發(fā)酵車間作業(yè)指導書標準版

1、發(fā)酵車間作業(yè)指導書發(fā)酵崗位1 崗位設備以及工藝流程1.1設備流程1.2工藝流程配料4-PH 值檢測、鏡檢1r 1r1F菌種-斜面- J種子罐發(fā)酵罐離心分離低溫冷藏1.3崗位設備一覽表序號設備編號設備名稱規(guī)格型號數(shù)量 （臺）1FJ-1配料缸Vg4m 312FJ2種子罐Vg0.65m 323FJ3發(fā)酵罐Vg5.4m 324FJ4離心機25FJ5螺桿泵I IB26FJ6空氣過濾器YU D 247FJ-7精過濾器JPF 248FJ8空氣預過濾器JLS YUD- 1512.車間操作控制程序2.1配料操作一、配料操作1、配料前將配料缸清洗干凈，并目測檢查當天所需各種原輔料的品質(zhì)和是否備齊。2、嚴禁使用污染

2、變質(zhì)或規(guī)格不合的原輔料，以及用渾濁的水源配料。3、 在配料桶內(nèi)注入適量的工藝水，種子罐注入0.15m3,發(fā)酵罐注入0.45m3,通 入蒸汽，開啟攪拌器，將水加熱至60C左右，投入稱量好的原料。按白糖、 豆餅粉、玉米漿、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、泡敵的順序依次將稱量好的原料在攪拌狀態(tài)下加入配料缸。每加一種原料需完全溶解或分散均勻后方可再加入另一種原料。無機鹽及泡敵應在最后用少量水分別溶解或分散后加入4、待配料缸內(nèi)的物料安全充分攪拌均勻后， 用12N鹽酸或12N氫氧化鈉將料液 的PH值調(diào)至6.00.1。5、將混勻的物料在攪拌狀態(tài)下，用泵打入種子罐或發(fā)酵罐，然后用工藝水清洗 干凈配料缸后定容。6、認真填寫

3、配料記錄，以備核查。2.2空消操作規(guī)程1、滅菌前的準備：(1)、滅菌前應將罐清洗干凈，并認真檢查罐內(nèi)各附件是否松動脫落，各種管 道、閥門、壓力表、溫度表有無漏氣，失靈或堵塞情況。如有異常，應 及時修復。(2)、滅菌前必須逐段排盡蒸氣管內(nèi)的冷凝水。(3)、滅菌前通知鍋爐房保持供汽量， 并保證車間分汽缸上的蒸汽壓力大于0.3 Mpa。(4)、通知空壓機房啟動空壓機，發(fā)酵工段用空氣壓力不小于0.25Mpa，同時循環(huán)水也要及時到位。2、空罐滅菌(1)、滅菌前，應將手孔或人孔蓋好，加墊圈并緊固螺栓。(2)、打開進汽閥門及各排汽閥，同時打開底閥排盡冷凝水，并嚴格執(zhí)行空消條件：發(fā)酵罐0.15mPa. 60m

4、in 291C,種子罐0.12Mpa,60min,1251CO(3)、在空罐滅菌的同時，要進行接種等有關(guān)管道的滅菌。(4)、滅菌結(jié)束后， 為避免罐壓急速下降造成負壓， 不可立即通入冷卻水冷卻，否則罐內(nèi)壓力驟降，形成強烈負壓危及罐體安全，而應當通過排汽閥門 均勻緩慢排汽降壓，直至掉零，待溫度降至70C左右時方可打開料孔投 料。(5)、注意事項：為了保證設備的使用壽命，加熱及冷卻時無特殊情況應緩慢進行。3、空氣過濾器及其管道滅菌：(1)、空氣精過濾器的滅菌條件為0.12-0.14MPa, 60min，溫度不高于125C，并與空罐滅菌同步進行。(2)、滅菌結(jié)束后的空氣管道一定要通入無菌空氣保壓，保持

