淄博職業(yè)學(xué)院畢業(yè)論文

1、 畢 業(yè) 論 文課題名稱(chēng)花生殼中抗氧化物的提取方法姓 名 學(xué) 號(hào) 所在系 專(zhuān)業(yè)年級(jí) 指導(dǎo)教師 職 稱(chēng) 二OO 七 年 月 日摘要本文主要研究了回流浸提法從花生殼中提取天然抗氧化成分（主要是黃酮類(lèi)化合物）的方法。討論了溶劑（主要是甲醇、乙醇）、時(shí)間（2h、3h、4h）、溫度(70、80、90)、酸度（pH=2、3、5）等因素對(duì)提取效果的影響。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)物，用分光光度法在紫外區(qū)對(duì)總黃酮的含量進(jìn)行測(cè)定。并通過(guò)正交試驗(yàn)確定了最佳提取工藝。通過(guò)對(duì)比，結(jié)果表明最佳提取工藝條件為：乙醇為提取劑，濃度為70%，提取溫度為90，pH=3，提取時(shí)間為4h時(shí)提取物中總黃酮含量較高。關(guān)鍵詞：花生殼；黃酮類(lèi)；提??；分

2、光光度法 目錄摘要 2 概述3 1試驗(yàn)材料與方法31.1 試驗(yàn)材料 3 原料3 試劑3 1.2儀器設(shè)備 3 1.3 實(shí)驗(yàn)方法 3總黃酮含量的測(cè)定 3 原料的預(yù)處理 4 提取方法4 樣品制備流程42.預(yù)試驗(yàn)結(jié)果對(duì)比43試驗(yàn)結(jié)果與分析 53.1試驗(yàn)方案設(shè)計(jì) 53.2試驗(yàn)結(jié)果分析 54 結(jié)果與討論74.1結(jié)果74.2討論 7參考文獻(xiàn)8 謝辭9概述花生，長(zhǎng)生果，豆科，一年生草本。目前，其開(kāi)發(fā)利用的主要是花生仁、花生紅衣和花生根1，花生果殼大部分用作燃料或當(dāng)作廢渣棄去，造成自然資源的極大浪費(fèi)，直接影響了花生的綜合利用價(jià)值。我國(guó)每年花生莢果產(chǎn)量約500萬(wàn)t，其中花生殼占140萬(wàn)t。研究表明，花生殼中除了含

3、有大量碳水化合物及粗纖維外，還有黃酮類(lèi)化合物，該類(lèi)化合物有很好的清除自由基的作用。據(jù)報(bào)道，成熟的花生殼中有含量（質(zhì)量含量，下同）為3.34%7.13%的多酚類(lèi)物質(zhì)。酚類(lèi)物質(zhì)是油脂的抗氧化劑，若花生殼中酚類(lèi)物質(zhì)超過(guò)0.167%時(shí)，就顯出抗氧化作用2。因此，若把花生殼中的多酚類(lèi)物質(zhì)提出，即可獲得天然的食品抗氧化劑。近年來(lái)，有醫(yī)學(xué)報(bào)道，花生殼中的黃酮類(lèi)化合物質(zhì)有降血壓、降血脂和治療冠心病的作用。所以，從花生殼中提取的抗氧化成分不僅是油脂的防腐劑，而且還有保健作用，是一種多功能的食品添加劑。1試驗(yàn)材料與方法1.1 試驗(yàn)材料 原料 花生殼 試劑 95%乙醇 分析純 天津北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠(chǎng) 無(wú)水甲醇 分析

4、純 北方化工廠(chǎng)無(wú)水乙醇 分析純 天津北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠(chǎng)固體NaOH 天津市標(biāo)準(zhǔn)科技有限公司 （1:1）HCl溶液 煙臺(tái)三合化學(xué)試劑有限公司 5%NaNO2溶液10%Al（NO3）31.2 儀器設(shè)備 粉碎機(jī) FFC-15 山東即墨市雙工機(jī)械廠(chǎng)制造電子天平 AR2130/C 上海電子儀器廠(chǎng) 電熱恒溫水浴鍋 HWS-20 龍口市先科儀器公司旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 RE52CS 上海亞榮生化儀器廠(chǎng)循環(huán)水式多用真空泵 SHB-BA95型 鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司真空干燥箱 DZF-6050型 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 721 上海精密科學(xué)儀器有限公司1.3 試驗(yàn)方法總黃酮含量的測(cè)定3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的

