雌二醇化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒使用說明書

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上 雌二醇 化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒使用說明書 ( 美國(guó)DRG 編號(hào): CLA-4664 規(guī)格：96T)企業(yè)名稱：德國(guó)DRG診斷設(shè)備有限公司地址：德國(guó)瑪堡市斐恩貝塔思路18號(hào)1簡(jiǎn)介1.1預(yù)期用途此DRG 化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒可用于血清和血漿中雌二醇的體外定量檢測(cè).1.2前言（略）2實(shí)驗(yàn)原理此CLIA檢測(cè)試劑盒采用化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)法,基于競(jìng)爭(zhēng)法原理.微孔內(nèi)預(yù)先包被有兔抗雌二醇分子特性性結(jié)合位點(diǎn)的多克隆抗體.患者樣本中內(nèi)源性雌二醇與辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的雌二醇（酶聯(lián)物） 競(jìng)相與預(yù)包被的抗體結(jié)合。 孵育后，洗板洗去未結(jié)合的酶聯(lián)物. 結(jié)合的過氧化酶復(fù)合物（酶聯(lián)物）與患者

2、樣本中雌二醇的量成反比.加入底物液后,發(fā)射光的強(qiáng)度與樣本中雌二醇的濃度成反比3注意事項(xiàng)1. 試劑盒僅供體外診斷用2. 試劑盒相關(guān)有害物質(zhì)的信息請(qǐng)參閱物料安全數(shù)據(jù)單（MSMD）3. 試劑盒中的所有試劑包括人血清/血漿對(duì)HIV/II，HbsAg和HCV已檢測(cè)為陰性，但所有的試劑在使用和處理的過程中都應(yīng)當(dāng)作潛在生物有害物質(zhì)進(jìn)行處理4. 勿用嘴移液,同時(shí)避免樣品和試劑接觸皮膚和試劑.5. 實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)禁止飲食,化妝6. 處理試劑和樣品時(shí)應(yīng)戴一次性手套。微生物污染可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果失敗7. 按照相應(yīng)的國(guó)家生物安全管理?xiàng)l理進(jìn)行操作8. 不要使用過期的試劑,有效期見試劑標(biāo)簽9. 所有試劑的量都應(yīng)按說明來，使用校正的

3、移液器和發(fā)光儀可得到最佳的結(jié)果10. 發(fā)光底物液（試劑A和試劑B）對(duì)光感染,應(yīng)避光瓶裝保存.11. 不要混合使用不同批次的試劑、板條，即使是同一批次不同板條的也不建議。試劑盒的運(yùn)輸和貯存環(huán)境不同可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果有輕微的變化12. 化學(xué)物質(zhì)、即用試劑或稀釋試劑，需根據(jù)相關(guān)國(guó)家生物危害安全條例或規(guī)范，視為潛在有害物質(zhì)處理。13. 產(chǎn)品的物料安全數(shù)據(jù)單（MSMD）可直接向DRG索取。物料安全數(shù)據(jù)單（MSMD）符合EU-Guideline 91/155 EC4試劑盒組成4.1提供的試劑1. 微孔板，12x8(可拆),96孔 包被有抗雌二醇 抗體（兔多抗）2. 標(biāo)準(zhǔn)品，（標(biāo)準(zhǔn)品0-5）,6瓶，1ml，即用

4、濃度為：0 25 100 250 500 - 1000 pg/mL 單位換算: 1 pg/mL = 3.67 pmol/L含0.3% Proclin、0.005%硫酸慶大小諾霉素作防腐劑3. 酶聯(lián)物,1瓶, 12 mL,即用 辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記雌二醇 含0.3% Proclin、0.015% BND、0.010% MIT作為防腐劑4.化學(xué)發(fā)光底物液試劑A，1瓶，2ml，注意：光敏感試劑B，1瓶，2ml，注意：光敏感試劑C，1瓶，3ml見“試劑準(zhǔn)備”5.洗滌液，1瓶，30ml，(40倍濃縮) 見“試劑準(zhǔn)備提示：額外的樣品稀釋液向DRG公司另購4.1.1實(shí)驗(yàn)所需器材(但本試劑盒沒有提供)

