實驗二細(xì)菌的人工培養(yǎng)

1、西安醫(yī)學(xué)院西安醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室Xian edical University微免教研室微免教研室目的要求目的要求掌握常用培養(yǎng)基的細(xì)菌接種法。掌握常用培養(yǎng)基的細(xì)菌接種法。掌握常用細(xì)菌生化反應(yīng)的原理、檢查方法。掌握常用細(xì)菌生化反應(yīng)的原理、檢查方法。熟悉常用培養(yǎng)基的種類。熟悉常用培養(yǎng)基的種類。了解細(xì)菌培養(yǎng)基的制備原則及其基本程序。了解細(xì)菌培養(yǎng)基的制備原則及其基本程序。了解細(xì)菌培養(yǎng)物的各種性狀。了解細(xì)菌培養(yǎng)物的各種性狀。Xian edical University微免教研室微免教研室實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容一、細(xì)菌的一、細(xì)菌的培養(yǎng)技術(shù)（錄像）培養(yǎng)技術(shù)（錄像）二、二、培養(yǎng)基的

2、制備、種類及細(xì)菌的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基的制備、種類及細(xì)菌的生長現(xiàn)象三、三、細(xì)菌的接種法細(xì)菌的接種法四、四、細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng)Xian edical University微免教研室微免教研室思考討論思考討論何謂培養(yǎng)基？其制備原則是什么？常用培養(yǎng)基何謂培養(yǎng)基？其制備原則是什么？常用培養(yǎng)基的種類及其用途？的種類及其用途？用什么方法檢查細(xì)菌的動力？有何實際意義？用什么方法檢查細(xì)菌的動力？有何實際意義？Xian edical University微免教研室微免教研室1 1、記錄細(xì)菌的生長現(xiàn)象。記錄細(xì)菌的生長現(xiàn)象。2 2、記錄并分析、記錄并分析細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng)。Xian edical Un

3、iversity微免教研室微免教研室 培養(yǎng)基的制備原則培養(yǎng)基的制備原則二二、培養(yǎng)基的制備、種類及細(xì)菌的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基的制備、種類及細(xì)菌的生長現(xiàn)象1 1、充足的營養(yǎng)物質(zhì)；充足的營養(yǎng)物質(zhì)；2 2、合適的酸堿度；、合適的酸堿度；3 3、必須經(jīng)過滅菌處理。、必須經(jīng)過滅菌處理。 培養(yǎng)基的制備過程培養(yǎng)基的制備過程配料、溶化、測定及矯正配料、溶化、測定及矯正pHpH、過濾、分裝、滅菌備、過濾、分裝、滅菌備用用Xian edical University微免教研室微免教研室 培養(yǎng)基的種類（性狀）培養(yǎng)基的種類（性狀）二二、培養(yǎng)基的制備、種類及細(xì)菌的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基的制備、種類及細(xì)菌的生長現(xiàn)象液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)

4、基、固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基 培養(yǎng)基的種類（用途）培養(yǎng)基的種類（用途）1 1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基：如肉湯培養(yǎng)基、基礎(chǔ)培養(yǎng)基：如肉湯培養(yǎng)基2 2、營養(yǎng)培養(yǎng)基：如血平板、營養(yǎng)培養(yǎng)基：如血平板3 3、鑒別培養(yǎng)基：如糖發(fā)酵管、鑒別培養(yǎng)基：如糖發(fā)酵管4 4、選擇培養(yǎng)基：如、選擇培養(yǎng)基：如SSSS培養(yǎng)基培養(yǎng)基5 5、厭氧培養(yǎng)基：如、厭氧培養(yǎng)基：如庖庖肉培養(yǎng)基肉培養(yǎng)基Xian edical University微免教研室微免教研室 細(xì)菌的生長現(xiàn)象細(xì)菌的生長現(xiàn)象二二、培養(yǎng)基的制備、種類及細(xì)菌的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基的制備、種類及細(xì)菌的生長現(xiàn)象1 1、液體培養(yǎng)基：混濁生長、沉淀生長、菌膜生長、液體培養(yǎng)基：

