乙肝為何測(cè)e抗原和s抗原

1、乙肝為何測(cè)e抗原和s抗原 乙型肝炎病毒（HBV）外膜蛋白包括S、前S2和前S1三種成分.前S1蛋白在病毒侵入肝細(xì)胞過程中起重要作用.含有前S1的蛋白主要存在于Dane顆粒和管型顆料上.前S1蛋白在病毒感染、裝配、復(fù)制和刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)等方面起有格外重要作用.乙肝病毒前S1抗原酶免測(cè)定試劑盒的正式推向臨床以及近兩年在北京、四川、浙江、河南、深圳、海南等近百家醫(yī)院與乙肝“兩對(duì)半”檢測(cè)的聯(lián)合應(yīng)用,充分顯示了該試劑在病毒性乙型肝炎的臨床診斷,指導(dǎo)治療等方面的重要價(jià)值.前S1抗原（Pre-S1Ag）檢測(cè)是對(duì)乙肝“兩對(duì)半”尤其是e抗原和HBV-DNA測(cè)定的重要補(bǔ)充和加強(qiáng).前S1抗原與HBV-DNA檢出

2、率兩者符合,前S1抗原僅在HBV-DNA陽(yáng)性血清中檢出.前S1蛋白隨HBeAg消逝而消逝,且與陰轉(zhuǎn)時(shí)間呈正相關(guān),這樣,前S1抗原可作為病毒清除與病毒轉(zhuǎn)陰的指標(biāo).前S1抗原陽(yáng)性的乙型肝炎患者傳播乙型肝炎病毒比前S1抗原陰性和無癥狀HbsAg攜帶者的危急性更大,因而說明前S1抗原可反映乙型肝炎病毒復(fù)制和傳染性的指標(biāo).假如前S1抗原持續(xù)陽(yáng)性,指示AHB向慢性轉(zhuǎn)變.比較急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、和HBsAg陽(yáng)性的患者血清中前S1蛋白,前S1抗原陰轉(zhuǎn)愈早,AHB患者的療程愈短,預(yù)后也愈好.說明前S1抗原及其抗體的檢測(cè)是急性乙型肝炎的臨床診斷,療效觀看和判數(shù)據(jù)預(yù)后的良好指標(biāo).前S1蛋白的分子生物學(xué)特性1

3、乙肝病毒（HBV）的基因結(jié)構(gòu)HBV為嗜肝DNA病毒,由一個(gè)不完全雙鏈DNA組成,約3200個(gè)氨基酸.長(zhǎng)鏈L含4個(gè)開放讀碼框架,為病毒蛋白的編碼區(qū)：S區(qū)、C區(qū)、P區(qū)、X區(qū).短鏈S相當(dāng)于長(zhǎng)鏈的50%-100%,其不固定端可被內(nèi)原性DNA多聚酶延長(zhǎng),使病毒成為完整的雙鏈.2HBV基因組編碼HBV抗原,全部四個(gè)功能性讀碼框架位于DNA負(fù)鏈,P基因編碼DNA聚合酶.C基因編碼HbcAg.S基因編碼S抗原,前S1抗原和前S2抗原.X基因編碼X產(chǎn)物.3編碼不同形式的表面抗原（HBsAg）的HBV基因區(qū)域由大蛋白（LHBs）,中蛋白（MHBs）和小蛋白（SHBs）組成,其氨基酸組成的肽段長(zhǎng)短不同.在第一和其次

4、個(gè)起始密碼子之間的序列稱為Pres1,在其次和第三個(gè)之間為Pres2,從第三個(gè)密碼子到終點(diǎn)密碼子的序列為S.前S1抗原（Pre-S1Ag）的臨床意義和用途：1反映HBV的感染與復(fù)制狀況的指標(biāo)前S1抗原主要存在于血清中HBV表面.提示機(jī)體內(nèi)含有HBV就有前S1抗原.前S1抗原與HBV-DNA,HBeAg檢測(cè)率高度符合是一項(xiàng)格外重要的病毒復(fù)制指標(biāo).提示前S1抗原可作為HbeAg和HBV-DNA檢測(cè)的補(bǔ)充和對(duì)比.抗HBeAb（+）慢性乙型肝炎（約占患者的30%左右）和HBV慢性無癥狀攜帶者中,前S1抗原（+）可表示病毒的復(fù)制,提示臨床上只檢測(cè)“乙肝五項(xiàng)”是不夠的,補(bǔ)充前S1抗原的測(cè)定是格外重要的,可

