溶液配制問題

1、130%丙烯酰胺溶液【配制方法】將29g丙烯酰胺和1g N，N-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中。加熱至37溶解之，補加水至終體積為100ml。用Nalgene濾器（0.45m孔徑）過濾除菌，查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0，置棕色瓶中保存于室溫?！咀⒁狻勘０肪哂泻軓姷纳窠?jīng)毒性并可以通過皮膚吸收，其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應(yīng)戴手套和面具?？烧J(rèn)為聚丙烯酰胺無毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因為它還可能會含有少量未聚合材料。一些價格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂（MB-1Mallinckrodt），攪拌過夜，然

2、后用Whatman 1號濾紙過濾以純化之。在貯存期間，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酰和雙丙烯酸。240%丙烯酰胺【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA測序級）和20g N，N-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600ml的蒸餾水中。繼續(xù)按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理，但加熱溶解后應(yīng)以蒸餾水補足至終體積為1L?！咀⒁狻恳娚鲜雠渲?0%丙烯酰胺的說明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測定。3放線菌素D溶液【配制方法】把20mg放線菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1：10稀釋貯存液，用100%乙醇作空白對照讀取OD440值。放線菌素D（分子量為1255）純品在水溶液中的摩爾消化系數(shù)為21

3、，900，故而1mg/ml的放線菌素D溶液在440nm處的吸光值為0.182，放線菌素D的貯存液應(yīng)放在包有箔片的試管中，保存于-20?！咀⒁狻糠啪€菌素D是致畸劑和致癌劑，配制該溶液時必須戴手套并在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，而不能在開放在實驗桌面上進(jìn)行，謹(jǐn)防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。藥廠提供的作治療用途的放線菌素D制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過測量貯存液在440nm波長處的光吸收確定放線菌素D的濃度，這類制品便可用于抑制自身引導(dǎo)作用。40.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調(diào)至pH值至7.0，用蒸餾水定容1ml，分裝成

4、小份保存于-70510mol/L乙酸酰溶液【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后過濾除菌。610%過硫酸銨溶液【配制方法】把1g過硫酸銨溶解于終量為10ml的水溶液中，該溶液可在4保存數(shù)周。7BCIP溶液【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于482BES緩沖鹽溶液【配制方法】用總體積90ml的蒸餾水溶解1.07g鹽溶液BESN，N-雙（2-羥乙基）-2-氨基乙磺酸、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室溫下用HCl調(diào)節(jié)該溶液的pH值至6.96、然后加入蒸餾水定容至100ml

5、，用0.22m濾器過濾除菌，分裝成小份，保存于-20。91mol/L CaCl2溶液【配制方法】在200ml蒸餾水中溶解54g CaCl2?6H2O，用0.22m濾器過濾除菌，分裝成10ml小份貯存于-20?！咀⒁狻恐苽涓惺軕B(tài)細(xì)胞時，取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至100ml，用Nalgene濾器（0.45m孔徑）過濾除菌，然后驟冷至0。102.5mol/L CaCl2溶液【配制方法】在20ml蒸餾水中溶解13.5g CaCl2?6H2O，用0.22m濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20。111mol/L二硫蘇糖醇（DTT）溶液【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液（pH5.

6、2）溶解3.09g DTT，過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20?！咀⒁狻緿TT或含有DTT的溶液不能進(jìn)行高壓處理。12脫氧核苷三磷酸（dNTP）溶液【配制方法】把每一種dNTP溶解于水至濃度各為100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris堿分別調(diào)節(jié)每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH試紙檢測），把中和后的每種dNTP溶液各取一份作適當(dāng)稀釋，在給出的波長下讀取光密度計算出每種dNTP的實際濃度，然后用水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP，分裝成小份貯存于-70。130.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二

