臨床生化常用地色原及檢測波長

1、實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案精彩文檔臨床生化常用的色原及檢測波長Toos 545nm苯酚（對(duì)氯苯酚）505nmNAD （ P） H 指示系統(tǒng)，波長 340nm，項(xiàng)目：ALT、AST、GLUC 己糖激酶法、CK、UREA、LDH 等。苯衍生物類，波長 400-410nm ，女口 ALP、GGT、CHE 等。過氧化物酶指示系統(tǒng)，項(xiàng)目：TG、TCH、HDL-C、LDL-C、UA 等?？梢姽獠ㄩL及其互補(bǔ)色：可見光波長及其相應(yīng)被吸收的顏色依次為：紅色（630700nm ）、橙色（600 630nm ）、黃色（570 600nm ）、綠色（500 570nm ） 、藍(lán)色（435 500nm ）、紫色（400 435nm

2、）。 540nm :1.雙縮脲測蛋白：所有蛋白質(zhì)分子都含有肽鍵。在堿性溶液中，肽鍵與銅離子結(jié)合，生成藍(lán)紫色化合物，在 540nm 處吸光度與肽鍵的數(shù)量呈正比關(guān)系，可以計(jì)算蛋白質(zhì)含量。2.染料結(jié)合法測實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案精彩文檔腦脊液蛋白：在檸檬酸存在的酸性條件下，伊紅丫燃料離解成陰離子型，染料的 黃色消退，使試劑空白吸光度降低；另外，蛋白質(zhì)多肽鏈中 的精氨酸、組氨酸、賴氨酸和色氨酸殘基，離解生成帶- NH3+基團(tuán)，與染料陰 離子的羧基和酚基借靜電吸引而結(jié)合成紅色蛋白燃料復(fù)合物，其 540nm 處吸光度大小與蛋白質(zhì)濃度呈比例。 628nm :1.溴甲酚綠法測血清白蛋白：在 PH4.2 的緩沖液中，白蛋白

3、分子帶正電荷，與 帶負(fù)電荷的溴甲酚綠（BCG）生成藍(lán)綠色復(fù)合物，在波長 628nm 處有吸收峰。 復(fù)合物的吸光度與白蛋白濃度成正比。 603nm :1.溴甲酚紫法（BCP）測血清白蛋白：BCP 溶于 PH5.2 的醋酸緩沖液中，呈黃 色。當(dāng)它與白蛋白結(jié)合后轉(zhuǎn)變?yōu)榫G色的符合物，在波長603 出有最大吸收峰。 650nm :1.磷鎢酸法測黏蛋白：以 0.6mol/L 過氯酸沉淀血清中蛋白質(zhì)時(shí)，黏蛋白不被沉 淀，仍存留在濾液中，再加磷鎢酸使黏蛋白沉淀，然后以酚試劑測定沉淀物中蛋 白質(zhì)的含量實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案精彩文檔2.米吐爾直接顯色法測血清無機(jī)磷：利用無機(jī)磷在酸性溶液中與鉬酸銨反應(yīng)生 成磷鉬酸銨復(fù)合物，用

4、還原劑對(duì)甲氨基酚硫酸鹽（米吐爾）還原生成鉬藍(lán)。在試 劑中加入吐溫一 80 以抑制蛋白質(zhì)的干擾。 604nm :1.鄰苯三酚紅鉬絡(luò)合顯色法測腦脊液總蛋白：鄰苯三酚紅與鉬酸絡(luò)合形成紅色復(fù)合物（吸收峰 475nm ）。該復(fù)合物在酸性條件下與蛋白質(zhì)形成復(fù)合體，其吸收峰移至 604nm。用比色法求蛋白質(zhì)含量。 530nm :1比濁法測腦脊液蛋白：腦脊液中蛋白質(zhì)與磺基水楊酸-硫酸鈉試劑作用產(chǎn)生 沉淀，所形成的濁度在 530nm 處進(jìn)行吸光度測定，與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)液比較測 得蛋白含量。 415nm :1親和層析法測 HbAlc :用于分離糖化與非糖化 Hb 的親和層析凝膠柱，是交 聯(lián)間-氨基苯硼酸的瓊脂糖珠

