蜂膠黃酮對(duì)D-半乳糖致老年癡呆小鼠抗氧化能力的影響

1、蜂膠黃酮對(duì)D-半乳糖致老年癡呆小鼠抗氧化能力的影響 11-01-11 11:26:00 編輯：studa20 作者：蘇曉杰 高君1 張悅 趙蕾【摘要】 目的探討蜂膠黃酮(EEP)對(duì)D-半乳糖致老年性癡呆(AD) 小鼠腦指數(shù)、腦組織單胺氧化酶B(MAO-B)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)的影響。方法60只健康昆明小鼠隨機(jī)分成6組，分別為正常組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組及高中低3個(gè)劑量蜂膠黃酮治療組。正常組常規(guī)喂養(yǎng)，其余組皮下注射D-半乳糖100 mgkg-1d-1，共7 w，陽(yáng)性對(duì)照組造模同時(shí)灌胃50 mgkg-1d-1茴拉西坦膠囊;治療組3個(gè)劑量(300、150、75

2、 mgkg-1d-1)每天灌胃蜂膠黃酮;模型組灌胃等體積的生理鹽水。第50天處死小鼠取腦，測(cè)其腦指數(shù)及腦組織MAO-B，SOD，GSH-Px含量的變化。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組的腦指數(shù)顯著高于模型組(P0.05)，SOD，GSH-Px活性顯著高于模型組(P0.01)，MAO-B含量顯著低于模型(P0.01)，與正常對(duì)照組比較，各指標(biāo)相近。結(jié)論蜂膠黃酮能提高腦指數(shù)，增強(qiáng)抗氧化能力，抑制MAO-B活性，從而保護(hù)腦細(xì)胞，抵抗癡呆。 【關(guān)鍵詞】 蜂膠黃酮;D-半乳糖;老年性癡呆;腦指數(shù)【Abstract】ObjectiveTo research of effects of propolis flavonoids o

3、n superoxide dismutase (SOD), monoamine oxidase-B (MAO-B), glutathione peroxidase (GSH-Px) in the Alzheimer disease (AD) mices brains and brain index.Methods60 mice were randomly divided into 6 groups.Mice in normal group were fed with conventional additives.The others group were administrated with

4、D-galactose (100 mgkg-1d-1) for successive 7 weeks.Simultaneously, the mice were given with 50 mgkg-1d-1 aniracetam served as a positive control.Three experimental groups wereadministrated with high, middle and low dosages of propolis flavonoids (300, 150, 75 mg/kg).Mice in model group were daily ad

5、ministrated with saline water.After 50 days, the mice were killed and taken the brain.Brain index, MAO-B, SOD,GSH-Px in brains were determined.ResultsThe experimental group of brain indexwas significantly higher than that of model group (P0.05).SOD, GSH-Pxwere significantly higher than those of mode

6、l group (P0.01).MAO-B concentration was significantly lower than that of model group (P0.01).In the normal control group, the index was similar.ConclusionsPropolis flavonoids could increase the brainindex, promote the endogenous antioxidant activity, enhance the clearance of lipid peroxide and other

7、 metabolic waste, inhibit the MAO-B activity.Thereforepropolis flavonoids could protect cells, delay senile, improve AD symptoms.【Key words】Propolis flavonoids; D-galactose; Alzheimer disease; Brain index老年癡呆是威脅人類(lèi)健康的主要?dú)⑹种唬?5歲以上老年人患病率為3%8%，80歲以上老年人患病率高達(dá)20%1，其病因、病理機(jī)制等尚不明確，治療標(biāo)準(zhǔn)仍不統(tǒng)一。蜂膠黃酮(EEP)是蜂膠中所含的主要有

8、效成分之一，藥理作用廣泛。研究表明其具有清除自由基、抗脂質(zhì)過(guò)氧化、促進(jìn)腦血液循環(huán)、改善腦組織代謝等作用2。但目前還未見(jiàn)有關(guān)EEP抗老年癡呆的報(bào)導(dǎo)，本實(shí)驗(yàn)旨在探討EEP對(duì)老年癡呆小鼠的作用，為其治療老年癡呆方面的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。1材料與方法1.1材料與儀器EEP由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)生化教研室采用醇提取獲得，黑龍江省中藥研究所鑒定并測(cè)定含量;細(xì)胞超聲粉碎機(jī)購(gòu)自寧波科生儀器廠;高速低溫離心機(jī)D-37520為德國(guó)HERAEUS公司產(chǎn)品;7600-20全自動(dòng)生化分析儀為日本日立公司產(chǎn)品。D-半乳糖為Sigma公司產(chǎn)品;單胺氧化酶-B(MAO-B)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH

9、-Px)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所;茴拉西坦膠囊(三樂(lè)喜)為無(wú)錫凱西藥業(yè)有限公司產(chǎn)品(批號(hào):20081023，0.1 g/粒);其他試劑均為市售國(guó)產(chǎn)分析純。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明健康小鼠(雌雄各半，體重22 25 g)由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供。1.3方法將60只小鼠隨機(jī)分為6組：正常組，模型組，陽(yáng)性對(duì)照組(茴拉西坦膠囊組)、EEP高、中、低3個(gè)劑量治療組，每組10只。正常組以普通飲食喂養(yǎng)，其余組小鼠腹腔注射D-半乳糖100 mgkg-1d-1，連續(xù)7 w，建立小鼠AD模型。同時(shí)，高、中、低劑量治療組每天分別灌胃蜂膠黃酮300、150、75 mg/kg，陽(yáng)性對(duì)照組每天灌胃50 mg/kg茴

