大豆油食用級(jí)微生物限度檢驗(yàn)操作規(guī)程

1、起草質(zhì)量控制部簽字/日期：審核口財(cái)務(wù)部簽字/日期：口總經(jīng)辦簽字/日期：口質(zhì)量保證部簽字/日期：口質(zhì)量控制部簽字/日期：口注冊(cè)申報(bào)部簽字/日期：口生產(chǎn)技術(shù)部簽字/日期：口設(shè)備工程部簽字/日期：口人力資源部簽字/日期：研發(fā)部簽字/日期：口營(yíng)銷管理部簽字/日期：行政部簽字/日期：口物流部簽字/日期：副總審核口質(zhì)量副總經(jīng)理簽字/日期：口常務(wù)生產(chǎn)副總經(jīng)理簽字/日期：口營(yíng)銷副總經(jīng)理簽字/日期：批準(zhǔn)質(zhì)量副總經(jīng)理簽字/日期：分發(fā)董事長(zhǎng)兼總經(jīng)理口財(cái)務(wù)部口總經(jīng)辦口質(zhì)量副總經(jīng)理口常務(wù)生產(chǎn)副總經(jīng)理口質(zhì)量保證部口質(zhì)量控制部口注冊(cè)申報(bào)部口生產(chǎn)技術(shù)部口設(shè)備工程部口人力資源部研發(fā)部口營(yíng)銷管埋部行政部口物流部口原料1車問(wèn)口原料

2、2車問(wèn)注射液車間口凍干車問(wèn)口軟膠囊車間口中藥提取車問(wèn)目的制定大豆油（食用級(jí)）微生物限度檢驗(yàn)操作規(guī)程，規(guī)范大豆油（食用級(jí)）微生物限度的檢驗(yàn)，確保準(zhǔn)確、及時(shí)的檢驗(yàn)大豆油（食用級(jí)）微生物限度，確保檢驗(yàn)的規(guī)范性與準(zhǔn)確性。范圍適用于大豆油（食用級(jí)）微生物限度的檢驗(yàn)職責(zé)QC主管：負(fù)責(zé)督促檢驗(yàn)人員按本規(guī)程操作。生化組組長(zhǎng)：負(fù)責(zé)對(duì)檢驗(yàn)人員的操作進(jìn)行指導(dǎo)與監(jiān)督。生化組檢驗(yàn)人員：負(fù)責(zé)嚴(yán)格按照本規(guī)程對(duì)大豆油（食用級(jí)）微生物限度進(jìn)行檢驗(yàn)內(nèi)容1物料/產(chǎn)品代碼、名稱1.1代碼：PYF0571.2名稱：大豆油（食用級(jí)）2標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)1STP03-QS-205500”大豆油（食用級(jí)）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)”1中國(guó)藥典1、工具1錐形瓶500ml

3、1培養(yǎng)皿90mm1刻度吸管、乳膠頭1ml1量筒10ml1錐形瓶200ml1鹽水瓶100ml1試管、試管架1接種環(huán)1酒精燈1試管塞1量杯、紗布1生化培養(yǎng)箱1電子天平1潔凈工作臺(tái)1滅菌鍋1水浴鍋1剪刀1試藥75%的乙醇溶液或0.1%新潔爾滅溶液或70%異丙醇胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基麥康凱液體培養(yǎng)基麥康凱瓊脂培養(yǎng)基聚山梨酯80pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液5環(huán)境、健康和安全(EHS)微生物限度檢查應(yīng)在不低于D級(jí)背景下的B級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。在操作中注意酒精燈的使用，酒精燈中酒精的量不能超過(guò)裝量的2/3。由于酒精燈或是75%的乙醇溶液或是70%異丙醇著火時(shí)，

4、切忌用水撲滅，應(yīng)采用窒息法使其熄滅。6準(zhǔn)備將紗布、量杯、濾杯用滅菌呼吸袋裝好，經(jīng)121c20分鐘濕熱滅菌后，經(jīng)紫外消毒30分鐘后，由潔凈傳遞窗傳入潔凈區(qū)。應(yīng)填寫“儀器使用記錄”(SMP04-QC-00080001)、“紫外燈消毒記錄”(SMP04-QC-00210001)。將量筒、培養(yǎng)皿、彎頭鑲子、墊片于160c180c干熱滅菌2小時(shí)后，經(jīng)紫外消毒30分鐘后，由潔凈傳遞窗傳入潔凈區(qū)。應(yīng)填寫“儀器使用記錄”(SMP04-QC-00080001)、“紫外燈消毒記錄”(SMP04-QC-00210001)。將熔化的胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基、pH7.0無(wú)菌氯化鈉

