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文檔簡介

1、分子標記分子標記SRAPSRAP報告人：xxx 一、SRAP標記的概念： SRAP是一種基于PCR的新型標記，由美國加州大學作物系Li和Quiros博士提出的序列相關擴增多態(tài)性（sequence-related amplifiedpolymorphism,SRAP)?？捎靡粚σ铮靡锸窃赟SR的基礎上設計的，是一種無需任何序列信息即可直接PCR擴增的新型分子標記技術，具有簡便、高共顯性、重復性、易于分離條帶及測序等優(yōu)點。二、SRAP標記的原理： SRAP標記原理是利用基因外顯子里G、C含量豐富，而啟動子和內(nèi)含子里A、T含量豐富的特點設計兩套引物，對開放閱讀框架進行擴增。該標記具有簡便、

2、穩(wěn)定、產(chǎn)率高、便于克隆目標片段的特點，并已被應用于圖譜構建、性狀的標記和遺傳多樣性分析。三、SRAP標記中引物的設計與選擇： SRAP分子標記的獨特之處在于引物的設計。SRAP引物是基于外顯子含GC而啟動子、內(nèi)含子富含AT的特點設計的。利用在不同個體中外顯子的相對保守性及內(nèi)含子和啟動子的可變性，通過正反引物的組合搭配擴增出基于內(nèi)含子與外顯子的SRAP多態(tài)性標記。 我們本次實驗主要在于引物的篩選，分別用來自不同地區(qū)的各DNA樣品從現(xiàn)有引物中篩選出合適的引物。四、SRAP標記25ul體系的組成： 水： 12ul 10*PCR taq buffer: 2.5ul Mg離子： 2.5ul dNTP:

3、2ul Me: 1ul Em: 1ul Taq 酶： 3ul 模板DNA： 1ul25ul體系引物五、SRAP標記擴增程序： 六、瓊脂糖凝膠電泳： SRAP擴增反應結束后，擴增產(chǎn)物用2%的瓊脂糖凝膠電泳分析多態(tài)性。 DNA分子在瓊脂糖中泳動時有電荷效應和分子篩效應，在分子篩作用下，分子大小和構象不同的核酸分子泳動率出現(xiàn)較大差異，從而分離核酸片段檢測其大小。核酸分子中嵌入熒光染料（EB）后，在紫外燈下可觀察到核酸片段所在的位置。瓊脂糖凝膠電泳設備： DNA瓊脂糖凝膠電泳膠圖展示：膠圖展示：條帶不穩(wěn)現(xiàn)象電泳時注意事項：1、凝膠一定要加熱溶解完全，均勻；2、一般情況下，梳子越薄而長，條帶越好看；3、上樣量不宜過多，會造成條帶的相互擠壓；4、如果點樣孔多余，將樣點到中間，盡量避免邊緣效應，中間電場比較均勻；5、做膠的緩沖液和跑膠的緩沖液濃度應該一致；6、加樣時不要太快，讓其自然沉底，均勻

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