腦得生丸中葛根異黃酮的提取工藝研究

1、腦得生丸中葛根異黃酮的提取工藝研究    【摘要】 目的 優(yōu)選腦得生丸中有效成分葛根異黃酮的提取工藝。方法 以正交設(shè)計(jì)安排試驗(yàn)，采用高效液相色譜法測定葛根素和大豆苷的含量，并以此為指標(biāo)考察溶劑濃度、溶劑用量、提取時(shí)間3個因素對異黃酮提取率的影響。結(jié)果 用12倍量的體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇回流提取2次，每次1 h的條件為最佳提取工藝。結(jié)論 本提取工藝設(shè)計(jì)合理，穩(wěn)定，可為腦得生丸的進(jìn)一步開發(fā)提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】 腦得生丸；異黃酮；葛根；大豆苷；提取工藝腦得生丸收載于中國藥典2005

2、年版一部，由三七、川芎、紅花、山楂和葛根等加工而成的蜜丸。具有活血化瘀、疏通經(jīng)絡(luò)、醒腦開竅之功效，是治療腦動脈硬化、腦中風(fēng)及腦出血后遺癥的常用藥。葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata (Willd.) Ohwi的干燥根，主要含有葛根素、大豆苷、大豆苷元等異黃酮類成分，能改善冠脈、腦和外周血循環(huán)，抑制血小板聚集，降低血壓，降低心肌耗氧量，。由于腦得生丸處方所含有效成分的極性差別較大，為進(jìn)一步純化的需要，本課題組將其處方分為葛根、紅花和三七、川芎、山楂兩個部分，分別進(jìn)行提取工藝研究。本文對葛根和紅花這部分進(jìn)行報(bào)道，以葛根素、大豆苷作為異黃酮類成分的定量指標(biāo)

3、，探討了腦得生丸中葛根異黃酮的最佳提取工藝條件。1 儀器與試藥11 儀器 Waters 2695型高效液相色譜儀；Waters 2996二級管陣列檢測器；Waters Empower色譜工作站；RE52CS旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀和B220型恒溫水浴鍋（上海亞榮生化儀器廠）；十萬分之一電子分析天平（SHIMADZU）；純水制備系統(tǒng)（重慶艾科浦）；SHBIV22B循環(huán)水多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）。12 試藥 色譜甲醇，自制純凈水，其它試劑均為分析純；葛根和紅花藥材購于河南省藥材總公司，由我院生藥教研室李書淵教授分別鑒定為

4、豆科植物野葛Pueraria lobata (Willd.) Ohwi的干燥根和菊科植物紅花（Carthamus tinctorius L.）的干燥花；葛根素和大豆苷對照品（批號：7522200108，中國藥品生物制品檢定所）。2 方法與結(jié)果21 色譜條件 以十八烷基鍵合硅膠柱為色譜柱；以甲醇水(體積比2080)為流動相；檢測波長為250 nm；流速1.0 mL/min；柱溫30 。22 對照品溶液的配制 精密稱取葛根素和大豆苷對照品，分別置10 mL容量

5、瓶中，加入甲醇5 mL，超聲溶解后，用甲醇定容至刻度，制得葛根素質(zhì)量濃度為0.512 mg·mL-1，大豆苷質(zhì)量濃度為0.925 mg·mL-1，密封保存，備用。23 藥材溶液的制備 取葛根藥材粉末(過3號篩)，精密稱定，置錐形瓶中，精密加體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。24 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密移取對照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，2.0

6、0;mL 置10 mL 容量瓶中,用甲醇定容至刻度。0.45 m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液。進(jìn)樣體積10 L,按色譜條件測得進(jìn)樣量與峰面積,計(jì)算回歸方程，結(jié)果見表1。表1 兩種異黃酮的回歸方程和線性范圍（略）Tab.1 Regression equations and linear ranges of two kinds of Isoflavone 25 提取工藝條件優(yōu)選5 按復(fù)方腦得生丸處方量的1/5，稱取紅

7、花18.2 g與葛根52.2 g，等量9份藥材。按正交設(shè)計(jì)安排試驗(yàn) (見表2)，回流提取2次，合并濾液，回收溶劑至500 mL，定量移取25 mL，置1 000 mL容量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇至刻度，濾過，取續(xù)濾液作為正交試驗(yàn)的供試樣品溶液。進(jìn)樣10 L,照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定。由外標(biāo)法分別計(jì)算葛根素和大豆苷含量，兩者之和為異黃酮的含量。結(jié)果見表3。表2 因素和水平表（略）Tab.2 Factors and levels26 陰性干擾試驗(yàn) 稱

8、取紅花藥材18.2 g，加體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇12倍量，回流提取2次，1 h/次。以下操作同“2.5”項(xiàng)操作。色譜圖見圖1。A.對照品;B.供試樣品;C.陰性樣品1.葛根素;2.大豆苷圖1 高效液相色譜圖（略）Fig.1 HPLC chromatograms表3 正交實(shí)驗(yàn)L9(3)4結(jié)果分析表（略）Tab.3 Analysis of the orthogonal experiment L9(34）*相當(dāng)于每克葛根藥材中的含量表4 方差分析表（略）Tab.4

9、0;Analysis of variance3 討論31 由表3中的R值可看出,影響異黃酮含量提取的主次因素依次為溶劑濃度>提取時(shí)間>溶劑用量。表4的方差分析表明，溶劑濃度對試驗(yàn)有顯著性意義，提取時(shí)間次之，溶劑用量影響相對較小。但采用低濃度乙醇回流提取時(shí)雜質(zhì)較多，結(jié)合生產(chǎn)需要，確定腦得生丸中異黃酮類成分的優(yōu)選提取工藝為A1B2C2,即：選用12倍量的體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇，回流提取2次，每次1 h。按此工藝進(jìn)行，以葛根素和大豆苷為指標(biāo)，相對于葛根藥材，其異黃酮的轉(zhuǎn)移率可達(dá)到90%以上。32 本研究首次以葛根素和大豆苷為指標(biāo)

10、，采用高效液相色譜法考察腦得生丸中異黃酮的提取工藝。該方法與文獻(xiàn)6,7所采用的UV法相比，結(jié)果更準(zhǔn)確，所優(yōu)選的提取工藝切實(shí)可行?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2005年版一部S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：572.2 禹志領(lǐng)，張廣欽，趙紅旗.葛根總黃酮對腦缺血的保護(hù)作用J.中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào),1997,28(11):310312.3 曹鐘靈，李建北，張東明.葛屬植物中異黃酮類化合物的研究進(jìn)展J.中藥材，2005,28(1):6771.4 祝世發(fā)，陳文，江發(fā)壽，等.葛根中葛根素的提取工藝研究J.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2004,15(3):114.5 周永治，馬志慶.醫(yī)藥數(shù)理統(tǒng)計(jì)