5、1. 化學(xué)發(fā)光儀2. 各種規(guī)格的標(biāo)準(zhǔn)精密移液管3. 吸水紙4. 蒸餾水或去離子水4.2存儲(chǔ)條件及穩(wěn)定性未開封的試劑在2-8下可保存至有效期，不要使用過期的試劑打開的試劑必須保存在2-8，微孔板也必須保存于2-8，一旦打開了微孔板的袋子，需小心地將其重新密封開封的試劑盒如按以上描述的貯存條件可保存2個(gè)月4.3試劑準(zhǔn)備使用前，將所有試劑和所需微孔板平衡至室溫洗滌液加 30 mL濃縮洗滌液至1170 mL 去離子水中,制成總體積為1200 mL的稀釋洗滌液。此稀釋洗滌液置室溫下可穩(wěn)定保存2周化學(xué)發(fā)光底物液首先用1個(gè)單位的試劑A與1個(gè)單位的試劑B混勻,再按1:2的比例用試劑C稀釋上述混合液,制成即用的

6、底物液.上述制成底物液僅可保存一個(gè)小時(shí),使用時(shí),最好新鮮制取,現(xiàn)配現(xiàn)用.如果使用所有的微孔板,準(zhǔn)備所需底物液步驟如下:各加入1.5 mL的試劑A和試劑B至3mL試劑C中,充分混勻.4.4試劑盒廢棄處理試劑盒的廢棄應(yīng)根據(jù)相關(guān)國(guó)家規(guī)范處理。產(chǎn)品的特殊信息請(qǐng)見物料安全數(shù)據(jù)單。4.5損壞的試劑盒萬一試劑盒成分嚴(yán)重受損，收到試劑盒后，最遲一周以書面形式通知DRG。損壞的試劑成分不能用于實(shí)驗(yàn)。保存至有效解決方案出現(xiàn)。然后，根據(jù)相關(guān)官方規(guī)范處理5樣品本實(shí)驗(yàn)可用血清,血漿(EDTA,肝素，檸檬酸)切勿使用溶血,黃疸或脂血的樣品請(qǐng)注意:含有疊氮化鈉的樣品不可用于本實(shí)驗(yàn).5.1樣品收集血清：靜脈穿刺采血，等待凝集

7、，室溫下離心分離出血清。未完全凝固時(shí)不可進(jìn)行離心。血漿：將全血收集到含有抗凝劑的離心管內(nèi)，采集后立即離心5.2樣本存儲(chǔ)樣品瓶裝加蓋置于2 C至 8 C下可保存5天需存儲(chǔ)更長(zhǎng)時(shí)間,需置于-20C凍存。實(shí)驗(yàn)前，解凍的樣品需倒置幾次5.3樣本稀釋初次實(shí)驗(yàn)時(shí),如發(fā)現(xiàn)樣品高于最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度,樣品可用零標(biāo)準(zhǔn)品稀釋10倍或100倍 并重測(cè)。計(jì)算時(shí)需考慮稀釋因子示例:a) 1:10稀釋 10 L血清+ 90 L零標(biāo)準(zhǔn)品（充分混勻）b)1:100稀釋 10 L上述a) 1：10稀釋液 + 90 L零標(biāo)準(zhǔn)品（充分混勻）6實(shí)驗(yàn)步驟6.1一般注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)前將所有試劑平衡至室溫，混勻，避免產(chǎn)生氣泡實(shí)驗(yàn)一旦開始，所有步驟

8、必須無中斷，完整地進(jìn)行下去為了避免交叉污染，使用新的一次性加樣槍頭，加各標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、樣品 光強(qiáng)度是孵育時(shí)間和溫度的相關(guān)函數(shù).實(shí)驗(yàn)前將所有試劑準(zhǔn)備好，蓋子打開，所需板條固定等，這樣可以確保每個(gè)步驟間隔時(shí)間一致，無中斷。一般情況下,酶反應(yīng)與時(shí)間和溫度成線性比例關(guān)系6.2檢測(cè)步驟每次試驗(yàn)都應(yīng)建立一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。1. 取實(shí)驗(yàn)所需板條固定于板架上2. 用新的一次性加樣槍頭,各加20ul的標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和樣品于相應(yīng)的孔內(nèi)3. 每孔加100ul酶聯(lián)物，充分混勻10秒.充分混勻這一步驟很重要4. 室溫下孵育35min（無需蓋板）5. 迅速棄去孔內(nèi)液體每孔用400ul的稀釋洗滌液洗板5次，吸水紙上拍干,去除殘

