輻射滅菌初始污染菌

1、第26卷 第1期 2008年2月 輻 射 研 究 與 輻 射 工 藝 學 報 Vol.26, No.1J. Radiat. Res. Radiat. Process. February 2008醫(yī)療保健產(chǎn)品輻射滅菌初始污染菌檢測技術(shù)研究劉清芳（蘇州大學放射醫(yī)學和公共衛(wèi)生學院 蘇州215123）摘要 對全國52個廠家的148種不同出口醫(yī)療器械產(chǎn)品進行初始污染菌檢測技術(shù)的研究，為輻照劑量設(shè)定提供微生物參數(shù)。對148種醫(yī)療器械進行微生物培養(yǎng)條件、洗脫技術(shù)、校正因子、細菌總數(shù)檢測技術(shù)的選擇和驗證。建立了不同生物負載水平頻數(shù)分布圖，驗證了五種洗脫技術(shù)的洗脫能力。初始污染菌檢測技術(shù)研究能為醫(yī)療產(chǎn)品輻照劑量

2、設(shè)定提供精確的微生物信息。 關(guān)鍵詞 輻射滅菌，初始污染菌，劑量設(shè)定 中圖分類號 R817，R817-3，R144.1，R817.9+3輻照是一種優(yōu)良的滅菌方法，其操作簡便、滅菌效果好，適用范圍廣，經(jīng)輻照滅菌后的產(chǎn)品儲存時間長。產(chǎn)品的初始污染菌信息是確定輻照劑量的基礎(chǔ)，初始污染菌數(shù)檢測是通過使用初始污染菌估計技術(shù)和對該技術(shù)進行驗證共同完成的。由于產(chǎn)品理化性質(zhì)的多樣性和污染菌的廣譜性，不可能對所有情況均選用同一種估計技術(shù)。對某一特定的產(chǎn)品，初始污染菌數(shù)估計技術(shù)的選擇應(yīng)建立在以下的考慮上：與產(chǎn)品污染微生物洗脫率相關(guān)的因素；污染微生物的種類和分布；輻照產(chǎn)品的理化性質(zhì)。為了確保其準確性和穩(wěn)定性，對所選的

3、初始污染菌數(shù)估計技術(shù)，要進行驗證效果的確認：1. 如果洗脫是其中的一個操作部分，其充分性應(yīng)得到驗證。2. 依據(jù)污染微生物種類。選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，驗證其對微生物的抑制或促進作用。3. 如果產(chǎn)品本身會釋放殺菌或抑菌物質(zhì)，則要對其進行中和、除去或最小化預(yù)處理。鑒于國內(nèi)未見有初始污染菌檢測技術(shù)研究報道，為了能對初始污染菌數(shù)進行精確估計，進行了初始污染菌檢測技術(shù)的研究。 1 材料與方法 1.1實驗試劑和儀器第一作者：劉清芳，男，1953年5月出生，1978年畢業(yè)于蘇州醫(yī)學院醫(yī)療專業(yè)，醫(yī)學碩士，副教授，研究方向：輻射流行病學收稿日期：初稿 2007-03-05，修回 2007-06-2658 輻

4、 射 研 究 與 輻 射 工 藝 學 報 第26卷XW-80A (2800r/min)；濾過裝置、真空泵、2XZ-0.5型；過濾器，孔徑0.45µm。所有的數(shù)據(jù)資料均采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進行分析處理。 1.2試驗方法及步驟所有的實驗操作和步驟均在凈化工作臺中進行，以防止意外污染。新售培養(yǎng)基接種一定量的規(guī)定標準菌株(<100個mL)，3035培養(yǎng)24h，生長豐盛者即培養(yǎng)基驗證通過。無菌培養(yǎng)基進行靈敏度檢測，分別接種藤黃微球菌、生孢梭菌和白色念珠菌懸液各3管，3035下培養(yǎng)，逐日記錄實驗結(jié)果（記錄是否長菌），以未接種管作陰性對照。24h內(nèi)，陽性數(shù)達到至少2管，則靈敏度達到