5、壓力為 左右。(3)、注意通過各管道的特殊閥門排汽，以便消除死角2.3實消操作規(guī)程1、進料完畢，核對定容量(種子罐0.28立方米，發(fā)酵罐3立方米)，開啟攪拌器， 復核PH值，然0.2MPa后關(guān)緊料孔(手孔或人孔)。2、夾套升溫。先全開夾套冷凝水閥門，關(guān)閉冷卻水出入口閥門。若夾套內(nèi)有積水，應排盡。接著打開蒸汽總閥，關(guān)閉泄壓閥，調(diào)節(jié)壓力至0.2MPa,再打開夾套進汽閥。應注意夾套壓力不得大于0.1MPa。3、當夾套升溫至90C時，停止夾套進汽，按順序打開各路罐內(nèi)進汽閥，底部進 汽閥稍開，以免形成泡沫上升沖頂。同時注意液面上各小排汽閥要充分排汽， 盡快使溫度達到保壓溫度，罐壓升至規(guī)定壓力后開始保壓并

6、經(jīng)常觀察起泡情 況，調(diào)節(jié)罐壓，使之穩(wěn)定，并嚴格執(zhí)行好種子罐、發(fā)酵罐的滅菌條件。種子罐：0.12Mpa,15min,138C；發(fā)酵缸：O.IMpa,10min，121C。4、保壓結(jié)束，依次關(guān)閉各排汽閥，進汽閥底部泄汽閥及蒸汽總閥。同時關(guān)閉夾套冷凝水閥，打開冷卻水出口閥。然后打開空氣進汽閥保壓至0.1mPa,打開夾套冷卻水進口閥快速保壓降溫。5、隨時觀察罐壓和降溫情況，當罐溫降至35C時，關(guān)閉夾套冷卻水讓其自然降 溫至30C，等待接種。6、注意事項：(1)、蒸汽進入夾套預熱時，應同時打開排汽口，充分排除罐內(nèi)空氣。(2)、滅菌過程進出蒸汽量要大，盡可能采用三路蒸汽直接進內(nèi)層。其目的，一是為了使取樣口

7、和底部閥門的管道內(nèi)料液滅菌充分， 防止可能存在的死 角；二是為使罐內(nèi)料液翻騰均勻。(3)、滅菌到達規(guī)定時間后，應先關(guān)閉各排汽口，后停止進入蒸汽。只有當罐內(nèi)壓力低于空氣過濾器壓力時，才能引入無菌空氣，以防止培養(yǎng)液倒流。然 后立即冷卻，要注意罐內(nèi)壓力變化，以防跌零。(4)、冷卻開始前，一定要先通入無菌空氣，以防抽吸外界空氣造成污染。與此同時，接種管道也必須同時通入無菌空氣， 保持正壓， 使之處于無菌狀態(tài)。(5)、在滅菌過程中，由于蒸汽冷凝水會使料液體積增加，影響定容的正確性，因此配料前定容時應考慮冷凝水因素， 還應在滅菌前充分排除蒸汽管道內(nèi) 的冷凝水。2.4、接種操作規(guī)程(1)種子罐接種操作：1、

8、稍開接種嘴管閥，使之保持正壓，在火圈保護下卸下接種嘴外套。2、在火焰處取下接種瓶皮管頭上牛皮紙和紗布，迅速將皮管套在接種嘴上，并 盡可能套緊。3、通入無菌空氣使罐壓升至0.15MPa 0.18MPa,然后將接種瓶舉高，瓶口往下 傾斜，稍開大罐蓋上的排汽閥，使罐壓降至0.08MPa，禾I用壓差，將種子瓶 中的種子液全部吸入種子罐內(nèi)。4、 如一次不能全部吸入，則重復上述操作過程，直至種子液完全吸入為止。然后關(guān)閉接種嘴管閥，恢復罐壓至0.1MPa,即可開始計時培養(yǎng)。（2）發(fā)酵罐接種操作：1、當種子培養(yǎng)結(jié)束，而發(fā)酵罐料液溫度降至30C時，即可開始移種。移種管道 必須事先滅菌和保壓。2、先關(guān)閉移種管邊上

9、的各排汽閥，再打開移種管道上各閥門，將種子罐壓提高 到0.150.18MPa，利用壓差將種子罐培養(yǎng)液全部壓入等待發(fā)酵的發(fā)酵罐內(nèi)。3、 移完種后，立即關(guān)閉發(fā)酵罐上的移種管道進料閥，恢復壓力至0.1MPa開始 計時培養(yǎng)。4、 移完種后，馬上用工藝水沖洗移種管道，然后再用蒸汽吹洗滅菌。2.5看罐操作規(guī)程1、實罐滅菌結(jié)束后的罐，看罐人員應認真檢查閥門，作好保壓降溫工作。嚴防 培養(yǎng)基倒流，為此罐壓應比精濾壓力低0.05Mpa左右，溫度降低至35T時， 停止夾套冷卻水讓其自然降溫，并通知有關(guān)人員準備接種。2、 在培養(yǎng)中，按工藝要求正確控制各罐的溫度、壓力、通風量、PH值等工藝參 數(shù)。3、 認真交接班，交接

