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1、說明:本實(shí)驗(yàn)由四個(gè)小實(shí)驗(yàn)組成,其中第一個(gè)實(shí)驗(yàn)(酶的專一性)必做,其他三個(gè)小實(shí)驗(yàn)選做(至少做一個(gè))寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告時(shí),可以只寫需要做的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容!實(shí)驗(yàn)四 酶的特性實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康拿甘巧锎呋瘎?,生物體內(nèi)化學(xué)反應(yīng)基本上都是在酶的催化下進(jìn)行的。通過本實(shí)驗(yàn)了解酶催化的特異性、溫度對(duì)酶活力的影響、PH對(duì)酶活力的影響、激活劑和抑制劑對(duì)酶活力的影響,對(duì)于進(jìn)一步掌握代謝反應(yīng)及其調(diào)控機(jī)理具有十分重要的意義。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容本實(shí)驗(yàn)由酶的專一性實(shí)驗(yàn)、溫度對(duì)酶活力的影響、PH對(duì)酶活力的影響、激活劑和抑制劑對(duì)酶活力的影響4個(gè)小實(shí)驗(yàn)組成。(一)酶的專一性1、實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)以唾液淀粉酶對(duì)淀粉和蔗糖的作用為例,來說明酶的專一性。淀粉和蔗

2、糖無還原性,唾液淀粉酶水解淀粉生成有還原性二糖的麥芽糖,但不能催化蔗糖的水解。用班氏試劑檢查糖的還原性。班氏試劑為堿性硫酸銅,能氧化具還原性的糖,生成磚紅色沉淀氧化亞銅。2、材料、儀器與試劑(1)材料:新鮮配制的唾液及其稀釋液(2)儀器:恒溫水??;沸水浴;試管及試管架;(3)試劑:2%蔗糖溶液;溶于0.3% NaCl的0.5%淀粉溶液;班氏試劑。3、實(shí)驗(yàn)操作(1)稀釋唾液的制備唾液的獲取用一次性杯取一定量的飲用水,漱口以清潔口腔,然后在嘴中含10-20ml飲用水,輕漱2min左右時(shí)間,即可獲得唾液的原液,內(nèi)含唾液淀粉酶。不同稀釋度唾液的制備(用大試管)本實(shí)驗(yàn)需制備1:1、1:5、1:20、1:

3、50、1:200等五個(gè)不同濃度的稀釋唾液。舉例說明:1:5指的是稀釋了5倍的唾液,制備方法為1份原液+4份蒸餾水。 1:20指的是稀釋了20倍的唾液,制備方法為1份1:5的稀釋液+3分蒸餾水。(2)唾液淀粉酶最佳稀釋度的確定(嚴(yán)格按表1添加順序做實(shí)驗(yàn),用小試管做實(shí)驗(yàn))表1 唾液淀粉酶稀釋度的確定管號(hào)1(1:1)2(1:5)3(1:20)4(1:50)5(1:200)0.5%淀粉溶液(滴)44444稀釋唾液(ml)1111137恒溫水浴中保溫5分鐘班氏試劑(ml)11111沸水浴23分鐘實(shí)驗(yàn)結(jié)果(2)淀粉酶的專一性 表2 淀粉酶專一性實(shí)驗(yàn)管號(hào)1234560.5%淀粉溶液(滴)4442%蔗糖溶液(

4、滴)444最佳稀釋度唾液(ml)11煮沸過的最佳稀釋度唾液(ml)11蒸餾水(ml)1137恒溫水浴中保溫5分鐘班氏試劑(ml)111111沸水浴23分鐘實(shí)驗(yàn)結(jié)果(二)溫度對(duì)酶活力的影響1、實(shí)驗(yàn)原理酶的催化作用受溫度的影響。在最適溫度下,酶的反應(yīng)速度最高。淀粉和可溶性淀粉遇碘呈藍(lán)色,糊精按其分子的大小,遇碘可呈藍(lán)色、紫色、暗褐色或紅色。最簡(jiǎn)單的糊精遇碘不呈顏色,麥芽糖遇碘也不呈色,在不同溫度下,淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水解混合物遇碘呈現(xiàn)的顏色來判斷。2、材料、儀器與試劑(1)材料:新鮮配制的唾液及其稀釋液(2)儀器:試管及試管架;恒溫水浴;冰??;沸水??;(3)試劑:溶于0.3% NaCl的