9、留液滴.重要提醒：實(shí)驗(yàn)的靈敏度和精確度直接受洗板正確與否的影響.6. 每孔加50ul現(xiàn)配的化學(xué)發(fā)光底物液7. 室溫下孵育10min 8. 化學(xué)發(fā)光底物液孵育后，20min內(nèi)于發(fā)光儀上讀取相對(duì)光單位(RLU)6.3結(jié)果計(jì)算1. 計(jì)算各標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和樣品的相對(duì)光單位(RLU)平均值2. 在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上，以標(biāo)準(zhǔn)品的RLU的均值為Y軸，濃度為X軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線3. 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上通過RLU均值找到相對(duì)應(yīng)的濃度值4. 全自動(dòng)法：自動(dòng)法用最合適的4參數(shù)對(duì)數(shù)擬合法計(jì)算，它是首選計(jì)算方法，其它函數(shù)方法得出的結(jié)果可能會(huì)有細(xì)微的不同.5. 樣品濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取，樣品濃度高于最高標(biāo)準(zhǔn)品濃度的則需進(jìn)一步稀釋

10、.結(jié)果計(jì)算時(shí)要乘以稀釋因子6.3.1典型標(biāo)準(zhǔn)曲線示例下以數(shù)據(jù)僅供演示示范,不能用于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的獲取.建議用RLU/RLUmax比值作為結(jié)果分析,因各個(gè)廠商的化學(xué)發(fā)光儀的不同導(dǎo)致讀取RLU值的不同,但RLU/RLUmax的比值總是恒定不變的7期望值強(qiáng)烈建議每個(gè)實(shí)驗(yàn)室建立自已的正常與非正常值以下數(shù)值可作為參考性別5 95%百分位男10 - 36 pg/mL女絕經(jīng)前絕經(jīng)后13 - 191 pg/mL11 65 pg/mL8質(zhì)控說明根據(jù)GLP規(guī)范要求，質(zhì)控品應(yīng)該與標(biāo)準(zhǔn)曲線（標(biāo)準(zhǔn)品）同時(shí)檢測(cè)。檢測(cè)一定統(tǒng)計(jì)學(xué)意義數(shù)量的質(zhì)控品建立質(zhì)控品均值和可接受范圍，保證實(shí)驗(yàn)的有效性。建議根據(jù)相關(guān)國(guó)家或聯(lián)邦規(guī)范處理質(zhì)控品。

11、使用質(zhì)控品是為了驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的有效性。建議同時(shí)使用正常和病理水平的質(zhì)控品。質(zhì)控品和相應(yīng)的值請(qǐng)?jiān)斠娫噭┖袃?nèi)的質(zhì)控單（QC單）。QC單上詳細(xì)說明參考均值和范圍，并提及當(dāng)前使用批次號(hào)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)與QC單上參考值作對(duì)比分析。同時(shí)建議執(zhí)行國(guó)家或國(guó)際質(zhì)量評(píng)估體系，保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。使用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析質(zhì)控品的值和趨勢(shì)。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒有滿足建立的質(zhì)控品的可接受范圍值，實(shí)驗(yàn)應(yīng)視為無效。如果實(shí)驗(yàn)無效，請(qǐng)檢查以下技術(shù)指標(biāo)：加樣和計(jì)時(shí)裝置；酶標(biāo)儀；試劑效期；存儲(chǔ)及孵育條件；洗板步驟。如果檢查完上述情況，均沒有問題的話，請(qǐng)聯(lián)系經(jīng)銷商或DRG公司。9性能指標(biāo)9.1檢測(cè)范圍實(shí)驗(yàn)盒的檢測(cè)范圍：0 1000 pg/mL.9.2抗體特異性（交叉反應(yīng)）下表為相關(guān)物質(zhì)與試驗(yàn)交叉反應(yīng)的情況9.3分析靈敏度分板靈敏度是由均值減去20份零標(biāo)準(zhǔn)品2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算得出，為2.5 pg/mL9.4精密度9.4.1板內(nèi)差板內(nèi)差結(jié)果如下所示9.4.2板間差板間結(jié)果如下所示：9.5回歸樣品按1：1通過加入已知濃度雌二醇液進(jìn)行校準(zhǔn)分析期望