淫羊藿苷對(duì)骨髓增生異常綜合征模型大鼠骨髓細(xì)胞凋亡的影響

1、淫羊藿苷對(duì)骨髓增生異常綜合征模型大鼠骨髓細(xì)胞凋亡的影響         09-09-13 10:01:00     作者：馮曉燕 嚴(yán)魯萍 楊源    編輯：studa20【摘要】  目的探討單味中藥提取物淫羊藿苷對(duì)骨髓增生異常綜合征（MDS）模型大鼠骨髓細(xì)胞凋亡的影響。方法通過復(fù)制骨髓增生異常綜合征（MDS）大鼠模型，用淫羊藿苷溶液灌胃。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，檢測(cè)大鼠外周血象、骨髓象，骨髓細(xì)胞總凋亡率。結(jié)果淫羊藿苷組外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血

2、紅蛋白含量、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)靈敏、血小板計(jì)數(shù)高于模型生理鹽水組，且有顯著差異(P<0.01)；各模型組大鼠外周血和骨髓均能見到不同程度的病態(tài)造血，骨髓細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著升高，與空白對(duì)照組相比有極顯著差異；淫羊藿苷組骨髓細(xì)胞凋亡指數(shù)比模型生理鹽水組低，兩組間有極顯著性差異(P<0.001)。結(jié)論 淫羊藿苷有升高M(jìn)DS模型大鼠外周血象、改善骨髓病態(tài)造血、降低骨髓細(xì)胞凋亡率的作用。 【關(guān)鍵詞】  骨髓增生異常綜合征 淫羊藿苷 細(xì)胞凋亡骨髓增生異常綜合征(MDS)是一組起源于造血髓系定向干細(xì)胞或多能干細(xì)胞的異質(zhì)性克隆性疾患，主要特征是無效造血、外周血細(xì)胞減少和有明顯向急性白血病轉(zhuǎn)化的傾向

3、，是臨床常見的難治性血液病，其發(fā)病率正逐年增高。MDS屬祖國(guó)醫(yī)學(xué) “虛勞”“血證”“內(nèi)傷發(fā)熱”等范疇，國(guó)內(nèi)從中醫(yī)角度對(duì)MDS研究較多，對(duì)其病因病機(jī)、辨證論治、中藥復(fù)方藥效等方面都進(jìn)行了研究，取得了一定的成績(jī)。在治療方面主要從補(bǔ)腎益髓、益氣活血、清熱解毒等方面用復(fù)方進(jìn)行研究，國(guó)內(nèi)報(bào)道以中藥為主治療MDS的總有效率為58.3%89.47%13。本文作者擬通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，探討單味中藥提取物淫羊藿苷對(duì)MDS模型大鼠骨髓細(xì)胞凋亡的影響，從而篩選治療MDS有效的中藥，為淫羊藿苷的臨床運(yùn)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。1  材料與方法1.1  動(dòng)物與藥物Wistar大鼠36只，體重80100 g ，7

4、周齡，清潔級(jí)，由貴陽醫(yī)學(xué)院動(dòng)物所提供合格證號(hào)：SCXK（黔）20020001。二甲基苯蒽(DMBA)由美國(guó)Sigma公司生產(chǎn)。FACS240型流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司生產(chǎn)），OLYMPUS-BHB211顯微鏡（日本）。淫羊藿苷（由陜西慧科生物股份有限公司提供，批號(hào)：20050513），98%淫羊藿苷溶于0.9%生理鹽水中制成3.0 mg/ml濃度的藥液待用。1.2  模型制備與實(shí)驗(yàn)分組取Wistar大鼠36只，隨機(jī)分為3組，每組12只，分別為正常對(duì)照組、模型組生理鹽水組和模型淫羊藿苷組。參照馮寶章等4的大鼠MDS造模方法于實(shí)驗(yàn)第0，7，14，21，28天按35 mg/kg劑量尾靜脈注

