敗醬復方對混合菌液所致大鼠慢性盆腔炎的治療作用

1、敗醬復方對混合菌液所致大鼠慢性盆腔炎的治療作用         【關鍵詞】  敗醬摘要：目的：研究敗醬復方對混合菌液所致大鼠慢性盆腔炎的治療作用，并初步探討其作用機制。方法：采用混合菌液注入劃傷的子宮內造成大鼠慢性盆腔炎，將60只雌性 Wistar大鼠隨機分為6組：假手術組、模型組、陽性藥組和敗醬復方高、中、低劑量組，每組10只，造模后2d開始ig給藥，連續(xù)21 d。檢測血液流變學、免疫學指標及病理學形態(tài)。結果：模型組大鼠全血粘度、血漿粘度和紅細胞壓積顯著升高，脾淋巴細胞轉化指數(shù)、血清IL2降低，IL6升

2、高；敗醬復方(ig,1.5、30、60gkg-1d-1)可不同程度改善上述指標；組織形態(tài)學觀察發(fā)現(xiàn)敗醬復方給藥組大鼠慢性盆腔炎病理改變明顯減輕。結論：敗醬復方對混合菌液所致大鼠慢性盆腔炎有顯著的治療作用，其作用機制可能與改善血液循環(huán)和調節(jié)免疫功能有關。關鍵詞：敗醬復方；慢性盆腔炎；血液流變學；免疫學；病理形態(tài)學             慢性盆腔炎(chronic pelvic inflammatory disease, CPID)是婦科常見多發(fā)病，目前西醫(yī)療法以抗生素和皮質激

3、素為主，對于改善癥狀有一定的療效，但有許多不良反應，且很難消除病因1。中醫(yī)常采用活血化瘀、清熱利濕、溫經(jīng)散寒和理氣止痛等方法，往往有較好的療效。敗醬復方是結合中醫(yī)理論研制的復方中藥制劑，多年臨床實踐表明，該藥對診斷明確的慢性盆腔炎患者有較好的療效，但作用機制尚不明確。本實驗采用混合菌液致大鼠慢性盆腔炎模型，觀察該復方對慢性盆腔炎的治療作用，并對其作用機制進行了探討。1 實驗材料11 動物和儀器雌性Wistar大鼠60只，8周齡，體重200±20g，由武漢大學醫(yī)學院動物實驗中心提供，動物許可證號SYXK(鄂)2004004。Stat Fax2100酶聯(lián)免疫檢測儀為美國Awareness

4、公司產(chǎn)品，YDAIV(A)型全自動血液粘度儀為北京宏潤達公司產(chǎn)品，超凈工作臺為蘇州凈化公司產(chǎn)品。12 藥品、試劑及菌種敗醬復方由敗醬草、連翹、苦參、赤芍、黃柏、丹參、蒲公英和甘草等組成，上述藥物由中國科學院武漢植物研究所江明喜研究員鑒定。用適量冷水浸泡30分鐘，武火急煎10分鐘，再用文火慢煎20分鐘即可，由武漢大學藥物非臨床研究中心制備。婦科千金片，規(guī)格為032g/片，含生藥34g/片，湖南株洲制藥廠生產(chǎn)，批號200407077。高效植物凝集素(PHA)為暨南大學暨東生物工程研究所產(chǎn)品；IL2、IL6試劑盒由深圳晶美生物試劑有限公司提供；四甲基偶氮唑鹽(MTT)購自Sigma公司；RPMI16

5、40培養(yǎng)液和小牛血清購自GIBCO公司。菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌由武漢大學中南醫(yī)院檢驗科臨床分離并保種，以211的比例溶于無菌生理鹽水配成濃度為3×109 ml-1的混合細菌懸液。2 結果21  模型的建立2用03%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠(50mgkg-1)，無菌條件下于大鼠下腹部正中切口0.81cm，暴露并固定子宮，用注射器機械損傷子宮內膜組織，注入0.2ml混合細菌懸液至子宮雙側內，縫合切口，恢復飲水，正常清潔飼養(yǎng)。假手術組操作基本同模型組，但子宮內未注射混合菌液。22 分組及給藥將60只大鼠隨機分為6組，每組10只，于造模后2d開始ig給藥

