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文檔簡(jiǎn)介
1、六味地黃方對(duì)慢性鋁暴露癡呆大鼠記憶功能保護(hù)作用的研究< 【關(guān)鍵詞】 六味地黃方;慢性鋁暴露;老年性癡呆;脂質(zhì)過(guò)氧化;水迷宮【Abstract】 Objective To explore the effects of Liuw Ei dihuang on memory function of rat with chronic aluminum exposure and its mechanism. Methods Aluminum toxic model rats were produced by gastrointestinal
2、 tract of AlCl3.Morris water maze test,plasma chemistry index superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) were used to measure the memory function and its mechanism. Results Compared with control group, the memory function decreased, the MDA level was increased and the SOD activity was decr
3、eased in model group. Compared with model group, SOD activity was increased and MDA level was decreased, the memory function was improved in Liuw EI dihuang group. Conclusions Liuweidihuang can prevent the rat from chronic aluminum damage by increasing antioxidation enzyme activity and decreasing ne
4、uronal lipid peroxidation reaction.【Key words】 Liuweidihuang;Chronic aluminum exposure;Alzheimers disease (AD);Superoxide dismutase (SOD);Malondialdehyde (MDA) 阿爾茨海默病(AD),是老年期最常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病癥之一,主要表現(xiàn)為學(xué)習(xí)記憶功能障礙和行為異常。近年研究證實(shí),慢性鋁暴露是導(dǎo)致AD的主要 環(huán)境 因素之一1。自由基所造成的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷可能就是慢性鋁暴露發(fā)揮神經(jīng)毒性作用的重要途徑2。因此具有抗氧化功能的藥物常被用來(lái)對(duì)抗鋁中
5、毒導(dǎo)致的神經(jīng)損傷。但是常用的合成抗氧化劑在動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)中被發(fā)現(xiàn)有毒副作用,所以尋找安全、有效的抗氧化干預(yù)手段成為防治鋁中毒的研究 熱點(diǎn) 。六味地黃方為歷代醫(yī)家用于延緩衰老的代表藥,其單味藥中含有較強(qiáng)的抗氧化成分。因此,開發(fā)利用以六味地黃方為代表的天然植物藥作為抗氧化劑,可能是防治慢性鋁暴露導(dǎo)致AD的有效途徑。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察六味地黃方對(duì)慢性鋁暴露癡呆大鼠血漿中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量及Morris水迷宮空間學(xué)習(xí)記憶的行為學(xué)影響,為抗氧化類天然植物藥 治療 AD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 1 材料與方法 1.1 動(dòng)物和試劑 健康清潔級(jí)雄性SD大鼠40只,鼠齡10個(gè)月,體重450550 g
6、(由 中國(guó) 人民解放軍軍事 科學(xué) 院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。AlCl3·6H2O(MV254,由天津市耀華化工廠提供),檸檬酸三鈉(MV294.10,由天津市化學(xué)試劑一廠提供),SOD、MDA(由南京建成生物工程研究所提供),Morris水迷宮測(cè)試系統(tǒng)(RB100A,由北京新天地科技有限公司提供)。1.2 動(dòng)物分組及模型的制備 將大鼠按體重隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組、模型組、六味地黃方低濃度組(低濃度組)、六味地黃方高濃度組(高濃度組),每組10只大鼠。正常對(duì)照組大鼠每天自由攝食普通飼料,其余大鼠每日攝取的鼠糧為普通飼料中加入結(jié)晶氯化鋁,劑量為Al3+10 mg/kg。為促進(jìn)鋁的吸收,加鋁
7、飼料中按111加入檸檬酸三鈉。為排除檸檬酸鹽的影響,正常對(duì)照組大鼠進(jìn)食的普通飼料中也加入等量檸檬酸鹽。取熟地黃24 g、山藥12 g、山茱萸12 g、澤瀉9 g、茯苓9 g、牡丹皮9 g,制成濃度為1.0 g/ml的六味地黃生藥。正常對(duì)照組大鼠與模型組大鼠每天2 ml/只生理鹽水灌胃,六味地黃方低濃度組大鼠每天2 ml/只六味地黃生藥灌胃,六味地黃方高濃度組大鼠每天4 ml/只生藥灌胃。各組大鼠均喂養(yǎng)6個(gè)月。1.3 大鼠血漿SOD和MDA水平的測(cè)定 大鼠喂養(yǎng)6個(gè)月后,經(jīng)內(nèi)眥靜脈取血0.2 ml,離心取上清液,所測(cè)指標(biāo)按南京建成生物工程研究所提供的試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行測(cè)定。1.4 大鼠空間學(xué)習(xí)記憶功
8、能的Morris水迷宮行為學(xué)檢測(cè) Morris水迷宮為一個(gè)直徑150 cm、高50 cm的黑色圓形鐵桶,注水至深度16.5 cm左右,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中水溫保持在(26±1)。因測(cè)試對(duì)象為白色SD大鼠,測(cè)試環(huán)境背景為黑色,因此在水中放入碳素墨水,混勻,使水不透明。在水池內(nèi)設(shè)兩條虛擬垂直線,將水池均分為4個(gè)象限,分別為NE(第)、SE(第)、SW(第)及NW(第)象限,在SW(第象限)正中距池壁30 cm處放一個(gè)直徑10 cm、高15 cm的圓形黑色平臺(tái),平臺(tái)平面低于水平面1.5 cm左右,Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)分為定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)兩類。定位航行實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)大鼠的學(xué)習(xí)能力,連續(xù)訓(xùn)練4
9、 d。訓(xùn)練第一天,撤掉水池中平臺(tái),讓大鼠自由游泳(NE象限入水)2 min,觀察大鼠游泳的速度及姿勢(shì),剔除不合格的大鼠。從第2天起放入平臺(tái),每天分上午、下午兩個(gè)時(shí)間段(間隔8 h)對(duì)每只大鼠分別進(jìn)行訓(xùn)練。分別從4個(gè)坐標(biāo)象限內(nèi)標(biāo)定的入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中,觀察并記錄大鼠尋找并爬上平臺(tái)所需時(shí)間(即逃避潛伏期)及直線搜索策略變化的趨勢(shì)。空間探索實(shí)驗(yàn)考察大鼠對(duì)平臺(tái)位置的記憶能力。定位航行實(shí)驗(yàn)后,即在第5天上午,撤去平臺(tái),取NE(第)象限為入水點(diǎn),將大鼠面向池壁放入水中,記錄其在120 s內(nèi)游泳時(shí)各象限的記憶頻度、時(shí)間分布及第一環(huán)點(diǎn)數(shù)。1.5 統(tǒng)計(jì) 學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均用SPSS15.0統(tǒng)計(jì) 軟件 包進(jìn)行處理,數(shù)據(jù)以x±s表示。 2 結(jié) 果 2.1 大鼠血漿SOD活性、MDA含量的測(cè)定結(jié)果 見表1,與正常對(duì)照組比較,模型組大鼠血漿SOD活性明顯下降、MDA含量顯著增高(均P<0.01);與模型組比較,六味地黃方低濃度組、高濃度組SOD活性增高,MDA含量明顯下降(均P<0.05);與正常對(duì)照組比較,六味地黃方低濃度組及高濃度組大鼠SOD活性下降、MDA的含量增加(P<0.05)。結(jié)果表明,慢性鋁暴露
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