5、混濁生長、沉淀生長、菌膜生長2 2、半固體培養(yǎng)基：擴散生長、非擴散生長、半固體培養(yǎng)基：擴散生長、非擴散生長3 3、固體培養(yǎng)基：菌落、菌苔、固體培養(yǎng)基：菌落、菌苔Xian edical University微免教研室微免教研室三三、細(xì)菌的接種法細(xì)菌的接種法瓊脂平板培養(yǎng)基的分區(qū)劃線接種法瓊脂平板培養(yǎng)基的分區(qū)劃線接種法瓊脂斜面培養(yǎng)基的接種法瓊脂斜面培養(yǎng)基的接種法半固體培養(yǎng)基接種法半固體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法Xian edical University微免教研室微免教研室三三、細(xì)菌的接種法細(xì)菌的接種法瓊脂平板培養(yǎng)基的分區(qū)劃線接種法瓊脂平板培養(yǎng)基的分區(qū)劃線接種法瓊脂斜面培養(yǎng)基的接種

6、法瓊脂斜面培養(yǎng)基的接種法半固體培養(yǎng)基接種法半固體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng) 各種細(xì)菌具有的酶不完全相同，對營養(yǎng)物各種細(xì)菌具有的酶不完全相同，對營養(yǎng)物質(zhì)的分解能力不一致，代謝產(chǎn)物有別。據(jù)質(zhì)的分解能力不一致，代謝產(chǎn)物有別。據(jù)此特點，利用生物化學(xué)方法來鑒別不同細(xì)此特點，利用生物化學(xué)方法來鑒別不同細(xì)菌，稱為細(xì)菌的生化反應(yīng)。菌，稱為細(xì)菌的生化反應(yīng)。 Xian edical University微免教研室微免教研室v原理：原理： 細(xì)菌細(xì)菌 糖（醇）糖（醇）有機酸，有機酸，pHpH（指示劑呈酸

7、性反應(yīng)）指示劑呈酸性反應(yīng)） 甲酸解氫酶甲酸解氫酶 甲酸甲酸倒置小試管中有氣泡）倒置小試管中有氣泡）v方法：大腸埃希菌、傷寒沙門菌分別接種于葡萄糖、方法：大腸埃希菌、傷寒沙門菌分別接種于葡萄糖、乳糖等發(fā)酵管，乳糖等發(fā)酵管，3737培養(yǎng)培養(yǎng)18h18h24h24h觀察。觀察。v結(jié)果：結(jié)果： 糖發(fā)酵試驗糖發(fā)酵試驗四四、細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng)Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng) 糖發(fā)酵試驗糖發(fā)酵試驗Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng) 靛基質(zhì)（吲哚）試驗靛基質(zhì)（吲哚）試驗v

8、原理：原理： 細(xì)菌細(xì)菌 吲哚試劑吲哚試劑 色氨酸色氨酸吲哚吲哚v方法：大腸埃希菌、傷寒沙門菌分別接種于蛋白方法：大腸埃希菌、傷寒沙門菌分別接種于蛋白胨水，胨水，3737培養(yǎng)培養(yǎng)18h18h24h24h后，加入吲哚試劑觀察。后，加入吲哚試劑觀察。v結(jié)果：結(jié)果：Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng) 靛基質(zhì)（吲哚）試驗靛基質(zhì)（吲哚）試驗Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng) 硫化氫試驗硫化氫試驗v原理：原理： 細(xì)菌細(xì)菌v含硫氨基酸含硫氨基酸H H2 2S+S+FeSOFeSO4

9、4（黑色）（黑色）v方法：大腸埃希菌、肖氏沙門菌分別接種于硫方法：大腸埃希菌、肖氏沙門菌分別接種于硫酸亞鐵培養(yǎng)基，酸亞鐵培養(yǎng)基，3737培養(yǎng)培養(yǎng)18h18h24h24h觀察。觀察。v結(jié)果：結(jié)果：Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng) 硫化氫試驗硫化氫試驗Xian edical University微免教研室微免教研室vI - I - 吲哚（吲哚（indolindol）試驗）試驗vM - M - 甲基紅（甲基紅（methyl redmethyl red）試驗）試驗vVi- VPVi- VP（Voges-ProskauerVoges-Pr