5、制作配制0.2mg/mL的蘆丁溶液50mL，取不同體積的蘆丁溶液于7個(gè)25mL容量瓶中，每個(gè)反應(yīng)管中蘆丁含量分別為0.0mg，0.2mg，0.4mg，0.6mg，0.8mg，1.0mg，1.2mg。各加入5%的NANO2溶液1mL，放置6min，再加入10%的AL（N03）3溶液1mL，放置6min，然后加入4%的NAOH溶液10mL，用蒸餾水定容，靜置15min，以第一管做參比，在510nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得蘆丁質(zhì)量濃度與吸光度的關(guān)系曲線(xiàn)方程：Y=0.4198X+0.0159R2=0.9995 樣品溶液的制備分別稱(chēng)取不同方法下提取的干燥后的總黃酮物適量于25mL容量瓶中，用蒸餾水定

6、容至刻度，搖勻溶解，分別吸取1mL置于25mL容量瓶中，在510nm處測(cè)吸光度A，然后由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程計(jì)算得到黃酮的含量。 原料的預(yù)處理 花生殼經(jīng)清洗后，晾干，在5060的溫度下烘干23h，然后在常溫下自然干燥，保存于干燥的環(huán)境下。用粉碎機(jī)將花生殼粉碎，過(guò)40目篩。干燥保存?zhèn)溆谩?提取方法 預(yù)試驗(yàn)是以75%的乙醇作為溶劑，在同樣的溫度（80），同樣的時(shí)間（3h），同樣的溶劑比（1:30）和pH值（pH=3）條件下用回流浸提和直接浸提來(lái)提取黃酮，對(duì)比哪種方法提取的黃酮含量高。 回流浸提法 稱(chēng)花生殼粉5g于250mL圓底燒瓶中，用1:30的料液比加入150mL70%的乙醇溶液 ，調(diào)pH=3（經(jīng)查閱資

7、料知在酸性條件下提取率高），在80下回流浸提3h，真空抽濾，濾液經(jīng)減壓蒸餾（35）回收溶劑，濃縮至干，用無(wú)水乙醇將干燥物洗出，真空干燥至恒重。直接提取法稱(chēng)花生殼粉5g于250mL錐形瓶中，用1:30的料液比加入150mL70%的乙醇溶液，調(diào)pH=3，在80下直接浸提3h，真空抽濾，濾液經(jīng)減壓蒸餾（35）回收溶劑，濃縮至干，用無(wú)水乙醇將干燥物洗出，真空干燥至恒重。 樣品制備流程 濾渣 花生殼粉碎稱(chēng)量（5.000g）回流浸提趁熱抽濾濾液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮粗提液無(wú)水乙醇洗出真空干燥試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)選用乙醇（濃度分別為60%，70%，80%）、甲醇（濃度分別為60%，75%，90%）兩種不同濃度的不同溶劑作

8、為提取劑來(lái)進(jìn)行試驗(yàn)。由于料液比對(duì)提取效果影響不大，固定料液比為1：30。選擇乙醇濃度(%)、提取時(shí)間(h )、提取溫度()和pH值四個(gè)因素作為正交試驗(yàn)的考察因素，提取率（提取物中黃酮的含量%）作為試驗(yàn)指標(biāo)，進(jìn)行正交試驗(yàn)。試驗(yàn)因素與水平見(jiàn)表2(乙醇為提取劑)、表3（甲醇為提取劑）。 表2 乙醇試驗(yàn)因素與水平表乙醇濃度(%)提取時(shí)間(h)提取溫度()pH值160270227038033804905表3 甲醇試驗(yàn)因素與水平表甲醇濃度(%)提取時(shí)間(h)提取溫度()pH值1602702275380339049052. 試驗(yàn)結(jié)果與分析2.1預(yù)試驗(yàn)結(jié)果 按方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。表1 不同提取方法的比較

9、提取方法乙醇回流浸提法乙醇直接浸提法提取物總量（g）01830.227總黃酮含量（%）18.697.46提取率（%）3.884.54經(jīng)對(duì)比，回流浸提法提取率雖然低，但是總黃酮含量高，由于本試驗(yàn)是以總黃酮含量作為考察指標(biāo)，因此，選用回流浸提法進(jìn)行正式試驗(yàn)。在預(yù)試驗(yàn)中，由于粉碎的太細(xì)，纖維物質(zhì)影響浸提使提取物顏色成為深紅棕色，所以正式試驗(yàn)選用過(guò)完40目的粗粉末。2.2試驗(yàn)結(jié)果分析正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果分析見(jiàn)表4（乙醇為提取劑）、表5（甲醇為提取劑）表4 乙醇正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果表L9（34）A(濃度%)B(時(shí)間h)C(溫度)D(pH)提取量(g)提取率（%）黃酮含量(%)1231(60)1(60)1(6

10、0)1(2)2(3)3(4)1(70)2(80)3(90)1(2)2(3)3(5)0.1430.1170.1462.862.342.9212.3414.4915.604562(70)2(70)2(70)1(2)2(3)3(4)2(80)3(90)1(70)3(5)1(2)2(3)0.1840.2450.1743.684.903.4817.1218.4616.937893(80)3(80)3(80)1(2)2(3)3(4)3(90)1(70)2(80)2(3)3(5)1(2)0.2310.1410.3864.622.827.7217.6216.2017.34K1K2K342.4352.5151.

