微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)方案模板2015版藥典

1、驗(yàn)證文件類 別： 編 號：部 門：XXXX微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)方案XXXXX公司2016年第 2 頁 共 18 頁鹽酸咪達(dá)普利微生物方法驗(yàn)證報(bào)告 XXXX微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)方案審批起草起草部門簽 名日 期質(zhì)量管理部年 月 日審核審核部門簽 名日 期質(zhì)量管理部年 月 日批準(zhǔn)批準(zhǔn)人簽 名日 期 年 月 日目 錄1、 適用范圍2、 目的3、概述4、適用性所需要的儀器設(shè)備及文件5、可接受的限度范圍標(biāo)準(zhǔn)6、測試方法7、異常情況處理8、測試結(jié)果9、結(jié)論10、再適用性周期11、附表 1、適用范圍本適用性方案適用于XXXX微生物限度檢查的方法適用性試驗(yàn)。2、目的因中華人民共和國藥典（2015

2、年版）頒布實(shí)施，為確保該產(chǎn)品的微生物限度檢查方法的可靠性和可操作性，故對其檢驗(yàn)方法進(jìn)行適用性試驗(yàn)，以符合中華人民共和國藥典規(guī)定。3、概述3.1根據(jù)中華人民共和國藥典2015年版 四部通則1105非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法、1106非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法，對XXXX進(jìn)行需氧菌、霉菌和酵母菌、大腸埃希菌檢查方法的適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)供試品的抑菌活性及測定方法的可靠性。3.2適用性試驗(yàn)時(shí)間及批號： 年 月 日開始分別對 、 、 三批XXXX進(jìn)行獨(dú)立的方法適用性試驗(yàn)。3.3驗(yàn)證小組部門姓名職務(wù)職責(zé)4、儀器設(shè)備及文件4.1需用儀器設(shè)備器具名稱規(guī)格型號儀器編號檢定日期檢定單位有效

3、期4.2文件及存放地方資料名稱存放地點(diǎn)5、可接受的限度范圍標(biāo)準(zhǔn)5.1XXXX微生物限度檢查質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定需氧菌總數(shù)霉菌和酵母菌總數(shù)控制菌不得檢出大腸埃希菌（1g）5.2需氧菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法采用中華人民共和國藥典2015版四部通則1105非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法中敘述的平皿法中的傾注法?？刂凭鷻z查方法采用1106非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法中大腸埃希菌檢查方法6、測試方法6.1供試品 XXXX 批號： 6.2培養(yǎng)基及菌種6.2.1采用符合中國藥典規(guī)定的干燥培養(yǎng)基，并經(jīng)過培養(yǎng)基適用性檢查。胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基 批號： 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 批號：沙氏葡萄糖瓊脂

4、培養(yǎng)基 批號： 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基 批號：麥康凱瓊脂培養(yǎng)基 批號： 麥康凱液體培養(yǎng)基 批號： MUG培養(yǎng)基 批號： 6.2.2菌種均購于：菌種名稱編號購入日期傳代日期傳代次數(shù)枯草芽孢桿菌第 代金黃色葡萄球菌第 代銅綠假單胞菌第 代大腸埃希菌第 代白色念珠菌第 代黑曲霉第 代6.3菌液制備6.3.1需氧菌、霉菌和酵母菌的檢查菌液制備6.3.1.1接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌適量至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中， 3035培養(yǎng)1824小時(shí)，取上述培養(yǎng)物一定量用PH7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成制成適宜濃度的菌懸液，備用。6.3.1.2接種白色念珠菌適量至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，2

5、025培養(yǎng)23天，取上述培養(yǎng)物一定量用PH7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液，備用。6.3.1.3接種黑曲霉適量至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，2025培養(yǎng)57天，加入35ml的含 0.05（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含 0.05（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的黑曲霉孢子懸液，備用。菌懸液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；若保存在28可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在28，在適用性過程的貯存期內(nèi)使用。6.3.2控制菌的檢查菌液