10、拉西坦膠囊，模型組灌胃等體積的生理鹽水。第50天斷頭處死小鼠，開(kāi)顱取腦，稱重，從斷頭至稱重在5 min內(nèi)完成。根據(jù)公式計(jì)算腦指數(shù)，腦指數(shù)=(腦重/體重)100%。按重量體積比(19)加生理鹽水制成10%腦組織勻漿液，3 000 r/min,離心10 min，4，取上清液，用日本日立7600-20全自動(dòng)生化分析儀，按試劑盒說(shuō)明檢測(cè)MAO-B、SOD及GSH-Px。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS17. 0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析及t檢驗(yàn)，全部數(shù)據(jù)用xs表示。 11-01-11 11:26:00 編輯：studa202結(jié)果2.1蜂膠黃酮對(duì)腦指數(shù)的影響模型組小鼠腦指數(shù)較低(4.520.63)%，與正常組(5

11、.160.79)%比較，差異有顯著性(P0.05);高、中劑量實(shí)驗(yàn)組及陽(yáng)性對(duì)照組腦指數(shù)較高(5.080.74)%，(4.980.65)%，(4.920.36)%，與模型組比較差異顯著(P0.05)，與正常組比較，無(wú)顯著性差異，低劑量EEP組(4.560.89)%與模型組無(wú)顯著差異。2.2蜂膠黃酮對(duì)腦中MAO-B、SOD、GSH-Px的影響高、中劑量治療組腦中MAO-B的含量明顯低于模型組(P0.01)，與正常組持平，而模型組MAO-B的含量顯著高于正常組(P0.01)。正常組腦中的SOD的含量明顯高于模型組(P0.01);治療組中高、中劑量SOD含量明顯高于模型組(P0.01)，與正常組接近，

12、低劑量組顯著高于模型組(P0.05)。各EEP治療組的GSH-Px含量明顯高于模型組(P0.01);與正常組相比，EEP高劑量治療組GSH-Px含量顯著升高(P0.05)，中、低劑量組與之比較，差異不顯著;模型組GSH-PX含量明顯低于正常組(P0.01)，見(jiàn)表1。表1EEP對(duì)AD模型小鼠腦中MAO-B、SOD、GSH-Px的影響3討論癡呆的主要特征是腦萎縮，腦重量減輕，體積縮小，腦溝回變窄，腦裂增寬，腦室擴(kuò)大。腦萎縮的主要原因是神經(jīng)元數(shù)量的減少，所以腦指數(shù)可以有效地反映腦組織的變化。MAO能催化各種單胺類(lèi)化合物的氧化脫氫作用，生成醛、氨和過(guò)氧化氫，分為MAO-A和MAO-B兩種，MAO-B活

13、性與年齡呈正相關(guān)，隨年齡增加而上升，與衰老密切相關(guān)3，4，而MAO-A則無(wú)此種關(guān)系。GSH-Px通過(guò)特異性地催化還原型谷胱甘肽(GSH)對(duì)氫過(guò)氧化物的還原反應(yīng)，而消除細(xì)胞內(nèi)有害的過(guò)氧化代謝產(chǎn)物，以阻斷脂質(zhì)過(guò)氧化連鎖反應(yīng)，從而起到保護(hù)細(xì)胞代謝的正常進(jìn)行的重要作用。目前認(rèn)為，GSH-Px活性是抗衰老藥物的重要指標(biāo)之一3，4。SOD是機(jī)體內(nèi)清除自由基的重要抗氧化酶之一，其活力和含量反映了機(jī)體清除氧自由基的能力。研究表明，隨著年齡的增長(zhǎng)，SOD清除氧自由基能力的下降，引起氧自由基及脂質(zhì)過(guò)氧化物(LPO)日益增多，由于生物膜中不飽和脂肪酸被氧化成過(guò)氧化物時(shí)，可使細(xì)胞膜的通透性改變，線粒體、微粒體膜膨脹破

14、裂，造成細(xì)胞代謝和功能形態(tài)的改變，最后導(dǎo)致機(jī)體衰老和老年性疾病的發(fā)生。SOD活性亦被認(rèn)為是抗衰老藥物的重要指標(biāo)之一3，4。由于各類(lèi)型的癡呆都有腦血流量降低，所以腦血管擴(kuò)張劑和腦細(xì)胞代謝促進(jìn)劑以改善腦血流，預(yù)防梗死和促進(jìn)代謝作用而廣泛使用。中醫(yī)藥對(duì)治療老年癡呆有較好的前景，針對(duì)病因進(jìn)行以氣養(yǎng)心、化痰通竅、滋陰補(bǔ)腎等治療，取得了較滿意的療效。目前EEP對(duì)D半乳糖致衰小鼠學(xué)習(xí)記憶的改善作用及對(duì)腦一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、乙酰膽堿酯酶(AchE)的作用已被證實(shí)5，本研究通過(guò)測(cè)定腦指數(shù)及腦組織中抗氧化酶等指標(biāo)，驗(yàn)證了EEP對(duì)老年性癡呆模型鼠具有一定的對(duì)抗作用，為EEP對(duì)老年性癡呆作用機(jī)制的研究及臨床藥物開(kāi)發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1劉琳琳，周坤福.中醫(yī)藥延緩衰老分子機(jī)制研究進(jìn)展J.江西中醫(yī)藥，2006;1(1)：57-