5、彌補(bǔ)因病毒變異和其它緣由造成的HBeAg（-）的“誤尋”.病毒附著于肝細(xì)胞上,最重要的介導(dǎo)部位是前S1蛋白的氨基酸（AA）21-47片段,變異的病毒只要這一區(qū)段完好就有傳染性.2預(yù)后及藥物療效的推斷急性乙型肝炎患者前S1抗原陰轉(zhuǎn)越早,預(yù)后越好,是病毒清除的最早跡象,反之,前S1抗原持續(xù)陽(yáng)性,將進(jìn)展至慢性肝炎.因病毒基因變異的HBeAb（+）慢性乙型肝炎病人,較易進(jìn)展為肝硬化,甚至肝癌.加強(qiáng)檢測(cè)前S1抗原,是一種檢測(cè)疾病預(yù)后的良好手段.前S1抗原可作為藥物抗病毒療效的指標(biāo),是對(duì)HBV-DNA和HBeAg指標(biāo)的補(bǔ)充和加強(qiáng).3早期診斷乙型肝炎病毒的感染前S1抗原消滅在急性乙型肝炎感染的最早期,在轉(zhuǎn)氨

6、酶上升前即可查出,提示可作為早期診斷乙肝病毒感染. 在體檢和獻(xiàn)血員中加查前S1抗原,可起來疾病的早期診斷和盡早切斷傳染原的重要作用.問題一、 檢驗(yàn)兩對(duì)半為何還要查Pre-S1,重復(fù)檢查是鋪張嗎?答：目前,乙型肝炎病毒血清學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目主要是HBV-M（即乙肝五項(xiàng),包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb）.目的是診斷患者的感染狀況,病毒復(fù)制狀況,病程預(yù)后和藥物療效的觀看等.前S1抗原的檢測(cè)能夠從以下幾個(gè)方面彌補(bǔ)和加強(qiáng)乙肝五項(xiàng)檢測(cè)的不足.1前S1抗原消滅在急性乙型肝炎感染的早期,在轉(zhuǎn)氨酶上升前即可查出,提示可作為早期診斷乙肝病毒感染的指標(biāo).2急性乙型肝炎患者前S1抗原陰轉(zhuǎn)越早,

7、預(yù)后越好,是病毒清除的最早跡象.反之,前S1抗原持續(xù)陽(yáng)性,將進(jìn)展至慢性肝炎.（此指標(biāo)比HBeAg陰轉(zhuǎn)、HBsAb陽(yáng)轉(zhuǎn)指標(biāo)提示要早）.3HBeAb（+）慢性乙型肝炎約占慢性乙肝的30%-50%,檢測(cè)前S1抗原,提示病毒在機(jī)體內(nèi)連續(xù)復(fù)制,此類患者更簡(jiǎn)潔演化為肝硬化或肝癌.加查前S1抗原,彌補(bǔ)了因HBeAg缺失造成的診斷和治療困難.4在HBV無癥狀攜帶者中,有肯定比例的HBeAb（+）者,加查前S1抗原（+）提示病毒在體內(nèi)還較活躍.病毒并沒有清除,肝臟還有潛在的病理?yè)p傷的可能.5抗病毒治療乙型肝炎,加查前S1抗原可作為治療前的患者篩查和治療后的療效推斷,尤其對(duì)HBeAb（+）的慢性肝炎患者抗病毒治療

8、的排查也起到重要作用.所以檢驗(yàn)兩對(duì)半,加查前S1抗原可在急性肝炎,慢性肝炎,HBV無癥狀攜帶者和抗病毒治療乙型肝炎診療過程中起到格外重要的作用.這樣的加查,不能說是鋪張.二、HbeAb（+）的HBV感染者中,為何要檢查前S1抗原?在我國(guó)近3千萬人的慢性乙型肝炎患者中,其中約有30%左右的患者,抗HBe陽(yáng)轉(zhuǎn)后,病毒在體內(nèi)連續(xù)復(fù)制,病情較重,其中部分可以演化為肝硬化或肝癌,自然好轉(zhuǎn)率格外低.同樣,HBeAb（+）的HBV無癥狀攜帶者也占有肯定的比例.這一部分HBeAb（+）的慢性肝炎和HBV無癥狀攜帶者,往往是由于病毒基因變異所致,其所攜帶的HBV變異毒株大多數(shù)表現(xiàn)為在病毒基因組前C區(qū)末端1896

