白酒中甲醇的快速檢測(KJ201912)

1、附件 12白酒中甲醇的快速檢測（ KJ201912）1 范圍本方法規(guī)定了白酒中甲醇的快速檢測方法。本方法第一法適用于白酒（酒精度18% vol68% vol）中甲醇的快速檢測，第二法適用于白酒（酒精度34% vol68% vol）中甲醇的快速檢測。第一法 變色酸法2 原理樣品中的甲醇在磷酸溶液中， 被高錳酸鉀氧化為甲醛， 用偏重亞硫酸鈉除去過量的高錳酸鉀。甲醛在硫酸條件下與變色酸反應(yīng)生成藍紫色化合物。 通過與甲醇對照液比較， 對樣品中甲醇含量 進行判定。3 試劑和材料方法中所用試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純，水為 GB /T 6682 規(guī)定的三級水。3.1 試劑3.1.1 高錳酸鉀（KMnO

2、4）。3.1.2 磷酸（H3PO4）。3.1.3 偏重亞硫酸鈉（Na2S2O5）。3.1.4 硫酸（H2SO4）。3.1.5 變色酸鈉（C10H 6Na2O 8S2）。3.1.6 乙醇（C2H 6O）。3.1.7 5%乙醇（體積分數(shù)）：吸取乙醇5 mL ，置于 100 mL 容量瓶，加水稀釋至刻度。3.1.8 高錳酸鉀-磷酸溶液（30 g/L ）：稱取 3.0 g 高錳酸鉀，溶于 100 mL 磷酸 -水（ 15+85）溶液。3.1.9 偏重亞硫酸鈉溶液（100 g/L）:稱取10.0 g偏重亞硫酸鈉，溶于 100 mL水。3.1.10 變色酸顯色劑：稱取0.1 g變色酸鈉溶于25 mL水中，

3、緩慢加入75 mL硫酸，并用玻璃棒 不斷攪拌，放冷至室溫。3.2 參考物質(zhì)甲醇參考物質(zhì)中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1,純度99%表1甲醇中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量中文名稱英文名稱CAS登錄號分子式相對分子質(zhì)量甲醇Methanol67-56-1CH3OH32.043.3 標準溶液的配制甲醇標準溶液（1 g/L）:稱取0.1 g （精確至0.001 g）甲醇參考物質(zhì)于 100 mL容量瓶中， 用5%乙醇稀釋至刻度，混勻。3.4 材料甲醇快速檢測試劑盒：適用基質(zhì)為白酒（酒精度1868% vol）,需在陰涼、干燥、避光條件下保存。4儀器和設(shè)備4

4、.1 電子天平：感量 0.001 go4.2 量筒：50 mL, 100 mL。4.3 移液器：1 mL, 5 mL。4.4 酒精計：分度值為 1% vol。4.5 渦旋振蕩器。4.6 水浴鍋。4.7 環(huán)境溫度：10c30c。5分析步驟5.1 待測液制備5.1.1 酒精度的測定：取潔凈、干燥的100 mL量筒，注入100 mL樣品，靜置數(shù)分鐘，待酒中氣泡消失后，放入潔凈、擦干的酒精計，輕輕按一下，不應(yīng)接觸量筒，平衡約 5 min,水平觀測，讀 取與彎月面相切處的刻度示值。5.1.2 樣品稀釋：根據(jù)酒精計示值吸取對應(yīng)體積的樣品，置于10 mL比色管中，補水至10 mL （參見表2）,混勻。表2不

5、同酒精度樣品吸取體積表酒精計示值（ vol）樣品吸取體積（mL）補水體積（mL）18 222.57.523272.08.028 321.78.333 361.58.537 411.38.742 451.28.846 531.09.054 600.99.161 680.89.25.1.3 顯色：吸取稀釋后的樣品溶液（5.1.2） 1.0 mL ,置于10 mL比色管中，加入高鎰酸鉀 -磷酸溶液0.5 mL,混勻，密塞，靜置15 min。加入0.3 mL偏重亞硫酸鈉溶液，混勻，使試液完全褪色。沿比色管壁緩慢加入 5 mL變色酸顯色劑，密塞，混勻，置于 70c水浴中，顯色20 min后取出，迅 速冷