6、的制備接種大腸埃希菌適量至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中， 3035培養(yǎng)1824小時(shí)，取上述培養(yǎng)物用PH7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成制成適宜濃度的菌懸液，備用。菌懸液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；若保存在28可在24小時(shí)內(nèi)使用。菌落數(shù)確認(rèn)稀釋級別104稀釋級別105稀釋級別106稀釋級別107枯草芽孢桿菌（cfu/ml）金黃色葡萄球菌（cfu/ml）銅綠假單胞菌（cfu/ml）大腸埃希菌（cfu/ml）白色念珠菌（cfu/ml）黑曲霉（cfu/ml）6.4需氧菌總數(shù)、霉菌及酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)6.4.1供試液的制備取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100m

7、l，制成1：10的供試液。6.4.2實(shí)驗(yàn)步驟6.4.2.1試驗(yàn)組 分別取5份1：10的供試液各10ml分別加入0.1ml試驗(yàn)菌液（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉）混勻，使每1ml供試液中含菌量不大于100cfu。取1ml含試驗(yàn)菌液的供試液分別注入無菌平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個平皿。另取1ml含白色念珠菌和黑曲霉的供試液分別注入無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個平皿。按平皿法測定其菌落數(shù)，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基用于需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于霉菌、酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)。6.4.2.2供試品對照組

8、取制備好的供試液，以稀釋液替代菌液同試驗(yàn)組操作。6.4.2.3菌液組 取不含中和劑及滅活劑的相應(yīng)稀釋液替代供試液，按試驗(yàn)組操作加入試驗(yàn)菌液并進(jìn)行微生物回收試驗(yàn)。6.4.2.4陰性對照 取相應(yīng)稀釋液代替供試液和菌液同試驗(yàn)組操作。6.4.3培養(yǎng)和計(jì)數(shù)： 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板在3035培養(yǎng)35天，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板在2025培養(yǎng)5天，觀察菌落生長情況，點(diǎn)計(jì)平板上生長的所有菌落數(shù)，計(jì)數(shù)并報(bào)告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計(jì)數(shù)。點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)后，計(jì)算各稀釋級供試液的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報(bào)告規(guī)則報(bào)告菌數(shù)。若同稀釋級別兩個平板的菌落平均數(shù)不小于15，則兩個平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。6.4.4計(jì)算公式

9、6.4.5結(jié)果判斷試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對照組菌落數(shù)的值與菌液對照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.52范圍內(nèi)，可用所用的供試液制備方法及計(jì)數(shù)方法進(jìn)行該供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)。若還存在一株或多株試驗(yàn)菌的回收達(dá)不到要求，那么選擇回收最接近要求的方法和試驗(yàn)條件進(jìn)行供試品的檢査。6.5控制菌 大腸埃希菌6.5.1供試液制備取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，制成1：10的供試液6.5.2試驗(yàn)分組6.5.2.1試驗(yàn)組 取制備好的1:10的供試液10ml，加入0.1ml含菌數(shù)50100cfu的大腸埃希菌菌懸液，置100ml滅菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，置3035培

10、養(yǎng)1824h。6.5.2.2供試品組取制備好的1:10的供試液10ml，置100ml滅菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，置3035培養(yǎng)1824h。6.5.2.3陰性對照組取制備好的PH7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液10ml，置100ml滅菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，置3035培養(yǎng)1824h。6.5.2.4陽性對照組取稀釋液10ml代替供試液，加入0.1ml 50100cfu的大腸埃希菌菌懸液，置100ml滅菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，置3035培養(yǎng)1824h。6.5.3取上述培養(yǎng)物1ml，接種至100ml的麥康凱液體培養(yǎng)基中，4244培養(yǎng)2448小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱

11、瓊脂培養(yǎng)基平板上，3035培養(yǎng)1872小時(shí)。若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗(yàn)，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。大腸埃希菌的鑒定應(yīng)顯MUG與靛基質(zhì)陽性。6.5.4結(jié)果判斷若試驗(yàn)組檢出試驗(yàn)菌，可按此供試液制備法和控制菌檢查法進(jìn)行供試品的該控制菌檢查；若試驗(yàn)組未檢出試驗(yàn)菌，應(yīng)采用其他方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。7、異常情況處理嚴(yán)格按照微生物限度檢查法操作，如在檢測中出現(xiàn)不符合要求的情況出現(xiàn)，分析問題原因后，決定是否需對本方案中設(shè)定的XXXX的微生物限度檢查方法進(jìn)行修改，并重新