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1、透射反射偏光顯微鏡一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.熟悉透射反射偏光顯微鏡的使用方法和工作原理。2.通過(guò)親自使用透射反射偏光顯微鏡對(duì)樣品拍照,進(jìn)一步加深對(duì)透射反射偏光顯微鏡了解。3.學(xué)會(huì)分析對(duì)由透射反射顯微鏡產(chǎn)生的圖像進(jìn)行分析。二、實(shí)驗(yàn)原理 偏光顯微是鑒定物質(zhì)細(xì)微結(jié)構(gòu)光學(xué)性質(zhì)的一種顯微鏡。凡具有雙折射性的物質(zhì),在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚,當(dāng)然這些物質(zhì)也可用染色法來(lái)進(jìn)行觀察,但有些則不可能,而必須利用偏光顯微鏡。 偏光顯微鏡的特點(diǎn),就是將普通光改變?yōu)槠窆膺M(jìn)行鏡檢的方法,以鑒別某一物質(zhì)是單折射性(各向同性)或雙折射性(各向異性)。 雙折射性是晶體的基本特征。因此,偏光顯微鏡被廣泛地應(yīng)用在礦物、化學(xué)等領(lǐng)域。在生物
2、學(xué)中,很多結(jié)構(gòu)也具有雙折射性,這就需要利用偏光顯微鏡加以區(qū)分。在植物學(xué)方面,如鑒別纖維、染色體、紡錘絲、淀粉粒、細(xì)胞壁以及細(xì)胞質(zhì)與組織中是否含有晶體等。在植物病理上,病菌的入侵,常引起組織內(nèi)化學(xué)性質(zhì)的改變,可以偏光顯微術(shù)進(jìn)行鑒別。在人體及動(dòng)物學(xué)方面,常利用偏光顯微術(shù)來(lái)鑒別骨骷、牙齒、膽固醇、神經(jīng)纖維、腫瘤細(xì)胞、橫紋肌和毛發(fā)等。 熱臺(tái)顯微鏡的工作原理是將普通光改變?yōu)槠窆膺M(jìn)行鏡檢,以鑒別某一物質(zhì)是單折射(各向同行)或雙折射性(各向異性)。其中,雙折射性是晶體的基本特性。偏光顯微鏡是根據(jù)有關(guān)物質(zhì)所具有的偏光性,可以進(jìn)行定性觀察和定量測(cè)定,因此偏光顯微鏡可用作物質(zhì)鑒定。其廣泛地應(yīng)用于礦物、晶體等各種
3、具有雙折射性偏光物質(zhì)的觀察、研究和鑒別。熱臺(tái)顯微鏡是研究物質(zhì)的結(jié)構(gòu)最常用的物理方法之一,適用于巖石薄片、玻璃、陶瓷、塑料、高分子材料等多種樣品的偏光特性高級(jí)觀察分析。 偏光原理是偏光顯微鏡的核心部分:光可以看作是由一些微小的波構(gòu)成的,這些波可以在任何一個(gè)平面上振動(dòng)。在一個(gè)特定的光束中,波的振動(dòng)方向分上下振動(dòng),左右振動(dòng)和對(duì)角方向振動(dòng),振動(dòng)方向可能均勻地分布在所有各個(gè)方向上,沒(méi)有一個(gè)振動(dòng)平面占優(yōu)勢(shì)或者在光波中比其他平面占有更大的份額。 晶體是由排成規(guī)整的行列和平面的原子或原子團(tuán)構(gòu)成的。當(dāng)光波的振動(dòng)平面恰巧能塞進(jìn)兩個(gè)原子平面之間時(shí),它就很容易通過(guò)這塊晶體;要是它的振動(dòng)平面與原子的平面成一個(gè)角度,它就
4、會(huì)撞在原子上,光波就要消耗很多能量方能繼續(xù)振動(dòng)下去,這樣的光會(huì)局部或全部被吸收掉。 有些晶體能夠強(qiáng)迫光波把所有能量分成兩束分離的光線,這時(shí)。動(dòng)平面就不再均勻分布了。在其中的一個(gè)光束中,所有的波都在一個(gè)特定的平面上振動(dòng);而在另一個(gè)光束中,所有的波都在與第一束光的平面成直角的平面上振動(dòng),不可能出現(xiàn)任何對(duì)角方向的振動(dòng)。 當(dāng)光波被迫在某一特定的平面上振動(dòng)時(shí),稱“面偏振光”或“偏振光”。朝著所有各個(gè)方向振動(dòng)的普通光是“非偏振光”,西方國(guó)家把偏振光稱為“極化光”。 偏振眼鏡片(它是在塑料中嵌入許多細(xì)小的這類晶體)就是以上述方式吸收掉許多光,由于這種鏡片著色,吸收掉的光就更多了,這種鏡片就是這樣消除眩目的強(qiáng)