7、胺四乙酸二鈉（EDTA-Na?2H2O），在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0（約需20g NaOH顆粒）然后定容至1L，分裝后高壓滅菌備用?！咀⒁狻縀DTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值調(diào)至接近8.0，才能完全溶解。14溴化乙錠（10mg/ml溶液）【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，保存于室溫?！咀⒁狻啃⌒模轰寤义V是強誘變劑并有中度毒性，使用含有這種染料的溶液時務(wù)必戴上手套，稱量染料時要戴面罩。152HEPES緩沖鹽溶液【配制方法】用總量為90ml的蒸餾水溶解1.6g NaCl、0.0

8、74g KCl、0.027g Na2PO4?2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.05，再用蒸餾水定容至100ml。用0.22m濾器過濾除菌，分裝成5ml小份，貯存于-20。16IPTG溶液【配制方法】IPTG為異丙基硫代-D-半乳糖苷（分子量為238.3），在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG后，用蒸餾水定容至10ml，用0.22m濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20。171mol/L乙酸鎂溶液【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸鎂，用水定容至1L過濾除菌。181mol/L MgCl2溶液【配制方法】在800ml水中溶解2

9、03.4g MgCl2?6H2O，用水定容至1L，分裝成小份并高壓滅菌備用?！咀⒁狻縈gCl2極易潮解，應(yīng)選購小瓶（如100g）試劑，啟用新瓶后勿長期存放。19-巰基乙醇（BME）溶液【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液，應(yīng)裝在棕色瓶中保存于4。【注意】BME或含有BME的溶液不能高壓處理。20NBT溶液【配制方法】把0.5g氯化氮藍(lán)四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4。21酚/氯仿溶液【配制方法】把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/L Tris?HCl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆蓋等體積的0.01mol/l Tris?HCl(pH

10、7.6)液層，保存于4?！咀⒁狻糠痈g性很強，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡，穿防護(hù)服。所有操作均應(yīng)在化學(xué)通風(fēng)櫥中進(jìn)行。與酚接觸過的部位皮膚應(yīng)用大量的水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。2210mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液【配制方法】用異丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分裝成小份貯存于-20。如有必要可配成濃度高達(dá)17.4mg/ml的貯存液（100mmol/L）?！咀⒁狻縋MSF嚴(yán)重?fù)p害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、吞進(jìn)或通過皮膚吸收后有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF，應(yīng)立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應(yīng)予丟棄。PMSF在水溶液

11、中不穩(wěn)定。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中。PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快，且25的失活速率高于4。pH值為8.0時，20mmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min，這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié)為堿性（pH8.6）并在室溫放置數(shù)小時后，可安全地予以丟棄。23磷酸鹽緩沖溶液（PBS）溶液【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034105Pa)高壓下蒸氣滅菌20min。保存于室溫。241mol/L乙酸鉀（

12、pH7.5）溶液【配制方法】將9.82g乙酸鉀溶解于90ml純水中，用2mol/L乙酸調(diào)節(jié)pH值至7.5后加入純水定容到1L，保存于-20。25乙酸鉀溶液（用于堿裂解）【配制方法】在60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度為5mol/L的溶液。263mol/L乙酸鈉（pH5.2和pH7.0）溶液【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2或用稀乙酸調(diào)節(jié)pH值至7.0，加水定容到1L，分裝后高壓滅菌。275mol/L NaCl溶液【配制方法】在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容

13、至1L，分裝后高壓滅菌。2810%十二烷基硫酸鈉（SDS）溶液【配制方法】在900ml水中溶解100g電泳級SDS，加熱至68助溶，加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分裝備用?！咀⒁狻縎DS的微細(xì)晶粒易擴(kuò)散，因此稱量時要戴面罩，稱量完畢后要清除殘留在稱量工作區(qū)和天平上的SDS，10%SDS溶液無須滅菌。2920SSC溶液【配制方法】在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g檸檬酸鈉，加入數(shù)滴10mol/l NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。3020SSPE溶液【配制方法】在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH

14、2PO4?H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7.4（約需6.5ml 10ml/L NaOH），加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。31100%三氯乙酸溶液【配制方法】在裝有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。321mol/L Tris溶液【配制方法】在800ml水中溶解121.91g Tris堿，加入濃HCl調(diào)節(jié)pH值至所需值。應(yīng)使溶液冷至室溫后方可最后調(diào)定pH值，加水定容至1L，分裝后高壓滅菌?！咀⒁狻咳?mol/L溶液呈現(xiàn)黃色，應(yīng)予丟棄并置備質(zhì)量更好的Tris。盡管多種類型的電極均不能準(zhǔn)確測量Tris溶液的pH值，但仍可向大多數(shù)廠

15、商購得合適的電極。Tris溶液的pH值因溫度而異，溫度每升高1，pH值大約降低0.03個單位。例如：0.05mol/L的溶液在5、25、和37時的pH值分別為9.5、8.9和8.6。33Tris緩沖鹽溶液（TBS）（25mmol/l Tris）【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris堿，加入0.015g酚并用HCl調(diào)至pH值至7.4，用蒸餾水定容至1L，分裝后在151bf/in2(1.034105Pa)高壓下蒸汽滅菌20min，于室溫保存。34X-gal溶液【配制方法】X-gal為5-溴-4-氯-3-吲哚-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成

16、的20mg/ml的貯存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，裝有X-gal溶液的試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被破壞，并應(yīng)貯存于-20。X-gal溶液無須過濾除菌。 配制：乙二胺四乙酸二鈉鹽滴定液(0.1mol/L)稱取乙二胺四乙酸二鈉鹽40g，加熱溶于1000ml水中，冷卻，搖勻。乙二胺四乙酸二鈉鹽滴定液(0.05mol/L)稱取乙二胺四乙酸二鈉鹽20g，加熱溶于1000ml水中，冷卻，搖勻。乙二胺四乙酸二鈉鹽滴定液(0.02mol/L)稱取乙二胺四乙酸二鈉鹽8g，加熱溶于1000ml水中，冷卻，搖勻。標(biāo)定：標(biāo)定：0.1mol/L乙二胺四乙酸二鈉鹽溶液，取于約800灼燒至恒重的基準(zhǔn)氧化鋅0.25g

17、0.0001g，用少量水濕潤，加2ml稀鹽酸20%使其溶解，加水100ml，用10%氨水調(diào)至PH=78，加10ml氨氯化銨（pH=10）及鉻黑T指示劑，用配制好的乙二胺四乙酸二鈉滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液由紫色變?yōu)榧兯{(lán)色。同時做空白。C（EDTA）乙二胺四乙酸二鈉鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液量濃度 mol/LV1乙二胺四乙酸二鈉鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液用量 mlV2乙二胺四乙酸二鈉鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液用量 ml0.08138與1.00ml乙二胺四乙酸二鈉鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液1.000mol/L相當(dāng)?shù)囊钥吮硎镜难趸\的質(zhì)量1.幾種常用溶液濃度的表示法（1）質(zhì)量百分比濃度：用溶質(zhì)的質(zhì)量占全部溶液質(zhì)量的百分比來表示的濃度。簡稱百分濃度。（2

18、）體積百分比濃度：用溶質(zhì)的質(zhì)量占溶劑體積的百分比來表示的濃度。在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中常用這種濃度。（3）體積比濃度：液體試劑相互混和或液體試劑用水稀釋時常用此法。例如，13酒精溶液指的是1體積的酒精和3體積的蒸餾水混和而成的酒精水溶液，13中的前一個數(shù)字指的是溶質(zhì)的體積數(shù)，后一個數(shù)字指的是溶劑的體積數(shù)。（4）物質(zhì)的量濃度：用1升溶液里含有溶質(zhì)的量來表示的溶液濃度。目前習(xí)慣稱摩爾濃度，用M表示。（5）當(dāng)量濃度：用每升溶液里所含溶質(zhì)的克當(dāng)量數(shù)表示的濃度。通常用N表示。2.常用酸堿溶液的配制表4-12常用酸堿溶液的配制3.常用鹽溶液的配制表4-13常用鹽溶液的配制續(xù)表常用溶液的配制10.5mol/l EDT