5、-蛋白凍緩沖液、待檢大豆油(食用級(jí))放入傳遞窗，經(jīng)紫外消毒30分鐘后傳入潔凈區(qū)。應(yīng)填寫“儀器使用記錄”(SMP04-QC-00080001)、“紫外燈消毒記錄”(SMP04-QC-00210001)。開啟潔凈工作臺(tái)的紫外燈，對(duì)工作臺(tái)表面紫外消毒30分鐘。填寫“紫外燈消毒記錄”(SMP04-QC-00210001)。檢查所用培養(yǎng)基、試劑應(yīng)在使用有效期內(nèi)。7 7操作方法關(guān)閉潔凈工作臺(tái)的紫外燈，打開照明燈、風(fēng)機(jī)，填寫“潔凈工作臺(tái)儀器使用記錄”(SOP04-SB-00270001)。用消毒紗布擦拭潔凈工作臺(tái)。點(diǎn)燃酒精燈，開啟電子天平，填寫“儀器使用記錄”(SMP04-QC-00080001)。在工作臺(tái)

6、上放置3個(gè)胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基平皿，監(jiān)測(cè)潔凈工作臺(tái)的沉降菌。將工器具、培養(yǎng)基、裝有大豆油(食用級(jí))的碘量瓶用消毒液擦拭后，移入到潔凈工作臺(tái)上。取無(wú)菌聚山梨酯80,加入相應(yīng)體積的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液中，置45c水浴，振搖，使溶解，制成含0.1%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白陳緩沖液。取本品10ml,加入預(yù)熱45c含0.1%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白陳緩沖液至100ml,置45c水浴，振搖，使溶解，制成1:10供試液。再吸取上述1:10供試液1ml,加入預(yù)熱的稀釋液至10ml,置45c水浴，振搖，使溶解，制成1:100的供試液。需氧

7、菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)檢查需氧菌總數(shù)檢查分別吸取制備好的1:10、1:100的供試液各1ml,置直徑90mm的無(wú)菌平皿中， 注入15ml20ml溫度不超過(guò)45c熔化的胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基，混勻,凝固,倒置培養(yǎng)。每個(gè)稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基制備2個(gè)平皿。陰性對(duì)照：取含0.1%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液1ml,置直徑90mm的無(wú)菌平皿中，注入15ml20ml溫度不超過(guò)45c熔化的胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基制備2個(gè)平皿。霉菌和酵母菌總數(shù)檢查分別吸取制備好的1:10、1:100的供試液各1ml,置直徑90mm的無(wú)菌平皿中， 注入15ml20ml

8、溫度不超過(guò)45c熔化的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。每個(gè)稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基制備2個(gè)平皿。陰性對(duì)照：取含0.1%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液1ml,置直徑90mm的無(wú)菌平皿中，注入15ml20ml溫度不超過(guò)45c熔化的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基制備2個(gè)平皿。將環(huán)測(cè)平皿置30c35c的培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)23天，逐日點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，填寫“沉降菌測(cè)試記錄”(STP04-QC-00590001)。將檢查需氧菌總數(shù)平皿于30C-35C的培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)5天，檢查霉菌及酵母菌總數(shù)平皿于20c25c的培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)7天，逐日點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，填寫

9、“微生物觀察標(biāo)簽”(SMP04-QC-00220012)、“生化培養(yǎng)箱儀器使用記錄”(SOP04-SB-00330001)控制菌檢查(大腸埃希菌)供試品組取1:10的供試液10ml,接種至100ml胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基中，混勻，3035c培養(yǎng)1824小時(shí)后。填寫“生化培養(yǎng)箱儀器使用記錄”(SOP04-SB-00330001)取上述培養(yǎng)物1ml接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中，4244c培養(yǎng)2448小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，3035c培養(yǎng)1872小時(shí)。陰性對(duì)照組取含0.1%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液10ml,接種至100ml胰

10、酪大豆陳液體培養(yǎng)基中，混勻，3035c培養(yǎng)1824小時(shí)，同7.1.6.1法操作。陽(yáng)性對(duì)照組取1:10的供試液10ml,接種至100ml胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基中再加入1ml不大于100cfu/ml的大腸埃希菌菌液，混勻，3035c培養(yǎng)1824小時(shí)，同7.1.6.1法操作。判斷標(biāo)準(zhǔn)法定標(biāo)準(zhǔn)：需氧菌總數(shù)01000cfu/ml,霉菌和酵母菌總數(shù)0100cfu/ml;內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)：需氧菌總數(shù)0500cfu/ml,霉菌和酵母菌總數(shù)050cfu/ml。控制菌檢查(大腸埃希菌)：若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗(yàn)，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，或雖有菌落生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。環(huán)境監(jiān)測(cè)：沉降菌菌落數(shù)應(yīng)不得過(guò)1cfu。8結(jié)束檢測(cè)結(jié)束后，整理潔凈工作臺(tái)，將潔凈工作臺(tái)上的物品經(jīng)傳遞窗傳出潔凈區(qū)。填寫“潔凈工作臺(tái)儀器使用記錄”(SOP04-SB-00270001。用消毒紗布擦拭潔凈工作臺(tái)，關(guān)閉風(fēng)機(jī)，關(guān)閉照明燈，打開紫外燈消毒半小時(shí)。將檢測(cè)使用的工器具清洗干凈后，晾干備用。整理相關(guān)儀器使用記錄和檢驗(yàn)記錄。9清潔實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)對(duì)操作臺(tái)與傳遞窗、地面或墻壁等進(jìn)行適當(dāng)?shù)那鍧嵒蛳?。將檢