5、要求?？偧毦鷶?shù)，計算回收效率，得到校正因子；對于污染菌量較高的產(chǎn)品，直接進行洗脫四次，并計算校正因子。技術(shù)路線3：樣品的選擇、收集和制備樣品的洗脫處理4 (或者直接置于無菌平皿) 轉(zhuǎn)移注皿培養(yǎng)計數(shù)數(shù)據(jù)記錄根據(jù)產(chǎn)品的微生物數(shù)和校正因子計算產(chǎn)品的初始污染菌。 2 結(jié)果及其分析大件樣品，經(jīng)制備后，無菌試驗陽性樣品數(shù)均達到了至少17個，因此，取其SIP120可代表整個產(chǎn)品。實驗技術(shù)選擇和驗證結(jié)果及結(jié)果分析培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件均符合規(guī)定要求。產(chǎn)品釋出物經(jīng)稀釋或中和后符合要求。各洗脫液洗脫能力有明顯差別p=0.000<0.01(見表1)。Table 1 Ability of different elue

6、ntsRepetitive tests Recovery effect 0.36±0.01 0.67±0.02 0.66±0.02 0.58±0.03 0.03±0.02p0.000PWa 5 BPWb 5 PBSc 5 Ringer 5 Saline 5Peptone water (PWa), Buffered peptone water (BPWb), Phos-phate buffer saline (PBSc)采用單因素方差分析，其p=0.000<0.0l，故統(tǒng)計學上認為各洗脫液的洗脫能力具有明顯差別，其中以蛋白胨緩沖夜和磷酸鹽緩

7、沖液為最高，兩者無統(tǒng)計學差異(p=0.74>0.05)。經(jīng)選擇和實驗驗證，選用如下洗脫技術(shù)： 洗脫液：蛋白胨緩沖液洗脫處理時間：2min(超過2min以后，洗脫效率已無明顯升高）見本實驗室工作指導SDFY-302-205。洗脫處理方式：旋渦振蕩，振蕩頻率為2800次分。校正因子的范圍為1.002.05，在各類產(chǎn)品間有明顯的差異p=0.000<0.01(見表2)。第1期劉清芳：醫(yī)療保健產(chǎn)品輻射滅菌初始污染菌檢測技術(shù)研究 59Table 2 Correct factor采用單因素方差分析，其p=0.000<0.01，故統(tǒng)計學上認為產(chǎn)品的洗脫率之間具有明顯差別。其中，Categor

8、y of product Item No. Correct factorp以無紡布類、塑料類、紗布類和羊腸線類的校正因Blade 6 1.01±0.01 0.000子為高(相對應(yīng)的洗脫率低)，它們之間無統(tǒng)計學差Non-weavon 14 1.48±0.05 別意義(p=0.22>0.05)。 Plastic 18 1.37±0.03 產(chǎn)品平均初始污染菌數(shù)的變化范圍為7.171.98×105cfuunit，其四分位數(shù)間距為1.6×103cfuRubber 32 1.27±0.014unit。其中，平均初始污染菌數(shù)1000cfuun

9、it的Gauze 34 1.49±0.03 有86份，>1000cfuunit的有62份。不同生物負載水平上頻數(shù)分布見圖1，可見初始污染菌數(shù)在各Linea 5 1.37±0.02水平上分布較為均勻。Fig.1 Bioburden level vs sample count3 討論產(chǎn)品初始污染菌是廠家生產(chǎn)文明程度評判的重要指標之一，它同時也關(guān)系到醫(yī)療產(chǎn)品輻照滅菌劑量和臨床應(yīng)用的安全性5。因此，正確地盡可能多地檢出產(chǎn)品微生物，是初始污染菌數(shù)估計技術(shù)面臨的重要課題，而初始污染菌檢測是依靠初始污染菌數(shù)估計技術(shù)完成的。本研究首次對國內(nèi)8個省（直轄市）52個廠家7大類148種不同