6、卻至室溫，即得待測液。每批測試應(yīng)吸取1 mL 5%乙醇同5.1.3加入高鎰酸鉀-磷酸溶液0.5mL”起操作，隨行全試劑空白試驗。5.2 甲醇對照液制備根據(jù)待測樣品的分類 （糧谷類或其他類），吸取對應(yīng)體積（參見表3）的甲醇標準溶液（3.3）, 置于10 mL比色管中，補5%乙醇至10 mL ,混勻。吸取上述溶液 1.0 mL ,置于10 mL比色管中， 同5.1.3加入高鎰酸鉀-磷酸溶液0.5 mL”起操作，制得甲醇對照液。表3標準溶液吸取體積表待測樣品分類標準溶液吸取體積（mL）糧谷類0.3其他類1.05.3 判讀將待測液（5.1）與甲醇對照液（5.2）進行目視比色，10 min內(nèi)判讀結(jié)果。應(yīng)

7、進行平行試驗， 且兩次判讀結(jié)果應(yīng)一致。6結(jié)果判定要求觀察待測液顏色，與甲醇對照液比較判讀樣品中甲醇的含量。顏色深于對照液者為陽性，淺于對照液者為陰性。為盡量避免出現(xiàn)假陰性結(jié)果，判讀時遵循就高不就低的原則。7性能指標1.1 檢測限0.4 g/L （以100%酒精度計）。1.2 判定限糧谷類：0.6 g/L （以100%酒精度計）；其他類：2.0 g/L （以100%酒精度計）。1.3 靈敏度>95%1.4 特異性A 85%1.5 假陰性率工 5%1.6 假陽性率工 15%注： 性能指標計算方法見附錄A 。8 其他本方法所述試劑及操作步驟等是為給方法使用者提供方便， 在使用本方法時不作限定。

8、 方法 使用者在使用替代試劑或操作步驟前，須對其進行考察，應(yīng)滿足本方法規(guī)定的各項性能指標。本方法的參比方法為 GB 5009.266 食品安全國家標準食品中甲醇的測定。為減少乙醇量對顯色的干擾，本方法中待測液和對照液的乙醇量為 5%。本方法中采用的高錳酸鉀-磷酸溶液（3.1.8）、變色酸顯色劑（ 3.1.10）久置會變色失效，建議方法使用者考察穩(wěn)定性或臨用新配。采用本方法，酒精度為非整數(shù)的樣品，為避免出現(xiàn)假陰性結(jié)果，建議參照表2 吸取酒精度整數(shù)部分對應(yīng)體積。當目視不能判定顏色深淺時，可采用分光光度計測定待測液與甲醇對照液570 nm 處的吸光度進行比較判定。第二法 乙酰丙酮法9 原理樣品中的甲

9、醇在磷酸溶液中， 被高錳酸鉀氧化為甲醛， 用草酸除去過量的高錳酸鉀。 甲醛在過量銨鹽條件下與乙酰丙酮反應(yīng)生成黃色化合物。 通過與甲醇對照液比較， 對樣品中甲醇含量進行判定。10 試劑和材料方法中所用試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純，水為 GB /T 6682 規(guī)定的三級水。10.1 試劑10.1.1 高錳酸鉀 -磷酸溶液：同 3.1.8。10.1.2 草酸：無水草酸（H2c2。4）或含2分子結(jié)晶水的草酸（H2c204 2H2。）。10.1.3 乙酰丙酮（C5H8O2）。10.1.4 乙酸銨（c2H702N）。10.1.5 冰乙酸（C2H4。2）。10.1.6 50%乙醇（體積分數(shù)）：量取乙醇（3

10、.1.6） 50 mL,置于100 mL容量瓶，加水稀釋至刻度。10.1.7 草酸溶液（50 g/L）:稱取5.0 g無水草酸或7.0 g含2分子結(jié)晶水的草酸，溶于 100 mL 水。10.1.8 乙酰丙酮溶液：稱取乙酸錢25.0 g,加水70 mL使溶解，加冰乙酸3 mL及乙酰丙酮0.25 mL , 加水稀釋至100 mL,用力搖勻。臨用現(xiàn)配。10.2 參考物質(zhì)同3.2。10.3 標準溶液配制甲醇標準溶液（1 g/L）:稱取0.1 g （精確至0.001g）甲醇標準物質(zhì)于100 mL容量瓶中，用 50%乙醇稀釋至刻度，混勻。10.4 材料甲醇快速檢測試劑盒：適用基質(zhì)為白酒（酒精度34% vo