6、，連續(xù)21天。敗醬復方低、中、高劑量組分別ig敗醬復方15、30、60gkg-1d-1；陽性藥組ig婦科千金片2.8gkg-1d-1；假手術組及模型組ig等體積生理鹽水，各組給藥容積均為15mlkg-1。23  觀察指標及測定方法231 血液流變學指標       末次給藥12小時后，各組大鼠麻醉后頸總動脈抽血測定全血粘度、血漿粘度和紅細胞壓積。232  免疫學指標       IL2和IL6測定取大鼠肝素抗凝血，離心分離血漿，按試劑盒說明書采用雙抗體夾心

7、法測定IL2和IL6濃度。脾淋巴細胞轉化指數(shù)測定       于給藥30 d后，無菌條件下取脾，按文獻3方法，用RPMI1640培養(yǎng)液制作單細胞懸液，并用TrisNH4Cl破壞紅細胞，鏡檢活細胞數(shù)90%后，調整細胞懸液濃度為2×106L-1，將細胞加入16孔培養(yǎng)板中，每樣品2孔，每孔1ml，其中一孔加入細胞周期分裂素(PHA，5mgL-1)，另一孔作對照。置37，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)68h后，將細胞移入40孔培養(yǎng)板中，每孔加入細胞懸液100l，并加入5%MTT溶液10l，繼續(xù)培養(yǎng)4h，每孔加100l酸性異丙醇充分混勻，終止

8、反應，用酶聯(lián)免疫檢測儀作比色測定，計算脾淋巴細胞轉化指數(shù)(脾淋巴細胞轉化指數(shù)=加PHA淋巴細胞OD值未加PHA淋巴細胞OD值)。         233  子宮病理形態(tài)學觀察       取大鼠雙側子宮稱重后，先肉眼觀察其炎癥反應及周圍粘連情況，然后將子宮置10%福爾馬林溶液中固定，切片，HE染色，于光學顯微鏡下鏡檢，攝片。病理觀察指標及積分標準為：宮腔粘連閉塞或擴張：“-”無病變；“+”1/3病變；“+”1/32/3病變；“+”2/3以上病變。

9、腔壁結構病變：“-”各層結構正常；“+”粘膜固有層腺體結構消失；“+”肌層與粘膜層分界不清；“+”分層結構不清。上皮細胞變性壞死：“-”單柱狀上皮；“+”上皮細胞扁平或脫落1/3；“+”上皮細胞扁平或脫落1/32/3病變；“+”全層上皮細胞變性壞死。慢性炎細胞浸潤：“-”無慢性炎細胞浸潤；“+”小數(shù)散在或灶性且僅在粘膜固有層內；“+”散在或灶性但深入肌層；“+”多數(shù)散在或層狀浸潤并累及全層。內膜充血水腫：“-”無內膜充血水腫；“+”固有膜輕微充血水腫；“+”明顯充血水腫；“+”全層充血水腫。24  數(shù)據(jù)處理資料以均值±標準差(3實驗結果31對血液流變學指標的影響由表1可見，

10、模型組與假手術組比較全血粘度、血漿粘度和紅細胞壓積均顯著升高；敗醬復方給藥組全血粘度、血漿粘度和紅細胞壓積有顯著改善。表1 敗醬復方對血液流變學各指標的影響(略）注：與假手術組相比，* P0.01；與模型組比較，# P0.05, P0.01。32 對免疫學指標的影響由表2可見，敗醬復方高、中、低劑量組脾淋巴細胞轉化指數(shù)和血清IL2明顯升高，IL6顯著降低。表2 敗醬復方對免疫學指標的影響(略）注：與假手術組相比，* P0.01；與模型組比較# P0.05, P0.01。33 對大鼠慢性盆腔炎組織形態(tài)學的影響假手術組：肉眼觀察子宮顏色、硬度正常，漿膜面未見腫脹、充血。鏡下宮壁各層結構清晰，內膜表