10、的樣品，按IS011137標準附錄B推薦的方法，結(jié)合每一個樣品的特點和實驗室條件，對試驗中的每個步驟進行了試驗驗證和有效性確認，建立了規(guī)范的初始污染菌檢測技術(shù)。本次實驗結(jié)果表明，初始污染菌洗脫效率與洗脫液的洗脫能力有關(guān)，其中以蛋白胨緩沖液和磷酸鹽緩沖液的洗脫效率為高。另外，洗脫效率還受產(chǎn)品性質(zhì)的影響，相對而言，橡膠、刀片類產(chǎn)品洗脫率較紗布、無紡布、塑料和羊腸線類產(chǎn)品高。究其原因，可能與產(chǎn)品表面性質(zhì)和微生物在產(chǎn)品中定位均有關(guān)，產(chǎn)品表面帶電、強吸水性勢必會增加微生物的粘附力，細菌被“包埋”也會增加洗脫難度。實際上，就產(chǎn)品本身而言，其初始污染菌受諸多因素的影響，生產(chǎn)工藝不同，會導致初始污染菌的差異；

11、生產(chǎn)廠家的文明生產(chǎn)水平不同，其初始污染菌的水平不同；生產(chǎn)地的氣候、地理條件不同，甚至是生產(chǎn)的季節(jié)不同，也會影響產(chǎn)品初始污染菌水平及其抗性。本次實驗所檢測的樣品初始污染菌數(shù)存在很大的差別，最大的為繃帶類產(chǎn)品，其初始污染菌數(shù)達unit，最小的為創(chuàng)口貼類產(chǎn)品，其初到1.98×105cfu始污染菌數(shù)僅為7.17cfuunit，兩者比值為27704倍。其中不可避免地存在產(chǎn)品大小對污染數(shù)影響的問題，在同一生產(chǎn)條件下生產(chǎn)的產(chǎn)品，即使污染程度相同(單位體積或面積的初始污染菌相同)，由于產(chǎn)品規(guī)格的原因，大件產(chǎn)品的微生物污染數(shù)要高得60 輻 射 研 究 與 輻 射 工 藝 學 報2第26卷多。這就給輻照

12、劑量設(shè)定帶來一個問題，即在進行輻照劑量設(shè)定時，是按單位產(chǎn)品進行的，這樣大件產(chǎn)品所接受的劑量自然大，如果假設(shè)射線是足夠均勻，可以想像，對于大件產(chǎn)品，其單位面積所接受的劑量要大得多，影響輻照滅菌的經(jīng)濟性，是一個值得考慮的問題。本研究提供的洗脫技術(shù)和初始污染菌的檢測方案，有助對生物及材料進行輻照滅菌處理時，對各種不同材質(zhì)的醫(yī)療保健產(chǎn)品的初始污染菌有一個較精確的估計，以便在實際輻照滅菌時實施合適劑量輻照，以達到最佳滅菌效果，保證生產(chǎn)質(zhì)量，提高經(jīng)濟效益。 參考文獻1British pharmacopocia. Appendix X VIA: 1996: 251-53ISO111737-1 Sterili

13、tion of medical device-miceobiogical methods-Part 1: Estimation of microorganism on products: 2000: 15-303 ISO11737-7 Sterilizationon of medical device- microbi-ological methods-Part 1: Estimation of microorganism on productcs: 2000: 15-164 GB 16383-1996 Qaulition control stanadsrds for radiaton ste

14、riljiton of medical and hygienical products: 1996: 4-55 張同成, 劉清芳, 鐘宏良, 等. 蘇州大學學報,2002, 22(3): 241-243ZHANG Togncheng, LIU Qingfamg, ZHONG Hongliang, et al. J Suzhou Inst Silk Text Technol, 2002, 22(3): 241-243Research on determination of bio-burden for radiation sterilizationof health care productsL

15、IU Qinfang(School of Radiation Medicine and Public Health, Soochow University, Suzhou 215123, China)ABSTRACT In order to provide data of bio-burden for dose setting in radiation sterilization, determination of bio-burden on 148 kinds of health care products from 52 manufacturers were carried out. The culture of microorgan-isms, different elution technology, and correction coefficient of the microbiological methods have been used for de-termination of bio-burden. Frequent distribution of b