5、。硼酸與結(jié)合在 Hb 分子上葡萄糖的 順位二醇基 反應(yīng)，形成可逆的五環(huán)化合物，致使樣品中的糖化 Hb 選擇性地結(jié)合在柱上，而 非糖化 Hb 則被洗脫。然后用山梨醇解離五環(huán)化合物以洗脫糖化 Hb，在 415nm 分別測定解析液的吸實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案精彩文檔光度，計(jì)算糖化 Hb 的百分率。 550nm :1.糖化血清蛋白測定：血清葡萄糖能與白蛋白及其他血清蛋白分子N 末端的氨基發(fā)生非酶促糖化反應(yīng)，形成高分子酮胺結(jié)構(gòu)。此酮胺結(jié)構(gòu)能在堿性環(huán)境中與硝 基四氮唑藍(lán)（NBT）發(fā)生還原反應(yīng)，生成甲？，以 1 脫氧一 1 嗎啉果糖（DMF ） 為標(biāo)準(zhǔn)參照物，在 550nm 處進(jìn)行比色。 340nm :1.血清前白蛋白

6、測定：血清中的 PA 與抗 PA 抗體在液相中反應(yīng)生成抗原抗體復(fù)合物，使反應(yīng)液呈現(xiàn)濁度。當(dāng)一定量抗體存在時(shí)，濁度與血清中PA 的含量呈正比，利用 340nm 處的散射比濁或投射比濁技術(shù)，與同樣處理的PA 標(biāo)準(zhǔn)比較，求得樣品種 PA 含量2.尿微量白蛋白測定：尿液中的白蛋白與抗人白蛋白特異性抗體在緩沖液中反 應(yīng)生成抗原一抗體復(fù)合物，產(chǎn)生濁度，與尿中白蛋白濃度呈正比，利用透射比濁 法測定340nm 處吸光度，與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)品制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，求得尿液 中的白蛋白濃度。實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案精彩文檔3.己糖激酶法測血清葡萄糖：在己糖激酶（HK）催化下，Glu 和 ATP 發(fā)生磷酸 化反應(yīng)，生成葡萄糖6 磷

7、酸（G-6-P ）與 ADP。前者在葡萄糖6 磷酸脫 氫酶（G 6 PD）催化下脫氫，生成 6 磷酸葡萄糖醛酸（6 PG）,同時(shí)使 NADP 還原成 NADPH。反應(yīng)式如下：葡萄糖 +ATP HK G6P+ ADPG6P + NADP G6PD 6PG + NADPH + H+NADPH 的生成速率與葡萄糖濃度呈正比。NADPH 在波長 340nm 有吸收峰，檢測吸光度升高速率，計(jì)算血清葡萄糖濃度。4. 葡萄糖脫氫酶法測血清葡萄糖：葡萄糖脫氫酶（GDH ）催化葡萄糖脫氫，氧 化生成葡萄糖酸（D 葡萄糖酸& 內(nèi)酯）。B D 葡萄糖+NAD+ GDH D 葡萄糖酸內(nèi)酯+NADH向反應(yīng)液中加

8、入變旋酶可縮短反應(yīng)達(dá)平衡時(shí)間，反應(yīng)過程中NADH 生成量與葡萄糖濃度成正比關(guān)系。5. 血漿乳酸測定：在 NAD 存在下，乳酸脫氫酶催化乳酸氧化成丙酮酸， 同時(shí)生成 NADH :L 乳酸 + NAD+ LDH 丙酮酸 + NADH + H+在 PH9.8 時(shí)，平衡偏向乳酸氧化成丙酮酸。加入肼或氨基脲與丙酮酸生成復(fù)合 物，使丙酮酸不斷從反應(yīng)體系中移去， 進(jìn)一步促進(jìn)反應(yīng)向右移動(dòng)，從而驅(qū)動(dòng)反應(yīng) 的完成。分光光度計(jì)波長 340nm，監(jiān)測吸光度的升高速率，計(jì)算乳酸含量。6. 全血乳酸測定：在 NAD+存在下，LDH 催化乳酸，氧化成丙酮酸。加入硫酸實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案精彩文檔肼捕獲產(chǎn)物丙酮酸，并促進(jìn)反應(yīng)完成。反應(yīng)