11、1647.0849.1549.8745.4748.9551.6848.1449.0448.92k1k2k314.1417.5017.0515.6916.3816.6215.1616.3217.2316.0516.3516.31極差3.360.932.070.3 由上表可知,乙醇四種因素最佳組合為濃度為70%，t=4h，T=90，pH=3。黃酮含量為18.46%。因素影響依次是濃度>溫度>時(shí)間>pH。表5 甲醇正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果表L9（34）A(濃度%)B(時(shí)間h)C(溫度)D(pH)提取量(g)提取率(%)黃酮含量(%)1231(60)1(60)1(60)1(2)2(3)3(

12、4)1(70)2(80)3(90)1(2)2(3)3(5)0.3050.2260.3136.104.526.2611.1813.9513.274562(75)2(75)2(75)1(2)2(3)3(4)2(80)3(90)1(70)3(5)1(2)2(3)0.2100.4130.3384.208.266.7616.6314.2315.087893(90)3(90)3(90)1(2)2(3)3(4)3(90)1(70)2(80)2(3)3(5)1(2)0.3230.1930.4096.463.868.1815.7717.9914.40K1K2K338.445.9448.1643.5846.174

13、2.7543.2545.9843.2739.8144.8047.89k1k2k312.815.3116.0514.5315.3914.2514.4215.3314.4213.2714.9315.96極差3.251.140.912.69 由上表可知,甲醇四種因素的最佳組合為濃度為90%，t=3h，T=80，pH=5。黃酮含量為17.99%。各因素影響依次是濃度>pH>時(shí)間>溫度。對(duì)比上述兩個(gè)表的結(jié)論,可以得到,花生殼中總黃酮含量的最佳提取劑是乙醇，最佳提取工藝是70%乙醇，溫度在90，pH=3時(shí)提取4h。黃酮的含量為18.46%。3 結(jié)論與討論3.1結(jié)論 通過(guò)預(yù)試驗(yàn)對(duì)比了回流浸

14、提法和直接浸提法，乙醇回流浸提法黃酮含量為18.69%，乙醇直接浸提法黃酮含量為7.46%。試驗(yàn)確定了用回流浸提法效果好，因此正試驗(yàn)中采用回流浸提法來(lái)提取花生殼中的總黃酮。 花生殼中總黃酮含量的最佳提取劑是乙醇，最佳提取工藝是70%乙醇，溫度在90，pH=3時(shí)提取4h。黃酮的含量為18.46%。3.2討論 用乙醇提取花生殼中的抗氧化成分，影響因素有溫度、時(shí)間、酸度、提取劑濃度和溶質(zhì)溶劑比，考慮到固液比對(duì)提取效果影響不大，試驗(yàn)只討論了前四種因素的影響，通過(guò)正交試驗(yàn)確定了最佳提取工藝為濃度為70%，浸提時(shí)間為4h，溫度為90，pH值為3時(shí)提取效果比較好。預(yù)實(shí)驗(yàn)中，抽濾之后，濾液為紅褐色，濾渣為米黃

15、色，真空濃縮時(shí)，開(kāi)始出現(xiàn)的干燥固體是土黃色，后來(lái)成為紅褐色，原因可能由于真空旋轉(zhuǎn)時(shí)溫度高，因此，正試驗(yàn)中將減壓蒸餾和真空干燥的溫度調(diào)低。另一原因可能是由于花生殼粉碎的太細(xì)，里面含有的纖維物質(zhì)影響了浸提，所以，正實(shí)驗(yàn)中換用過(guò)完40目后的粗粉末。用分光光度法測(cè)定花生殼中總黃酮含量方法簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性較好，可為今后利用花生殼提取黃酮類(lèi)化合物建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考4。由正交表可得到，溶劑的濃度對(duì)提取效果的影響最大。由于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)是用水定容的，而黃酮在水中的溶解性很小，導(dǎo)致測(cè)得的數(shù)據(jù)精確性和準(zhǔn)確性不高，因此，時(shí)間、溫度和pH值對(duì)提取效果的影響沒(méi)有得到規(guī)律。測(cè)得的黃酮含量比較低，分析原因可能是由于本試驗(yàn)只研究黃酮的提取方法5，并沒(méi)有涉及到將產(chǎn)品進(jìn)一步分離，純化，同時(shí)也可能與干燥操作有一定的關(guān)系。有待于以后繼續(xù)進(jìn)行。參考文獻(xiàn)1朱麗靜.花生殼綜合利用J.科技信息,1996,(9):2324.2萬(wàn)素英等.食品抗氧化劑M.中國(guó)輕工業(yè)出版社，1998. 133苗敬芝等.銀杏