10、班雙方應交待清楚各罐情況及臨時規(guī)定的特殊操作條件。（事 故狀態(tài)下嚴禁交接班，發(fā)生事故當班人員應積極協(xié)助接班人員作好處理或領 導已到場通知當班人員可交接班。）4、 按規(guī)定時間認真作好各種數(shù)據(jù)記錄。5、 遇機械設備發(fā)生故障或工藝條件不能正確實施時，應及時報告，并記錄在臺班記錄上。6、軸封盤內(nèi)經(jīng)常保持機械密封的冷卻水，冷卻水應干凈，生產(chǎn)完后軸封盤內(nèi)水 應全部清除干凈，以免生銹。2.6離心分離操作規(guī)程1、首先要清洗干凈離心機及濾袋，以及菌絲體盤，桶及各種工具，打掃地面衛(wèi) 生。2、按要求放置好濾袋及放料橡膠管，首先啟動離心機空轉(zhuǎn)，觀察運轉(zhuǎn)是否平衡 正常。3、將放料的發(fā)酵罐加入壓縮空氣至壓力為0.15Mp

11、a左右，打開底閥及切換閥門， 只保留離心機問的放料閥處于關(guān)閉狀態(tài)。4、緩緩打開放料閥，讓料液均勻流入離心機中，放料至適量時關(guān)閉放料閥，讓 離心機內(nèi)的料液甩干。5、停掉離心機，用手將濾餅取出盛入菌絲體盤，取干凈后再進行下一次離心。 使用多次的濾袋要用熱水清洗干凈后再重新使用，直至全部料液分離完畢。6、分離出的菌絲體要準確稱量，并記下批號，及時交給管理人員妥善冷藏。7、清洗布袋、離心機及各種容器工具，打掃干凈環(huán)境衛(wèi)生及清洗料液完后的發(fā) 酵罐、出料管，填好臺班記錄。3正常生產(chǎn)作業(yè)程序3.1異常情況的緊急處理措施1、遇到停電時，則攪拌停止，空壓機停止工作，此時，看罐人員應及時將發(fā)酵 罐或種子罐進氣閥門

12、關(guān)掉，再將排氣閥關(guān)掉，以便維持一定罐壓。同時防止 培養(yǎng)液倒流引起管道及過濾器污染，然后再向有關(guān)負責同志反映，以便采取 必要措施。2、一旦確認種子罐染菌（需經(jīng)菌種室監(jiān)控人員及負責人確認后），則及時用高壓 蒸汽直接滅菌后排放，絕對不能往下道工序移種。3、發(fā)酵罐前期染菌則用蒸汽滅菌后放掉，中期染菌一是加入適量的殺菌劑，抑 制雜菌生長；二是降低培養(yǎng)基溫度來控制雜菌的生長速度。如采取上述兩種措施仍不見效，就要考慮提前放罐。4、染菌后的罐體用甲醛等化學物質(zhì)處理，再用蒸汽滅菌（包括各種附屬設備），再次投料前，要徹底清洗罐體、附件，同時進行嚴密程度檢查，以防滲漏。3.2車間消毒操作3.2.1本操作規(guī)程對于發(fā)酵

13、車間環(huán)境、設備內(nèi)外和管道內(nèi)外的定期消毒采 用的是熏蒸消毒法。一、熏蒸車間環(huán)境：主要是發(fā)酵車間地面、地溝、鋼平臺、離心間、冰柜間應執(zhí)行每周星期五消毒一次。二、對于熏蒸設備及管道主要指標：發(fā)酵工段：配料缸、種子罐、發(fā)酵罐。三、熏蒸消毒操作1、熏蒸消毒劑使用二氧化氯用于設備309二氧化氯配12kg水，使用濃度200pp。2、 把車間環(huán)境、設備內(nèi)外，管道清洗干凈后，按20ml/m2（車間）、20ml/m2（設備）的劑量進行核算所用殺菌劑的數(shù)量， 使用濃度根據(jù)二氧化氯的使用方 法配制。3、把稱量好的二氧化氯按1桶/20m2和1桶，罐消毒殺劑等分后置于幾只玻 璃瓶中。4、按1桶/20m2和l桶/罐消毒殺菌