9、完成后生成的NADH 與乳酸為等摩爾關(guān)系，在 340nm 下測定 NADH 的生成量，計(jì)算乳酸的含量。7.血漿丙酮酸測定：乳酸脫氫酶催化丙酮酸還原成乳酸，反應(yīng)如下。丙酮酸 + NADH + H+ LDH L 乳酸 + NAD+分光光度計(jì)波長 340nm，監(jiān)測 NADH 吸光度下降速率，計(jì)算樣品中丙酮酸濃 度。本法適用于各種任選式自動(dòng)分析儀。8.全血丙酮酸測定： 原理同血漿丙酮酸測定，PH7.5 條件下利于上述反應(yīng)（生成乳酸方向）9.血清（B 羥丁酸）B HB 測定：在有 NAD 存在時(shí)，B 羥丁酸在 B 羥丁 酸脫氫酶（B HBDH ）催化下，生成乙酰乙酸（AcAc ）和 NADH。在波長 3

10、40nm 處，監(jiān)測反應(yīng)中吸光度的上升速率，可以計(jì)算血清中 B 羥丁酸的濃度。B HB + NAD B-HBDH AcAc + NADH + H+10. 鉀的酶法測定：磷酸烯醇丙酮酸（PEP）與二磷酸腺苷（ADP ）在鉀依賴性 丙酮酸激酶（PK）催化下，生成丙酮酸和三磷酸腺苷（ATP）。再在乳酸脫氫酶 催化下，所生成的丙酮酸和 NADH 反應(yīng)，生成乳酸和 NAD。反應(yīng)中 NADH 的 消耗量與樣品種鉀離子濃度呈正比。因此，在 340nm 處監(jiān)測吸光度下降速率， 可以計(jì)算鉀離子含量。反應(yīng)式如下：實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案精彩文檔PEP + ADP K+, PK 丙酮酸 + ATP丙酮酸 + NADH + H+

11、LDH 孚 L 酸 + NAD+11. 酶法測定血漿（血清）碳酸氫根及總二氧化碳：血漿（清）中的碳酸氫根在 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）催化下和磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）反應(yīng)， 生成草酰乙酸和磷酸；草酰乙酸在蘋果酸脫氫酶（MDH ）催化下，生成蘋果酸， 同時(shí) NADH被氧化成 NAD+。在分光光度計(jì) 340nm 處，吸光度下降速率與樣 品中 HCO3-含量成正比。反應(yīng)式如下。磷酸烯醇式丙酮酸 + HCO3- PEPC 草酰乙酸+磷酸草酰乙酸 + NADH + H+ MDH 蘋果酸 + NAD+12. 紫外分光光度法測血清無機(jī)磷：血清中無機(jī)磷在酸性溶液中與鉬酸銨反應(yīng)生 成的磷鉬酸銨復(fù)合物，

12、直接在 340nm 或 325nm 波長處測定吸光度。13. 速率法測定血清 ALT :在 ALT 速率法測定中，酶偶聯(lián)反應(yīng)式為：L-丙氨酸+a-酮戊二酸一 ALT丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸 +NADH+H+ LDH L-孚 L 酸 +NAD+上述偶聯(lián)反應(yīng)中，NADH 的氧化速率與標(biāo)本中酶活性成正比，可在 340nm 波 長處檢測吸光度下降速率（-K/min ），計(jì)算出 ALT 的活力單位。 600nm :實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案精彩文檔1.染料結(jié)合法測尿微量白蛋白：將尿標(biāo)本實(shí)現(xiàn)用Sephadex G-50 凝膠過濾，除去尿中色素及其他干擾成分。將流出物加 BPB 染料，使之與白蛋白結(jié)合顯色, 經(jīng)與同樣顯色