5、光的。 當(dāng)偏振光通過(guò)含有某種不對(duì)稱分子的溶液時(shí),它的振動(dòng)平面會(huì)被扭轉(zhuǎn)一個(gè)角度?;瘜W(xué)家根據(jù)這種扭轉(zhuǎn)的方向和角度的大小,就能夠?qū)@種分子的真實(shí)結(jié)構(gòu)作出許多推斷,特別是對(duì)于有機(jī)化合物的分子更是如此。正因?yàn)檫@樣,偏振光對(duì)于化學(xué)理論來(lái)說(shuō),一直是極其重要的。3、 儀器設(shè)備設(shè)備名稱:透射反射偏光顯微鏡及計(jì)算機(jī)控制檢驗(yàn)臺(tái)規(guī)格、型號(hào):DM2500P 透射反射偏光顯微鏡;THMS600/CI94 計(jì)算機(jī)控制檢驗(yàn)臺(tái)生產(chǎn)廠家:投射反射偏光顯微鏡為德國(guó)徠卡公司產(chǎn)品;計(jì)算機(jī)控制檢驗(yàn)臺(tái)為英國(guó)Linkam 公司產(chǎn)品。該顯微鏡由鏡座、鏡柱、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器(旋轉(zhuǎn)器)、鏡臺(tái)(載物臺(tái))、細(xì)準(zhǔn)焦螺旋、粗準(zhǔn)焦螺旋、目鏡、物鏡等組
6、成。該儀器可以進(jìn)行數(shù)字化的操作,不需要觀察目鏡,產(chǎn)生的圖形能直接通過(guò)儀器轉(zhuǎn)換到計(jì)算機(jī)上并形成圖形。主要技術(shù)指標(biāo):1)透射反射偏光顯微鏡(1)2 檔調(diào)焦,180 檢偏鏡;(2)適用于反射偏光和反射DIC(Pol&ICR)的Smith 鏡;(3)LH 107/2 12V 100W 燈箱,單投射;(4)UCA/P 帶6 位轉(zhuǎn)盤,用于厚片或熱臺(tái);(5)安裝于物鏡轉(zhuǎn)換盤上方的全波長(zhǎng)鏡;(6)安裝于物鏡轉(zhuǎn)換盤上方的1/4 波長(zhǎng)鏡;(7)360 度偏光鏡,帶熱保護(hù)膜;(8)R/P 起偏鏡,到0、45、90 度定位;(9)N PLAN(5×、10×),HI PLAN(40×
7、;)物鏡系列,10×/22M+目鏡;(10)標(biāo)準(zhǔn)濾鏡組合(日光、綠色、中灰)2)計(jì)算機(jī)控制檢驗(yàn)臺(tái)(1)溫度范圍:室溫到600;(2)溫度設(shè)定:100 段溫度程序;(3)溫度精度/穩(wěn)定性:0.1/小于0.01;(4)光孔直徑:2.4mm;(5)樣品X、Y 軸向移動(dòng):16mm;(6)加熱/冷卻速率:0.1-130/min;(7)超薄熱臺(tái)窗口:0.17 mm;(8)最小物鏡/聚光鏡工作距離:4.5/12.5 mm;(9)氣密樣品腔室,可充入保護(hù)性氣體。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、打開(kāi)電源;2、在載物臺(tái)上放置樣品;3、將倍率調(diào)到低倍率;4、將載物臺(tái)其上升,調(diào)節(jié)粗螺紋在低倍鏡下尋找目標(biāo)點(diǎn);5、找到目標(biāo)后,可以細(xì)調(diào)將圖像調(diào)節(jié)清晰;在調(diào)節(jié)的過(guò)程中,可以根據(jù)需要,自己調(diào)節(jié)光源的強(qiáng)度,得到處于最清晰的狀態(tài)的圖像。6、保存圖像;7、圖像分析。5、 圖
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