14、劑的比例置于地面和罐內(nèi)， 并保持車間密封和罐體密封與罐體相通的管道閥門開啟，與外界相通的閥門關(guān)閉。5、每次密封熏蒸不少于24小時。6熏蒸完畢，取走熏蒸塑料桶，并用干凈的清水（溫度70C）沖洗設備后即 可。四、對于發(fā)酵的種子平臺、發(fā)酵平臺、冰柜間一星期星期五用新潔爾滅、過氧乙 酸拖地、噴灑。工藝控制指標3.3設備清洗一、設備清洗1、清洗設備前應先將罐內(nèi)熏蒸瓶子取出。觀察罐內(nèi)是否有異物、異味和緊固螺絲是否松動脫落2、將罐體，配料缸用工藝水沖洗干凈，按堿、清水、酸、清水的次序清洗各罐 體和移種管道。堿和酸應先在配料缸內(nèi)配好交化驗測定后方可清洗，濃度為1.5% 2%,溫度為60C70C。3、不用CIP

15、清洗的批次，就加入適量的水至配料缸內(nèi)，加熱至70E后清洗。4、種子罐移種后,罐體和移種管道的清洗：移種完后先把種子罐壓力卸零打開 底部排污閥和手孔，用工藝水馬上沖洗移種管道和種子罐，待水流盡后關(guān)閉底閥加水至打泡漿處打開攪拌，夾套升溫至70T，攪至少60mm后排放，再 用工藝水認真清洗直至干凈。5、發(fā)酵罐離心后的清洗， 泄壓后加入適量的水至罐內(nèi)， 加壓先清洗離心放料管，待水和壓力排完后用水管從取樣口反沖進罐進行清洗，結(jié)束后用蒸汽吹I2min。壓力泄完后將人孔打開人下到罐內(nèi)進行清洗直至干凈。二、注意事項：1、CIP清洗一般35批清洗一次。（如設備有異味，59月或生產(chǎn)間隙時間過 長、特殊情況可增加清

16、洗次數(shù)和力度。）2、酸堿配制和清洗時應注意安全，穿戴好防護用品。3、清洗時應注意沖洗罐體內(nèi)壁及其他附件，避免死角。4、酸堿清洗時應用水沖洗地面，稀釋排除的酸堿濃度，保護地面設施。5、清洗結(jié)束后，應及時認真填寫臺班記錄。3.4發(fā)酵液的收集處理和排放規(guī)定為了防止菌種隨發(fā)酵液或其它途徑而流失， 現(xiàn)對菌絲體廢液的收集處理和菌絲體 的保藏、領用等手續(xù)作如下補充規(guī)定。1、 每批發(fā)酵所產(chǎn)生的廢水和離心分離時沖洗菌絲體的廢液，實行全程跟蹤， 生物氧化滅活后排放處理，避免因廢液未處理排放而造成菌種流失。自 即日起發(fā)酵工段與環(huán)保工段雙方應建立發(fā)酵廢水數(shù)量和時間水移交手 續(xù)，手續(xù)具體辦法是環(huán)保工段值班人員在發(fā)酵工段臺班記錄表上簽名認 可接納數(shù)量，然后在本工段詳細記錄生物氧化等環(huán)保處理的條件和排放 時間，并收此記錄報交調(diào)度室，若因廢水未經(jīng)簽字移交而導致污水未經(jīng) 處理亂放，除承擔環(huán)保部門的罰款之外，公司按照違規(guī)處罰。2、在菌絲體和發(fā)酵廢液里均含有可產(chǎn)B-D呋喃果糖苷酶的菌種，它們與菌 種一樣同屬企業(yè)核心機密，未經(jīng)上級批準，一切形式的外流均應承擔泄 密法律責任。3、加強菌絲體入庫前和入庫后的冷藏保管，嚴格執(zhí)行所有的出入庫手續(xù)。 嚴防菌絲體被盜竊。4、嚴格執(zhí)行公司保密制度，菌種室工作人員以及車間所有接觸菌