10、oskauer）試驗）試驗vC - C - 枸櫞酸鹽利用（枸櫞酸鹽利用（citrate utilizationcitrate utilization）試驗）試驗四四、細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng) IMViC試驗試驗Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng) 葡萄糖葡萄糖 丙酮酸丙酮酸 乙酰甲基甲醇（乙酰甲基甲醇（pHpH5.45.4） 混合酸（混合酸（ pHpH4.54.5） 甲基紅指示劑甲基紅指示劑 KOH+KOH+空氣空氣 丁二醇丁二醇 雙乙酰雙乙酰 - -萘酚萘酚+ +肌酸肌酸 紅色化合物紅色化合物 紅色紅色 （VPVP試驗陽性）試

11、驗陽性） （甲基紅試驗陽性）（甲基紅試驗陽性） VPVP試驗與甲基紅試驗原理試驗與甲基紅試驗原理Xian edical University微免教研室微免教研室v方法：方法：大腸埃希菌、產(chǎn)氣桿菌分別接種于葡萄糖大腸埃希菌、產(chǎn)氣桿菌分別接種于葡萄糖蛋白胨水，蛋白胨水，3737培養(yǎng)培養(yǎng)18h18h24h24h后，按每毫升培養(yǎng)后，按每毫升培養(yǎng)基加入含基加入含0.3%0.3%肌酸或肌酐的肌酸或肌酐的0.1ml 40% KOH0.1ml 40% KOH溶液，溶液，48485050水浴水浴2h2h或或3737 4h4h，充分搖動后觀察，充分搖動后觀察。v方法：方法：大腸埃希菌、產(chǎn)氣桿菌分別接種于葡萄糖大腸

12、埃希菌、產(chǎn)氣桿菌分別接種于葡萄糖蛋白胨水，蛋白胨水，3737培養(yǎng)培養(yǎng)18h18h24h24h后，滴加甲基紅指后，滴加甲基紅指示劑觀察結(jié)果。示劑觀察結(jié)果。四四、細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng)VP試驗試驗甲基紅試驗甲基紅試驗Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng)枸櫞酸鹽利用試驗枸櫞酸鹽利用試驗v原理：原理： 細(xì)菌利用銨鹽作為唯一氮源，并利用枸細(xì)菌利用銨鹽作為唯一氮源，并利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源時，可在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基櫞酸鹽作為唯一碳源時，可在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上生長，分解枸櫞酸鹽生成碳酸鹽，并分解銨上生長，分解枸櫞酸鹽生成碳酸鹽，并分解銨鹽生成氨

13、，培養(yǎng)基呈堿性反應(yīng)。鹽生成氨，培養(yǎng)基呈堿性反應(yīng)。v方法：大腸埃希菌、產(chǎn)氣桿菌分別接種于枸櫞方法：大腸埃希菌、產(chǎn)氣桿菌分別接種于枸櫞酸鹽培養(yǎng)基，酸鹽培養(yǎng)基，3737培養(yǎng)培養(yǎng)18h18h24h24h觀察。觀察。v結(jié)果：結(jié)果：Xian edical University微免教研室微免教研室v大腸埃希菌大腸埃希菌 + + - - + + - - v產(chǎn)氣桿菌產(chǎn)氣桿菌 - - + + - - + + 四四、細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng) IMViC試驗試驗Xian edical University微免教研室微免教研室四四、細(xì)菌的生化反應(yīng)細(xì)菌的生化反應(yīng) 尿素酶試驗?zāi)蛩孛冈囼瀡原理：原理： 細(xì)菌若有尿素酶，能分解培養(yǎng)基中的尿細(xì)菌若有