中藥川芎中川芎嗪提取工藝優(yōu)化的探索

1、中藥川芎中川芎嗪提取工藝優(yōu)化的探索                             作者：馬琳 王秀杰，張堅，趙啟鐸，陳志娟 【摘要】  目的考查川芎藥材有效成分川芎嗪提取的影響因素，優(yōu)化提取工藝。方法采用正交實驗對川芎最佳提取工藝進行考察，以HPLC條件為 Kromacil C18（150

2、 mm×4.6 mm，5m）色譜柱為分析柱，以甲醇-1%醋酸水溶液（2575）為流動相，流速1.0 ml·min-1，檢測波長280 nm，柱溫為室溫作為優(yōu)化分析手段。結果川芎的最佳提取工藝：80%乙醇（含5%乙酸）12倍量，超聲提取2次，45 min/次。鹽酸川芎嗪在2.0260.6 g/ ml范圍內呈良好的線性關系，回歸方程為Y=20 205X-11 452，r=1.00平均回收率為 101.70，RSD=2.79%。結論該實驗對川芎藥材中的有效成分川芎嗪的提取效率高，檢測快速準確。在此HPLC條件下川芎嗪和其它成分之間能得到很好的分離。 【關鍵詞】  川芎

3、川芎嗪 高效液相色譜Abstract：ObjectiveTo take the factors which influence Rhizoma huanxiong's extraction into account and optimize the extractive craft.MethodsTo adopt crosscut experiment and explore the best extractive craft. The experiment was based on HPLC whose condition contained Kromacil C18（150mm&#

4、215;4.6mm，5m），the flow phase which methanol to acetic acid was 25 to 75,velocity of flow with 1.0ml per min,checking wavelengh with 280nm and the temperature with room temperature. ResultsRhizoma Chuanxiong's best extractive craft were as follows: ethanol 80%（include 5% acetic acid） and 12 times

5、' quantity. Extraction method was ultrasonic wave with 2 times and 45min per time. Tetramethylpyrazine had good linearity relationship at the range of 2.0260.6g/ ml. Regression equation was Y=20 205X-11 452, r=1.00. Average reclaim rate was 101.70，RSD=2.79%. ConclusionThe method is convenient an

6、d great efficient. Under this condition of chromatogram tetramethylpyrazine can be obtained satisfying separation.Key wordsRhizoma Chuanxiong；  Tetramethylpyrazine ；  HPLC中藥川芎(Rhizoma Chuanxiong)為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根莖。具有活血、行氣及止痛的功效。臨床上廣泛用于頭痛、胸肋疼痛、經閉腹痛、冠心病、跌打損傷等。其有效成分是生物堿類

7、以及酚酸類。本實驗有關14，對川芎中生物堿類有效成分川芎嗪（tetramethylpyrazine）的最佳提取工藝進行研究，尋找提取效率高、快速準確的提取方法并使其在HPLC檢測條件下，有效成分川芎嗪和其它成分之間能得到很好的分離。1  器材1.1  儀器島津LC-6A高效液相色譜系統包括LC-6A恒流泵、SPD-6AV紫外檢測器、Anastar色譜工作站Kromacil C18色譜柱（150mm×4.6mm，5m），天津市色譜技術公司；超聲波提取器（KQ2200）；天平（Mettler Toledo）。1     

8、0;   1.2  材料川芎藥材購于河北安國藥材市場，經鑒定為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根莖；鹽酸川芎嗪標準品購于藥品生物制品檢定所（批號110817-200305）；甲醇（色譜純）；重蒸水。2  方法2.1  色譜條件以Kromacil C18（150 mm×4.6 mm，5 m）色譜柱為分析柱，以甲醇-1%醋酸水溶液（2575）為流動相，流速1.0 ml·min-1，檢測波長280 nm，柱溫為室溫，進樣量20 l。2.2  標準品的制備精密稱定川芎嗪1

9、0.1 mg，置于25 ml的棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。制備成川芎嗪標準品的濃度為404 g/ ml。2.3  線性關系考察精密吸取川芎嗪標準品溶液0.05，0.1，0.2，0.3，0.5，1，1.5 ml，分別置于10 ml棕色瓶中，用甲醇稀釋至刻度。制成不同濃度的標準液。在上述“2.1”項色譜條件下，進樣20 l ，進行檢測。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標得到線性回歸方程為： Y=20 205X-11 452 ，r=1.00。鹽酸川芎嗪在2.0260.6 g/ ml濃度范圍內呈良好的線性關系.2.4  提取溶劑量、時間、次數和溶劑濃度的考察取川芎粉末5 g，超聲提

10、取。對溶劑量(8，10，12倍)、時間（15，30，45 min）、次數(1，2，3)和溶劑濃度(50%，80%，95%)考察。平行實驗兩次。提取液過濾，蒸干，甲醇定容至50 ml，0.45m微孔濾膜過濾。HPLC檢測，川芎嗪的含量。3  結果3.1  精密度實驗取同一標準品溶液在上述HPLC條件下連續(xù)進樣5次，測得峰面積，計算RSD=0.40%。3.2  系統適應性在上述HPLC條件下,川芎嗪和樣品中和其它峰分離良好。結果見圖12。3.3  溶劑濃度、倍數、時間、次數考察結果見表12。表1  川芎嗪提取工藝統計結果（略）表2  方差

11、分析（略）經方差分析得：A，B，C，D有顯著差異，結果選擇A2B2C3D3。即12倍80%乙醇（含5%乙酸）超聲提取2次，45 min/次。3.4  重現性實驗稱取川芎粉末5 g，按照最佳提取工藝進行提取，在上述高效液相條件下進樣，測定。RSD=1.43%。3.5  加樣回收率實驗稱取已知含量的川芎藥材粉末5g按上述色譜條件進行測定。結果見表3。表3  川芎嗪加樣回收率（略）3.6  穩(wěn)定性實驗稱取川芎粉末藥材5.0 g，按最佳提取工藝提取。在上述HPLC條件下于0，1，2，12，24 h進樣，RSD=2.29%。由此表明川芎有效成分川芎嗪在24 h以內是穩(wěn)定的。4  結論綜合上述實驗結果可得出，川芎藥材粉在12倍80%乙醇（含5%乙酸），超聲提取2次，45 min/次，提取效率最高。在川芎嗪的提取時，不加乙酸放置3 d后檢測不到川芎嗪的峰?？紤]在酸性環(huán)境下提取比較合適，因此在提取溶劑中均加有5%的乙酸。在檢測川芎有效成分時曾試用C18（250 mm×4.6 mm，5m）的柱子，但是保留時間過長，而且峰是嚴重的拖尾峰，所以改用C18（150 mm×4.6 mm，5m）的柱子。【】  1葛莉，王小榮. 川芎中有效成分的不同提取