選擇性垂體甲狀腺激素抵抗綜合征患者的臨床特點與THRβ基因突變的研究

1、選擇性垂體甲狀腺激素抵抗綜合征患者的臨床特點與THR基因突變的研究         11-01-09 14:03:00     作者：施秉銀，梁靜    編輯：studa20【摘要】  目的 研究2例選擇性垂體甲狀腺激素抵抗綜合征患者的臨床特點及甲狀腺激素受體(THR)基因突變，探索該病的發(fā)病機制。方法 收集2例患者及其父母的臨床資料并留取外周血標(biāo)本，提取基因組DNA，應(yīng)用PCRDNA直接測序的方法研究患者及父母的THR基因有

2、無突變。結(jié)果 2例患者及父母的THR基因第1-10外顯子未發(fā)現(xiàn)突變。結(jié)論 散發(fā)性垂體甲狀腺激素抵抗綜合征患者發(fā)病可能與THR基因突變無關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  激素抵抗；甲狀腺激素受體；基因；突變ABSTRACT: Objective  To study the clinical and THRgene mutation of two cases of pituitary thyroid hormone resistance. Methods  The clinical data and peripheral blood samples of the patients

3、and their family members were collected, and then DNA was isolated. PCR and direct sequencing techniques were performed to determine if there were mutations in their THRgene. Results  No mutation was found in exon 1-10. Conclusion  Pathogenesis of sporadic pituitary resistance to thyroid h

4、ormone usually has no relation with mutation of THRgene.KEY WORDS: hormone resistance; thyroid hormone receptor; gene; mutation甲狀腺激素抵抗綜合征(thyroid hormone resistance syndrome, THRS)是由于甲狀腺作用的靶器官對甲狀腺激素的反應(yīng)性降低而引起的一種常染色體顯性遺傳性疾病，血清游離T3(FT3)和/或游離T4(FT4)升高，同時伴有不適當(dāng)正常或升高的血清促甲狀腺激素(TSH)水平是該病的典型生化特征1。以家族性發(fā)病多見，有大約

5、15%的散發(fā)病例。自1967年Refetoff等2報道第一例患者以來，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了250多個家系，700多例患者34。國內(nèi)近年來也有病例報道5。國內(nèi)外的研究者從分子遺傳學(xué)、分子生物學(xué)和內(nèi)分泌學(xué)等多側(cè)面對這些病例進行了研究。1988年Usala等6通過限制性片段長度多態(tài)性分析證實該病與甲狀腺激素受體(THR)基因突變有關(guān)。截止目前僅有幾例散發(fā)的THRS病例報道。本研究采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)DNA直接測序的方法，檢測我院門診2例選擇性垂體甲狀腺激素抵抗綜合征(pituitary resistance to thyroid hormone, PRTH)患者及其父母的THR基因突變率最高的1-1

6、0外顯子，并結(jié)合臨床特點，從分子水平探討該病的發(fā)病機制。1  資料與方法1.1  臨床資料 患者1，女性，29歲，因“聽力下降27年，怕熱、多汗、心悸3年”就診。患者于2歲時因“發(fā)熱、咳嗽”診斷為肺炎，經(jīng)治療后上述癥狀緩解。但逐漸出現(xiàn)雙耳聽力下降，以左側(cè)為著，伴有語言障礙，發(fā)音不清，電測聽檢查提示“感音神經(jīng)性耳聾”，治療后無好轉(zhuǎn)。    3年前體檢時發(fā)現(xiàn)甲狀腺腫大，伴有輕微怕熱、多汗、心悸，大便次數(shù)增多，每日2-3次，無多食、消瘦，外院化驗血清TT3 473ng/dL(參考值65-240ng/dL)，TT4 27.5g/dL(參考值5

7、.5-13g/dL)，F(xiàn)T3 14.5pmol/L(參考值2.8-8.5pmol/L)，F(xiàn)T4 50.3pmol/L(參考值9.5-26.5pmol/L)，TSH 10.4IU/mL(參考值<10IU/mL)診斷為“甲狀腺功能亢進癥”，服用他巴唑30mg/d治療，半年后上述癥狀仍無緩解，TSH一直高于正常。以后曾在多家醫(yī)院就診，反復(fù)調(diào)整他巴唑的劑量(10-15mg/d)，甲狀腺功能檢查一直未能恢復(fù)正常，為進一步診治，于2004年6月來我院就診。家族中無類似病史。    發(fā)病以來，生長發(fā)育及智力正常。11歲月經(jīng)初潮，經(jīng)期不規(guī)律。體格檢查：體溫36.5，呼吸20

