檢測(cè)原理本試劑盒的原理為競(jìng)爭(zhēng)elisa試劑盒利用萃取液通過(guò)均質(zhì)及振蕩

1、人脂聯(lián)素定量ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)脂聯(lián)素在肥胖癥患者和II型糖尿病患者血清中的濃度明顯低于非肥胖者，其濃度的降低導(dǎo)致了胰島素抵抗和高胰島素血癥，而脂聯(lián)素有防止動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的作用，因此脂聯(lián)素與肥胖癥患者II型糖尿病及冠心病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，即脂聯(lián)素的明顯降低預(yù)示著II型糖尿病及冠心病的發(fā)生明顯增加。本試劑盒采用雙抗夾心法測(cè)定人血漿或血清中的脂聯(lián)素，包被抗體及酶標(biāo)記抗體采用鼠抗人脂聯(lián)素單克隆抗體，測(cè)定人血清或血漿中的脂聯(lián)素。試劑組成1 預(yù)包被板 12x8孔 2 樣品液 35mlx23 標(biāo)準(zhǔn)品A 30ng4 10x清洗液 50ml (用前加蒸 餾水450ml)5 酶結(jié)合物 6 mlx16

2、顯色液A 6 mlx17 顯色液B 6 mlx18 終止液 12mlx19說(shuō)明書(shū) 1份樣品準(zhǔn)備血清標(biāo)本：用血清分離管收集血標(biāo)本，凝結(jié)30分鐘后立即離心，1000xg離心15分鐘分離出血清。血漿標(biāo)本：收集肝素或EDTA抗凝血（不得用枸櫞酸抗凝血），30分鐘內(nèi)離心，1000Xg離心15分鐘分離出血漿。上述標(biāo)本如不立即檢測(cè)，可置低于-20環(huán)境下凍存。長(zhǎng)期凍存可置于-80。避免反復(fù)凍融。操作程序(恒溫箱溫育，微孔板直接放入箱內(nèi)；水浴鍋溫育，微孔板放入溫育盒內(nèi)，盒內(nèi)溫度應(yīng)達(dá)37)1 標(biāo)本稀釋?zhuān)簶?biāo)本用樣品液1:500稀釋。舉例：取待測(cè)標(biāo)本10ul+樣品液90ul混勻（樣品I），取樣品I 10ul+樣品液4

3、90ul混勻（樣品II）。2 標(biāo)準(zhǔn)品配制：取標(biāo)準(zhǔn)品1支加入500ul樣品液，混勻（A：60ng/ml），取1ml小離心管7支（B、C、D、E、F、G、H），分別加入250ul樣品液，H管為零對(duì)照管，從A管吸取250ul加入B管，混勻（B：30ng/ml）依次倍比稀釋至G管（C：15ng/ml,D：7.5ng/ml，E：3.8ng/ml，F(xiàn)：1.9ng/ml,G：1.0 ng/ml）。3 取出與待測(cè)定樣品相應(yīng)量的板孔標(biāo)記。其余板放回裝有干燥劑的原包裝袋里4 加樣及酶結(jié)合物： 1:500稀釋的標(biāo)本每孔加50ul，各標(biāo)準(zhǔn)品每孔加50ul（做復(fù)孔）；上述孔加酶結(jié)合物每孔50ul；混勻，371小時(shí)。5

4、洗板：甩去樣品。300ul/孔1x清洗液,甩去,在干凈的吸水紙上拍干。如此洗五遍。6 顯色：顯色液A 50ul/孔，顯色液B 50ul/孔（先加A液再加B液，不得先加B液，也可等量的A液與B液混合，100ul/孔），37 20分鐘（從加B液算時(shí)間）。7終止：終止液100ul/孔，按顯色液加樣順序加樣。8測(cè)定450nm 的OD 值。用 OD值對(duì)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作圖，測(cè)定樣品濃度。樣品脂聯(lián)素的濃度應(yīng)乘上樣品的稀釋倍數(shù)500。樣品若不在線(xiàn)性范圍，可對(duì)稀釋度進(jìn)行調(diào)整。技術(shù)指標(biāo)1. 靈敏度，0.5ng/ml；2. 特異性，不與小鼠及其它動(dòng) 物源脂聯(lián)素交叉；3. 線(xiàn)性范圍：1ng/ml 60ng/ml，結(jié)果重復(fù)可靠；4. 精密性：批內(nèi)CV值8%，批間CV值12% 。注意事項(xiàng)1. 溫育時(shí)勿需封膜或加蓋板蓋。2. 樣品及標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?xiě)?yīng)準(zhǔn)確。血樣品應(yīng)按傳染性材料處理。3. 稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品若不能立即使用，應(yīng)盡快放置在4。稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品僅供當(dāng)天使用。4. 洗板后應(yīng)注意拍干，并應(yīng)注意盡快 加下一步的反應(yīng)液。5.