9、位發(fā)生G-A點(diǎn)突變,產(chǎn)生一個(gè)新的終止密碼子（TAG）,阻斷了HBeAg的形成,導(dǎo)致在臨床上消滅HBeAg缺陷和HBV血清型.因HBeAg的缺失,造成診斷和治療的困難.此時(shí),檢測(cè)前S1抗原既能較為精確的檢測(cè)病毒在機(jī)體內(nèi)復(fù)制狀況,又能診斷疾病的轉(zhuǎn)歸和了解是否攜帶HBV變異毒株.充分顯示了前S1抗原的臨床價(jià)值.所以抗HBeAb（+）的HBV感染者中,加查前S1抗原是格外必要的.三、為什么檢測(cè)HBV-DNA還要檢測(cè)前S1抗原?1前S1蛋白是乙型肝炎病毒（HBV）外膜蛋白的主要專長(zhǎng)部分,它含有肝細(xì)胞受體,在HBV感染細(xì)胞和機(jī)體免疫應(yīng)答方面起重要作用.在病毒感染機(jī)體的整個(gè)周期中,前S1蛋白的獨(dú)特功能,使其

10、能夠較充分的反應(yīng)機(jī)體的體液免疫狀況,直至病程的轉(zhuǎn)歸過程（如早期診斷,急性肝炎前S1抗原陰轉(zhuǎn)是病毒清除的最早跡象,反之疾病將進(jìn)展至慢性肝炎等臨床診斷以及前S1抗原陰轉(zhuǎn),前S1抗體消滅等免疫學(xué)反應(yīng)）這是單一測(cè)定HBV-DNA所不能做到的.2免疫測(cè)定技術(shù)因其有效、直接、簡(jiǎn)便的特點(diǎn),已經(jīng)在臨床診斷應(yīng)用上占主導(dǎo)地位.前S1抗原的檢測(cè)與基因測(cè)定HBV-DNA在治療方面能夠相互補(bǔ)充和加強(qiáng),就像HBV-DNA不能替代乙肝五項(xiàng)的檢測(cè)一樣,同樣HBV-DNA也不能替代前S1抗原的檢測(cè).3HBV DNA-PCR技術(shù)要求精密、所需要的條件高,易發(fā)生污染和假陽(yáng)性,不適于做常規(guī)檢測(cè),前S1抗原測(cè)定與之相互補(bǔ)充和加強(qiáng),使結(jié)

11、果特異,精確無誤,進(jìn)而提高臨床大夫的診斷和治療水平.前S1抗原的檢測(cè)由上海阿爾法生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的乙型肝炎病毒前S1抗原酶免診斷試劑盒接受ELISA雙抗體夾心法,測(cè)定前S1抗原肽,最低檢測(cè)濃度為0.1ug/L.檢測(cè)原理接受雙抗體夾心ELISA法,用抗-PreS1和抗HBs作為固相化抗體和酶標(biāo)抗體,假如標(biāo)本中存在乙肝病毒PreS1抗原,則形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng),反之則無顯色反應(yīng).適用于血漿和血清類標(biāo)本.試劑盒組成微孔板、陰性對(duì)比、陽(yáng)性對(duì)比、酶結(jié)合物、顯色液A、顯色液B、終止液、洗滌液.操作步驟1反應(yīng)孔內(nèi)加入待測(cè)標(biāo)本50ul,設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)比各2孔,每孔加入陰、陽(yáng)性對(duì)比各50ul,并設(shè)空白對(duì)比1孔,置37孵育30min.2洗板3每孔加入酶結(jié)合物1滴或50ul（空白對(duì)比孔除外）,置37孵育30min.4洗板5加入顯色液A、B各一滴,充分混勻后,置37孵育15min.6加入終止液、混勻.7酶標(biāo)儀讀數(shù).結(jié)果推斷1全部陰性對(duì)比、陽(yáng)性對(duì)比和標(biāo)本的讀數(shù)值減去空白對(duì)比讀數(shù)即為計(jì)算值.2陽(yáng)性對(duì)比讀數(shù)必需比陰性對(duì)比讀數(shù)大0.300.試驗(yàn)結(jié)果成立.3結(jié)果推斷：臨界值（CUTOFF）=2.1*陰性對(duì)比平均OD值.測(cè)試標(biāo)本的計(jì)算值大于或等于