11、l68% vol）,需在陰涼、干燥、避光條件下保存。11儀器和設(shè)備同4。12分析步驟12.1 待測液制備12.1.1 酒精度的測定：同 5.1.1。12.1.2 顯色：根據(jù)酒精計示值吸取對應(yīng)體積的樣品，置于10 mL比色管中，補乙醇和水至 2.0 mL（參見表4）,混勻。加入高鎰酸鉀 -磷酸溶液1.0 mL,混勻，密塞，靜置 30 min。加入草酸溶液1.0 mL,混勻，密塞，置沸水浴中使其褪色， 取出冷卻至室溫。 加入乙酰丙酮溶液2.0 mL,混勻， 密塞，置沸水浴中，顯色30 min后取出，迅速冷卻至室溫，即得待測液。每批測試應(yīng)吸取2 mL 50% 乙醇同12.1.2加入高鎰酸鉀-磷酸溶液

12、1.0 mL”起操作，隨行全試劑空白試驗。表4不同酒精度樣品吸取體積表酒精計示值（% vol）樣品吸取體積（mL）補乙醇體積（mL）補水體積（mL）34 351.50.50.036 401.30.50.241 441.20.50.345 521.00.50.553 580.90.50.659 650.80.50.766 680.70.50.812.2 甲醇對照液制備根據(jù)待測樣品的分類（糧谷類或其他類），吸取對應(yīng)體積（參見表5）的甲醇標準溶液（10.3）, 補50%乙醇至2.0 mL,混勻后同12.1.2加入高鎰酸鉀-磷酸溶液1.0 mL”起操作，制得甲醇對照液。表5標準溶液吸取體積表待測樣品分

13、類標準溶液吸取體積（mL）糧谷類0.6其他類2.012.3 判讀將待測液（12.1）與甲醇對照液（12.2）進行目視比色，10 min內(nèi)判讀結(jié)果。應(yīng)進行平行試 驗，且兩次判讀結(jié)果應(yīng)一致。13結(jié)果判定要求同6。14性能指標14.1 檢測限0.6 g/L （以100%酒精度計）14.2 判定限糧谷類：0.6 g/L （以100%酒精度計）；其他類：2.0 g/L （以100%酒精度計）14.3 靈敏度>95%14.4 特異性>85%14.5 假陰性率工 5%14.6 假陽性率工 15%注：性能指標計算方法見附錄 Ao15 其他本方法所述試劑及操作步驟等是為給方法使用者提供方便，在使用本

14、方法時不作限定。方法使用者在使用替代試劑或操作步驟前，須對其進行考察，應(yīng)滿足本方法規(guī)定的各項性能指標。本方法的參比方法為 GB 5009.266 食品安全國家標準食品中甲醇的測定。為減少乙醇量對顯色的干擾，本方法中待測液和對照液的乙醇量為 50%。采用本方法，酒精度為非整數(shù)的樣品，為避免出現(xiàn)假陰性結(jié)果，建議參照表數(shù)部分對應(yīng)體積。當目視不能判定顏色深淺時，可采用分光光度計測定待測液與甲醇對照液o4吸取酒精度整415 nm 處的吸光度進行比較判定。8附錄A性能指標計算表樣品情況a檢測Z果b總數(shù)陽性陰性陽性N11N12N1.=N11+N12陰性N21N22N2.=N21+N22總數(shù)N.1=N11+N21N.2=N12+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2顯著性差異（嗜）72= (|N12-N21|-1 ) 2/ (N12+N21 ), 自由度(df) =1靈敏度（p+, %）p+=N11/N1.特異性（P-, %）p-=N22/N2.假陰性率（pf-, %）pf-=N12/N1.=100-靈敏度假陽性率（pf+, %）pf+=N21/N2.=100-特異性相對準確度，%c(N11+N22) /(N1.+N2.)注：a由參比方法檢驗得到的結(jié)果或者樣品中實際的公議值結(jié)果；b由待確認方法