓊脂糖凝膠中的DNA,染料會嵌入到堆積的堿基對之間并拉長線狀和帶缺口的環(huán)狀DNA，使其剛性更強(qiáng)還會使線狀DNA遷移率降低15。6）離子強(qiáng)度影響：電泳緩沖液的組成及其離子強(qiáng)度影響DNA的電泳遷移率。8、瓊脂糖凝膠

13、有哪些注意事項(xiàng)？答：1）緩沖液的使用要正確，長時間高壓電泳時，常更新緩沖液或在兩槽間進(jìn)行緩沖液的循環(huán)是可取的。2）瓊脂糖的影響。3）凝膠中所加緩沖液應(yīng)與電泳槽中的相一致。4）樣品加入量的多少。5）電泳系統(tǒng)的變化會影響DNA的遷移，加入DNA標(biāo)準(zhǔn)參照物進(jìn)行判定是必要的。6）DNA樣品中的鹽濃度也影響DNA的遷移率。7）DNA遷移率取決于瓊脂糖凝膠的濃度、遷移分子的形狀及大小。9、考馬斯亮藍(lán)G-250法測定蛋白質(zhì)含量的原理是什么？答：考馬斯亮藍(lán)G-250（CoomassiebrilliantblueG-250）染料，在游離狀態(tài)下溶液呈棕紅色，當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色。蛋白質(zhì)含量在01000wg范

14、圍內(nèi)，蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm下的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比，故可用比色法進(jìn)行定量分析?？捡R斯亮藍(lán)G-250法（Bradford法）是比色法與色素法相結(jié)合的復(fù)合方法，簡便快捷，靈敏度高，穩(wěn)定性好，是一種較好的蛋白質(zhì)常用分析方法。10、何謂Rf值？影響Rf值的主要因素是什么？答：Rf為氨基酸的比移值。影響紙層析遷移率Rf值的主要因素：1、樣品本身的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)；2、溶劑的性質(zhì)；3、PH值；4、溫度；5、濾紙性質(zhì)。11、蛋白質(zhì)分離和純化的一般方法？答：主要有以下一些方法：透析及超濾法；丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀；電泳；層析；超速離心。12、如何正確選擇核酸電泳指示劑？答：核酸電泳常用的指示劑有溴酚蘭和二甲苯青及銀染色。溴酚蘭在堿性液體中呈紫蘭色，在0.6%、1%、1.4%和2%瓊脂糖凝膠電泳中，溴酚蘭的遷移率分別與1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的雙鏈線性DNA片段大致相同.二甲苯青的水溶液呈蘭色，它在1%和1.4%瓊脂糖中電泳時，其遷移速率分別與2Kb和1.6Kb的雙鏈線性DNA大致相似。染色劑：核酸電泳后，需經(jīng)染色后才能顯現(xiàn)出帶型，最常用的是溴化乙錠染色法，其次是銀染色。三、填空1、黃