8、次/min，脈搏100次/min，血壓120/75mmHg(1mmHg=0.133kPa)，身高163cm，體重56kg，發(fā)育正常，營養(yǎng)中等，查體合作，發(fā)音不清。左耳聽力喪失，右耳聽力嚴(yán)重下降，無Graves病眼征，甲狀腺度腫大，質(zhì)軟，無結(jié)節(jié)，無壓痛，無震顫及血管雜音。其他檢查無異常發(fā)現(xiàn)。    輔助檢查：血、尿、糞常規(guī)正常，血糖、肝腎功、血漿蛋白均正常，甲狀腺球蛋白抗體TGAb 1.9%(正常<30%)，甲狀腺微粒體抗體TMAb 1.0%(正常<20%)，HCG<1mIU/mL(正常值<5mIU/mL)，F(xiàn)SH、LH、E、P均正常。頭顱及

9、蝶鞍MRI正常。甲狀腺掃描示甲狀腺彌漫性腫大?；颊邅砦以汉笸Ｓ盟瓦?月，然后行T3抑制試驗7(自實驗第1天起每天給予患者LT3口服，并逐漸增加LT3的劑量，由50g/d增至100g/d和200g/d，每一劑量持續(xù)3d，在實驗前及每一劑量應(yīng)用3d后，分別測定甲狀腺功能、血清膽固醇、甘油三酯、鐵蛋白、肌酸磷酸激酶、泌乳素、24h尿氮、心率和基礎(chǔ)代謝率(BMR)(表1)。其父母甲狀腺功能測定正常。表1  T3抑制試驗的結(jié)果（略）    之后試用三碘甲狀腺乙酸(TRIAC)治療半年后，月經(jīng)逐漸恢復(fù)正常，甲功結(jié)果檢測：FT4：54.9pmol/L；FT3：25.

10、3pmol/L；hTSH：5.26IU/mL，第6個月FT4：54.9pmol/L；FT3：15.9pmol/L；hTSH：6.59IU/mL。    患者2，女性，18歲，因“多汗心悸2年”就診，兩年前無明顯誘因出現(xiàn)發(fā)熱，體溫波動于38-39，自覺心悸，在包頭醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院住院，經(jīng)治療后，發(fā)熱消失，但心悸無明顯緩解同時伴有多汗。后轉(zhuǎn)至該院兒科繼續(xù)治療，查心肌酶譜正常，ECG示竇性心動過速，甲功提示FT3：8.8pmol/L(參考值：3.2-9.6pmol/L)，F(xiàn)T4：16pmol/L(參考值：8.6-25.8pmol/L)，hTSH：1.93(參考值：0.

11、35-5.5pmol/L)，未給特殊治療。兩月后，再次復(fù)查甲功，F(xiàn)T3、FT4均升高，hTSH正常(FT3：16pmol/L，F(xiàn)T4：>200pmol/L，hTSH：2.1)，診斷為“甲亢”服用他巴唑30mg/d治療，半年后自行減至25mg/d，后逐步減量，四個月后減為5mg，并加用甲狀腺素片20mg/d，甲狀腺素片服用兩月后停用，以后一直服用他巴唑5mg/d治療，一年后改服“富馬酸比索絡(luò)爾”5mg/d至今。期間癥狀時好時壞，曾在多家醫(yī)院就診，甲狀腺功能檢查一直未能恢復(fù)正常，為進一步診治，于2005年6月來我院就診。家族中無類似疾病史。    自發(fā)病以來，生

12、長發(fā)育及智力正常。11歲月經(jīng)初潮，經(jīng)期不規(guī)律。體格檢查：體溫36.5，呼吸20次/min，脈搏92次/min，血壓120/80mmHg，身高164cm，體重57.5kg，發(fā)育正常，營養(yǎng)中等，查體合作，發(fā)音不清。無Graves病眼征，甲狀腺度腫大，質(zhì)軟，無結(jié)節(jié)，無壓痛，無震顫及血管雜音。其他檢查無異常發(fā)現(xiàn)。    輔助檢查：血、尿、糞常規(guī)正常，血糖、肝腎功、血漿蛋白均正常。甲功結(jié)果檢測：FT3：11.28pmol/L；FT4：22.01pmol/L；hTSH：8.43IU/mL，甲狀腺B超：甲狀腺輕度腫大，實質(zhì)回聲均勻；甲狀腺ECT示：甲狀腺顯影清晰，位置正常，形態(tài)增大，甲狀腺影像放射性分布均勻，對稱。垂體MRI檢查正常。其父母甲狀腺功能測定正常。1.2  方法抽取2例患者及其父母、5名健康對照的靜脈血各5mL，以復(fù)方枸櫞酸鈉(ACD)抗凝，鹽析法提取外周血白細胞基因組DNA，用TE緩沖液溶解，以紫外分光光度儀測定各DNA樣品的純度和濃度。PCR以各DNA樣品為模板，用Primer 5.0軟件對THR基因的10個外顯子分別設(shè)計引物，由上海生工公司合成(表2)，并用雙蒸水溶解，各引物濃度為10pmol/L，PCR反應(yīng)體系如下