5、0.5%淀粉溶液;KII2碘溶液;3、實(shí)驗(yàn)操作取4支干燥的試管,編號(hào)后按下表加入試劑:表3 溫度對(duì)酶活力影響實(shí)驗(yàn)加樣順序管號(hào)1230.5%淀粉溶液(ml)1.51.51.5最佳稀釋度唾液(ml)11 煮沸過的稀釋唾液(ml)  1實(shí)驗(yàn)結(jié)果搖勻后,將1、3號(hào)試管放入37恒溫水浴中,2號(hào)試管放入冰水中。10分鐘后1、2、3管均取出(將2號(hào)內(nèi)液體分兩半),用KII2溶液來檢驗(yàn)1、2、3號(hào)管內(nèi)淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。記錄并解釋結(jié)果。將2號(hào)管剩下的一半溶液放入37水浴中繼續(xù)保溫10分鐘后,再用KII2液實(shí)驗(yàn),記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。(三)PH對(duì)酶活力的影響1、實(shí)驗(yàn)原理酶的活力受環(huán)

6、境PH值的影響極為顯著。不同酶的最適PH不同。本實(shí)驗(yàn)觀察PH對(duì)唾液淀粉酶活性的影響。唾液淀粉酶的最適PH約為6.8。2、材料、儀器與試劑(1)材料:新配制的溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液(2)儀器:試管及試管架;吸管;滴管;恒溫水浴(3)試劑:PH為5.0、5.8、6.8、8.0的緩沖溶液;KII2碘溶液;PH試紙3、實(shí)驗(yàn)操作表4 PH對(duì)酶活性的影響實(shí)驗(yàn)PH558688.0緩沖液(ml)33330.5%淀粉溶液(ml)1111向第一個(gè)試管加入稀釋唾液后,置于37的恒溫水?。坏却?min后向第二個(gè)試管加入稀釋唾液,置于37的恒溫水?。灰来晤愅?!最佳稀釋度的唾液(ml)1111檢查淀粉水解

7、程度待向第四只試管加入唾液2min后,每隔1分鐘從第3管中取出1滴反應(yīng)液于白瓷板上,加碘液檢查反應(yīng)進(jìn)行情況,直至反應(yīng)液變?yōu)榈攸S色(顏色有點(diǎn)淡即可)。即可從第一只試管依次添加碘液,時(shí)間間隔也為1min。碘液(滴)11112現(xiàn)象為了更好的理解表格內(nèi)容,下面對(duì)實(shí)驗(yàn)過程進(jìn)行說明:各取緩沖液3ml,分別注入4支帶有號(hào)碼的試管,隨后于各個(gè)試管中添加0.5%淀粉溶液1ml和最佳稀釋度的唾液1ml。向各試管中加入稀釋唾液的時(shí)間間隔為1分鐘。將各試管中物質(zhì)混勻,并依次置于37恒溫水浴中保溫。待向第4管加入唾液2ml后,每隔1分鐘由第3管取出一滴混合液,置于白瓷板上,加1小滴KII2溶液。添加KII2溶液,檢驗(yàn)

8、淀粉的水解程度。待混合變?yōu)榈攸S色(顏色有點(diǎn)淡即可)后,向所有試管依次添加1-2滴KII2溶液。添加滴KII2溶液的時(shí)間間隔,從第1管起,亦均為1分鐘。觀察各試管中物質(zhì)呈現(xiàn)的顏色,分析pH對(duì)唾液淀粉酶活性的影響。(四)唾液淀粉酶的活化及抑制1、實(shí)驗(yàn)原理酶的活性受活化劑或抑制劑的影響,氯離子為唾液淀粉酶的活化劑,銅離子為其抑制劑。2、材料、儀器與試劑(1)材料:0.5%淀粉溶液;最佳稀釋度的唾液(2)儀器:試管及試管架;恒溫水浴(3)試劑:1% NaCl溶液;1% CuSO4溶液;KII2碘溶液;1%Na2SO4溶液3、實(shí)驗(yàn)操作(注意本實(shí)驗(yàn)的淀粉溶液為無NaCl的淀粉溶液)表4 唾液淀粉酶活化及抑制實(shí)驗(yàn)管號(hào)12340.5%淀粉溶液(ml)1.51.51.51.5最佳稀釋度唾液(ml)0.50.50.50.51% NaCl溶液(ml)0.51% CuSO4溶液(ml)0.51% Na2SO4溶液(ml)0.5蒸餾水(ml)0.537恒溫水浴中保溫10分鐘KII2溶液(滴)

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