19、A(pH8.0)溶液【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na?2H2O），在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0（約需20g NaOH顆粒）然后定容至1L，分裝后高壓滅菌備用。【注意】EDTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值調(diào)至接近8.0，才能完全溶解。0. 1mol/l EDTA(pH8.0)溶液【配制方法】在800ml水中加入37.224g二水乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na?2H2O），在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用2當(dāng)量NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0然后定容至1L。使用時稀釋一百倍變成1mMol/l EDTA工作液。PH值調(diào)至

20、82磷酸鹽緩沖溶液（PBS）溶液【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034105Pa)高壓下蒸氣滅菌20min。保存于室溫。3Tris緩沖鹽溶液（TBS）（25mmol/l Tris）【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris堿，加入0.015g酚并用HCl調(diào)至pH值至7.4，用蒸餾水定容至1L，分裝后在151bf/in2(1.034105Pa)高壓下蒸汽滅菌20min，于室溫保存。Tris緩沖

21、鹽溶液（TBS）（50mmol/l Tris PH7.6）Tris緩沖鹽溶液（TBS）（50mmol/l Tris）【配制方法】稱取Tris（三羥甲基氨基甲烷）6.057g，加少許雙蒸水溶解后加1HCL42ml,Nacl 8.5g,最后加雙蒸水至1000ml,用1N HCL或NAOH調(diào)至7.6,充分搖勻,4保存4當(dāng)量當(dāng)量表示元素或化合物相互作用時的重量比的數(shù)值1mol/L的H2SO4,如果換成當(dāng)量濃度就應(yīng)該是2NH2SO4，大概的意思就是1mol的H2SO4會有2mol的氫離子，類似的1mol/L的HCL就是1N，1mol/L的NAOH就是1N，1mol/L的CA(OH)2就是2N,這是酸堿的

22、。如果是氧化物或是還原物就看能得失的電子數(shù)，比如說1mol/L的K2Cr2O7的當(dāng)量濃度就應(yīng)該是6N,1mol/L的KMnO4的當(dāng)量濃度是5N。如果是鹽類，就看能與酸或堿結(jié)合所要的H+或OH-數(shù)量，比如說NA2CO3的就是2，NAHCO3是11當(dāng)量HCL配制：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。1當(dāng)量NaOH配制：稱取NaOH 4g 配成100ml溶液。1當(dāng)量硫酸溶液：量取分析純硫酸（比重1.83）28毫升，慢慢注入500 毫升水中，冷卻后稀釋到1升。0.1當(dāng)量硫酸溶液：量取分析純硫酸2.8毫升，溶解于500毫升水中，冷卻后稀釋到1升。配制培養(yǎng)基有兩種方法可以選擇，一是購買培養(yǎng)基中所有化學(xué)

23、藥品，按照需要自己配制；二是購買商品的混合好的培養(yǎng)基基本成分粉劑，如MS、B5等。自己配制可以節(jié)約費用，但浪費時間、人力、且有時由于藥品的質(zhì)量問題，給實驗帶來麻煩。就目前國內(nèi)的情況看，大部分還是自己配制。為了方便起見，現(xiàn)以MS培養(yǎng)基為例介紹配置培養(yǎng)基的主要過程。1、配制幾種母液（1）配制MS大量元素母液一般將大量元素分別配制成100倍的母液，使用時再分別稀釋100倍。分別稱取NH4NO3 165g KH2PO4 17gKNO3 190g CaCl22H2O 44gMgSO47H2O 37g各自配成1L的母液。倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。（2）配制MS微量元素母液一般將微量元素配制成100倍母液。依次稱取KI 0.083g Na2MoO42H2O 0.025gH3BO3 0.62g CuSO45H2O 0.0025gMnSO4H2O 1.69g CoCl26H2O 0.0025gZnSO47H2O 0.86g配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。CuSO45H2O和CoCl26H2O 由于稱取量很小，如果天平精確度沒有達(dá)到萬分之一，可先配成調(diào)整液。分別稱取CuSO45H2O 0.05g CoCl26H2O 0.05g各自配成100ml的調(diào)整液，然后取5ml就還有0.0025g的量。（3）配