13、的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液比較，可求得尿中白蛋白含量。2.甲基麝香草酚蘭比色法測血清鎂：血清中鎂、鈣離子在堿性溶液中能與甲基 麝香草酚蘭染料結(jié)合，生成藍(lán)紫色的復(fù)合物，加入EGTA （乙二醇雙-N,N,N,N-四乙酸，簡稱 EGTA）可掩蓋鈣離子的干擾。 505nm :1.葡萄糖氧化酶法測血清葡萄糖：葡萄糖氧化酶（GOD ）催化葡萄糖氧化成葡 萄糖酸（D -葡萄糖酸&內(nèi)酯），并產(chǎn)生過氧化氫：Glu + 2H2O + 02 GOD 葡萄糖酸 + 2H2O2在色原性氧受體（如聯(lián)大茴香胺、4-氨基安替比林偶氮酚）的存在下，過氧化 物酶催化過氧化氫，氧化色原物質(zhì)，生成有色化合物。于505nm 處比色即可測的

14、葡萄糖濃度。 405nm :1鈉的酶法測定：鄰硝基酚-B-D-半乳糖苷（ONPG ）在鈉依賴性 B-半乳糖苷 酶催化下生成鄰-硝基酚和半乳糖。鄰-硝基酚的生成量和樣品中鈉離子濃度呈 正比。鄰-硝實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案精彩文檔基酚在堿性環(huán)境中呈黃色，可在 405nm 波長處監(jiān)測吸光度的升高 速度，計(jì)算鈉的濃度。 460nm :1.硫氰酸汞比色法測血清氯化物：標(biāo)本中的氯離子與硫氰酸汞反應(yīng)，生成極難解離的氯化汞，并釋放出相應(yīng)當(dāng)量的硫氰酸離子。后者與試劑中鐵離子結(jié)合生成 色澤很深的橙紅色硫氰酸鐵，吸收峰在 460nm，色澤強(qiáng)度與氯化物的含量成正 比。Hg （ SCN）2 2CI - HgCI2 + 2SCN-3

15、CN- + Fe3+ Fe（ SCN）3 （橙紅色） 610 nm甲基麝香草酚蘭比色法測血清總鈣：血清中鈣離子在堿性溶液中與甲基麝香草酚 蘭結(jié)合，聲稱藍(lán)色的絡(luò)合物。加入適量的 8-羥基喹啉，可消除鎂離子對(duì)測定的 干擾，與同樣處理的鈣標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行比較，以求得血清總鈣的含量。 575nm鄰-甲酚酞絡(luò)合酮比色法測血清總鈣： 鄰-甲酚絡(luò)合酮是金屬絡(luò)合指示劑，同時(shí) 也是酸堿指示劑，在堿性溶液中與鈣及鎂螯合，聲稱紫紅色螯合物。作鈣測定時(shí)， 在試劑中加入 8-羥基喹啉以消除標(biāo)本中鎂離子的干擾。實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案精彩文檔 640nm硫酸亞鐵磷鉬藍(lán)比色法：用三氯醋酸沉淀蛋白，向無蛋白濾液中加入鉬酸銨試劑， 與無機(jī)磷結(jié)合

16、生成磷鉬酸銨，在以硫酸亞鐵為還原劑，還原成藍(lán)色化合物（鉬藍(lán)）， 進(jìn)行比色測定。 510 nmCalmagite 染料比色法測定血清鎂：血清中鎂在堿性條件下與 Calmagite 染料 生成紫紅色絡(luò)合物，顏色的深淺與鎂的濃度成正比。 溶液中的 EGTA 可消除鈣的 干擾，使用表面活性劑可使蛋白膠體穩(wěn)定，不必去除血清中蛋白質(zhì)而直接測定鎂。 562nm血清鐵和總鐵結(jié)合力測定：與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的血清鐵在酸性介質(zhì)中從轉(zhuǎn)鐵蛋白中 解離出來，再被還原劑還原成二價(jià)鐵，后者與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，在 562nm 處有吸收峰，可作比色測定。直接測定法應(yīng)糾正血清本身的色度，故應(yīng) 設(shè)血清空白。總鐵結(jié)合力（TIBC）是指血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白能與鐵結(jié)合的總量。將過量鐵標(biāo)準(zhǔn)液 加到血清中，使之與未帶鐵的轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合，多余的鐵被輕質(zhì)碳酸