槐花中黃酮類化合物提取、分離和鑒定

1、槐花中黃酮類化合物分離和鑒定適用對象 中藥國際交流、中藥知識產(chǎn)權(quán)、中藥制藥工程、中藥資源專業(yè)實驗學(xué)時 9一、實驗?zāi)康囊髮W(xué)習(xí)黃酮類化合物的提取、分離和檢識，通過實驗要求：（1）了解沸水提取黃酮類化合物的原理和操作。（2）了解由蕓香苷水解制取槲皮素的方法。（3）掌握黃酮類化合物的主要性質(zhì)及黃酮苷、苷元和糖部分的檢識方法。二、實驗原理由槐花中提取蕓香苷的方法很多，本實驗是根據(jù)蕓香苷在冷水和熱水中的溶解度差異的特性進行提取和精制。紙色譜的分離原理是利用各種化合物在流動相和固定相中分配系數(shù)的不同而達到分離目的。三、儀器設(shè)備烘箱、水浴鍋、鐵架臺，燒杯，三角燒瓶，濾紙，試管，層析槽，毛細管等。四、相關(guān)知識

2、點槐花為豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾，主要含蕓香苷（蘆?。?，含量高達1220%，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖。蕓香苷（rutoside），分子式C27 H30 O16，分子量610.51，淡黃色針狀結(jié)晶，mp.177178。難溶于冷水（18000），略溶于熱水（1200），溶于熱甲醇（17），冷甲醇（1100），熱乙醇（130），冷乙醇（1650），難溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀堿液中。槲皮素（quercetin），分子式C15 H10 O7，分子量302.23，黃色針狀結(jié)晶，mp.314（分解）。溶于熱乙醇（123），

3、冷乙醇（1300），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、氯仿、乙醚中，幾不溶于水。五、實驗步驟（一）蕓香苷、槲皮素和糖的紙色譜鑒定1、點樣：取新華一號色譜濾紙，規(guī)格20 cm20 cm，在濾紙下端約2 cm處用鉛筆畫一直線，間隔2 cm分別點上下列樣品或標(biāo)準(zhǔn)溶液： （1）糖樣品溶液 （2）標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液 （3）標(biāo)準(zhǔn)鼠李糖溶液 （4）蕓香苷樣品甲醇溶液 （5）蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液 （6） 槲皮素樣品甲醇溶液 （7）槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液2、展開劑：正丁醇-醋酸-水（415）上層上行展開。3、顯色：展開完畢，將濾紙取出，記錄溶劑前沿位置。待溶劑揮盡后，在（3）與（4）點之間剪開，分

4、別顯色。 （1）糖的顯色：噴苯胺-鄰苯二甲酸試劑，在105烘10分鐘，顯棕色斑點。計算并比較樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值。 （2）黃酮化合物的顯色： 可見光下觀察色斑，紫外燈下觀察熒光斑點。經(jīng)氨氣薰后再觀察。待氨氣揮盡后，噴1% AlCl3 甲醇溶液，再觀察。計算并比較樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值。（二）蕓香苷和槲皮素性質(zhì)試驗1、酸性試驗：取小試管8支，每4支一組，第一組每管中加入蕓香苷1mg，第二組每管中加入槲皮素1mg，每組四管中分別加入稀氨水、5%碳酸氫鈉水溶液、5%碳酸鈉水溶液、1%氫氧化鈉水溶液各2 ml，振搖后觀察各管溶解情況。溶解的溶液應(yīng)呈黃色。再加濃鹽酸數(shù)滴酸化，黃色褪去或變淺，并有沉淀析出或

5、產(chǎn)生混濁。2、Molish反應(yīng)：取試樣1 mg置小試管中，加乙醇0.5 ml溶解，加-萘酚試劑12滴，搖勻。傾斜試管，沿管壁徐徐注入濃硫酸約0.5 ml靜置。觀察兩層溶液的界面變化，出現(xiàn)紫色環(huán)者為陽性，表示樣品分子中含有糖的結(jié)構(gòu)（糖和苷類均呈陽性反應(yīng)），比較蕓香苷和槲皮素的不同。3、Fehling試驗：取試樣數(shù)mg，溶于0.5 ml熱水中，加斐林氏試劑甲、乙等量混合液2 ml，沸水浴上加熱，如產(chǎn)生氧化亞銅的暗紅色或黃色沉淀表示有還原糖或其它還原性物質(zhì)。充分加熱作用后濾去沉淀，濾液滴加濃鹽酸酸化，在水浴上加熱水解，水解液以10% NaOH 中和，再進行斐林氏試驗，此時顯陽性反應(yīng)者表示樣品為糖苷化

6、合物。比較蕓香苷和槲皮素的不同。4、鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取蕓香苷1 mg，加乙醇2 ml，在水浴上加熱溶解，加鎂粉約50 mg，滴加數(shù)滴濃鹽酸，溶液由黃色漸變紅色者表示有黃酮類化合物。以同法試驗槲皮素。 如用鋅粉代替鎂粉，則蕓香苷（3-羥基與糖結(jié)合成苷）仍有作用，而槲皮素（黃酮醇類）不呈還原顯色反應(yīng)。因此可區(qū)別兩者。5、鋯-檸檬酸反應(yīng)：取樣品1 mg，加甲醇2 ml，在水浴上加熱溶解，再加2%二氯氧鋯甲醇溶液34滴，凡有3-羥基或5-羥基的黃酮即呈鮮黃色。然后加2%檸檬酸甲醇溶液34滴，有3-羥基的黃酮黃色不褪。比較蕓香苷和槲皮素的不同。6、三氯化鋁反應(yīng)：取樣品1 mg溶于甲醇中，加1%三氯化鋁甲醇溶液23滴，黃酮類呈鮮黃色，并有熒光。六、實驗報告要求應(yīng)包括原理描述、實驗流程、數(shù)據(jù)記錄、解決問題的能力、實驗結(jié)果、實驗效果及建議等。七、思考題1、檢識黃酮類化合物的常用化學(xué)方法有哪些？2、本實驗中各種色譜的原理是什么？解釋化合物結(jié)構(gòu)與Rf值的關(guān)系。3、試討論苷類成分的檢識程序。八、實驗成績評定方法本門實驗課程考核成績占課程總成績的30，該實驗考核成績占實驗總成績