11、面上皮偶見輕度增生，腺體未見明顯病變，間質無炎癥反應。模型組：肉眼觀察大部分子宮顏色暗紅，漿膜面明顯腫脹、充血，子宮重量增加，部分動物盆腔粘連。鏡下大鼠子宮粘連閉塞或擴張，子宮壁完全被破壞、壞死，已失去原有正常形態(tài)，結構紊亂，模糊不清，代之以多量成纖維細胞增生，以及炎性細胞浸潤，以中性粒細胞、淋巴細胞、漿細胞浸潤為主；粘膜上皮細胞部分變性壞死脫落，各層組織壞死，形成無結構形態(tài)；子宮腺體上皮壞死。敗醬復方組：子宮腫脹、充血等有不同程度減輕，少數(shù)子宮腺體腔閉塞，固有膜、肌層有輕度的炎性細胞浸潤，中、高劑量組成纖維細胞增生不明顯，其形態(tài)結構較接近正常。陽性藥組：子宮腫脹、充血也有減輕，宮壁各層結構尚

12、清晰。鏡下可見炎癥細胞浸潤及子宮內膜腺上皮一定程度增生，成纖維細胞增生不明顯，個別動物子宮內膜炎癥明顯。表3 敗醬復方對混合菌液引起的慢性盆腔炎大鼠子宮病理變化的影響(略)注：與假手術組相比，* P0.01；與模型組比較# P0.05, P0.01。4 討論對于慢性盆腔炎動物模型的建立，國內學者4較早采用化學性燒傷致炎的方法造成大鼠子宮內膜粘連模型，但它在感染方式、傳播途徑和病變特點上與人盆腔炎有較大的差別。所以，我們根據(jù)文獻2采用混合菌液加機械損傷的方法造成更貼近于人類盆腔炎的病理模型，觀察了敗醬復方的治療作用。結果顯示，敗醬復方給藥組子宮病變較模型組明顯減輕，表明敗醬復方對混合菌液所致慢性

13、盆腔炎有明顯的治療作用。中醫(yī)學認為慢性盆腔炎病機主要為瘀、熱、濕三者蓄積胞宮，導致沖任氣血運行不暢，為此我們選擇了血液流變學指標進行藥物療效的觀察。結果顯示，模型組大鼠全血粘度、血漿粘度和紅細胞壓積顯著升高，敗醬復方可不同程度改善上述指標。這可能是由于本方中含有丹參、赤芍、蒲公英、連翹等活血化瘀成份，可改善慢性盆腔炎大鼠的血液循環(huán)，有利于炎癥細胞的吸收及子宮內膜的修復。文獻還報道，敗醬草能增強網(wǎng)狀細胞和白細胞的吞噬能力，促進抗體形成及提高血清溶菌酶的水平，從而達到抗菌消炎的目的5。IL2是機體免疫調節(jié)網(wǎng)絡中最重要的細胞因子之一，可通過促進B細胞分裂、增殖以及NK細胞的活性作用，提高機體的免疫功

14、能6。IL6與其受體系統(tǒng)結合可促使分化成熟的B細胞分泌抗體，促進TC、TD細胞增殖分化等生物學效應，過量IL6的產(chǎn)生，會導致過于劇烈的免疫反應，對機體造成損害7。本研究結果顯示，模型組大鼠腺淋巴細胞轉化指數(shù)、血清IL2降低，IL6升高，敗醬復方各劑量組均可明顯提高脾淋巴細胞轉化指數(shù)、升高IL2，降低IL6，表明慢性盆腔炎的發(fā)病與機體免疫功能低下或紊亂有關。增強體液免疫和細胞免疫功能，使紊亂的免疫功能恢復正?？赡苁菙♂u復方的作用機制之一。參考文獻1 Grado S. Inflammation of the pelvis minor. Orv Hetil, 1998,139:21152120.2 張小麗，張靜云，陳瑞明，等盆炎寧到混合菌液致大鼠慢性盆腔炎的治療作用的實驗研究中藥藥理與臨床，2005，21：3740.3 周道洪，洪元珊，趙曼瑞測定淋巴細胞轉化和鼠白介素活性新方法MTT比色法中國免疫學雜志，1986，2：3941.4 陳靖宇，陳建民敗醬屬植物研究概況中草藥，1994，25：1011055 時燕平，傅友豐中藥三聯(lián)法治療慢性盆腔炎34例觀察中國中西醫(yī)結合雜志，1997，17：99100.6 Smith KA. Interleu