5、射溶于芝麻油、生理鹽水的DMBA于模型組，建立MDS模型。從第2次注射DMBA后（即實(shí)驗(yàn)第14天）分別予生理鹽水、淫羊藿苷溶液按0.2 ml/10 g體重劑量灌胃，1次/d，連續(xù)20次。1.3  觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法觀察實(shí)驗(yàn)中大鼠的精神活動(dòng)狀況、出血情況、皮毛光澤度、飲食飲水量、體重變化情況；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，尾靜脈取血，參照血液實(shí)驗(yàn)學(xué)5方法進(jìn)行人工計(jì)數(shù)外周血象，并將外周血涂片瑞氏染色后觀察外周血病態(tài)造血情況；取股骨骨髓涂片，瑞士染色后觀察骨髓增生情況及油鏡下觀察骨髓病態(tài)造血情況，用流式細(xì)胞儀按試劑盒說明檢測(cè)骨髓細(xì)胞凋亡指數(shù)。1.4  資料處理方法用SPSS系統(tǒng)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，實(shí)

6、驗(yàn)結(jié)果以±s表示，組間差采用t檢驗(yàn)。2  結(jié)果2.1  一般情況比較自尾靜脈注射兩次DMBA起，模型組大鼠逐漸出現(xiàn)皮下紫癜，以嘴唇及雙小腿較明顯，第15天起逐漸出現(xiàn)精神萎靡、瞇眼、扎堆、反應(yīng)遲鈍、行動(dòng)遲緩，甚至行動(dòng)不穩(wěn)，毛色枯槁、散亂豎起，逐漸消瘦，正常對(duì)照組以上各方面都沒有改變，體重增加。實(shí)驗(yàn)過程中除正常對(duì)照組外，其余兩組均有大鼠死亡，生理鹽水組死亡4只，模型淫羊藿苷組死亡3只。2.2  淫羊藿苷對(duì)MDS模型大鼠外周血象的影響  淫羊藿苷有明顯回升MDS模型大鼠外周血血象的作用，雖然與正常對(duì)照組比較淫羊藿苷組的血小板計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)

7、數(shù)、血紅蛋白含量有所降低，兩組間有差異（P0.05），但較模型生理鹽水組明顯升高，與模型生理鹽水組比較有極顯著差異（P0.001）。結(jié)果見表12。表1  淫羊藿苷對(duì)MDS模型大鼠外周血血小板、白細(xì)胞的影響（略）表2  淫羊藿苷對(duì)MDS模型大鼠外周血血紅蛋白、紅細(xì)胞的影響（略）2.3  淫羊藿苷對(duì)MDS模型大鼠外周血病態(tài)造血的影響各模型組外周血可見不同程度的病態(tài)造血，淫羊藿苷能一定程度上改善MDS模型大鼠外周血病態(tài)造血的情況，模型生理鹽水組大鼠6只可見有核紅細(xì)胞，3只見紅細(xì)胞形態(tài)異常，大小不一，可見大紅細(xì)胞，2只可見巨大血小板，巨核細(xì)胞顆粒減少。模型淫羊藿苷組中，3

8、只可見有核紅細(xì)胞、2只見紅細(xì)胞形態(tài)異常，大小不一，可見大紅細(xì)胞， 2只可見成熟粒細(xì)胞分葉過多，2只可見巨大血小板，巨核細(xì)胞顆粒減少。結(jié)果見表3。2.4   淫羊藿苷對(duì)MDS模型大鼠骨髓增生程度的影響淫羊藿苷對(duì)MDS模型大鼠骨髓增生程度影響不很明顯。模型生理鹽水組大鼠中有3只骨髓增生活躍、5只明顯活躍、1只極度活躍。模型淫羊藿苷組9只大鼠中有4只骨髓增生活躍、4只明顯活躍、1只極度活躍。表3   淫羊藿苷對(duì)MDS模型大鼠外周血病態(tài)造血的影響（略）2.5  淫羊藿苷對(duì)MDS模型大鼠骨髓病態(tài)造血的影響各模型組大鼠均可見病態(tài)造血，模型淫羊藿苷組能在一定程度上改善骨髓的病態(tài)造血情況。模型生理鹽水組8只大鼠中有4只紅系增生異常>50%，3只可見紅系的病態(tài)造血，3只可見粒系病態(tài)造血，3只可見巨核系的病態(tài)造血。模型淫羊藿苷組9只大鼠中有2只紅系增生異常>50%，2只可見紅系的病態(tài)造血，2只可見粒系病態(tài)造血，1只可見巨核系的病態(tài)造血。結(jié)果見表4。表4   淫羊藿苷對(duì)MDS模型大鼠骨髓病態(tài)造血的影響（略）2.6  淫羊藿苷