獸用化學(xué)原料藥結(jié)構(gòu)確證研究技術(shù)指導(dǎo)原則

1、獸用化學(xué)原料藥制備和結(jié)構(gòu)確證研究技術(shù)指導(dǎo)原則 （獸藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則之2） 來(lái)源 中國(guó)獸藥監(jiān)察所 中國(guó)獸藥信息網(wǎng) 編輯 南寧獸藥科技網(wǎng)Dongy 2010-9-51 獸用化學(xué)原料藥制備研究技術(shù)指導(dǎo)原則1-1概述獸用化學(xué)原料藥的制備是獸藥研究和開(kāi)發(fā)的基礎(chǔ)，是獸藥研發(fā)的起始階段，其主要目的是為獸藥研發(fā)過(guò)程中藥理毒理研究、制劑研究、臨床研究提供合格的原料藥，為質(zhì)量研究提供詳細(xì)的信息，為工業(yè)化生產(chǎn)提供穩(wěn)定、可行的生產(chǎn)工藝，為上市獸藥的生產(chǎn)提供符合要求的原料藥。本指導(dǎo)原則是一個(gè)通用的原則，適用于經(jīng)化學(xué)全合成或半合成以及從動(dòng)、植物中提取的獸用原料藥的研制，包括新獸藥、進(jìn)口獸藥和已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的獸藥，經(jīng)微生物

2、發(fā)酵得到的獸藥也可參考該指導(dǎo)原則的要求。因此本指導(dǎo)原則只是給予獸藥研發(fā)者原料藥制備研究中應(yīng)關(guān)注的基本問(wèn)題，可根據(jù)原料藥研發(fā)的實(shí)際情況，采用其他更有效的方法和手段，但是必須符合獸藥研發(fā)的規(guī)律，能夠科學(xué)、合理地解釋和處理獸藥研發(fā)中的問(wèn)題。1-2 原料藥制備研究的一般過(guò)程原料藥制備研發(fā)過(guò)程一般包括以下六個(gè)階段：確定目標(biāo)化合物：通過(guò)文獻(xiàn)調(diào)研、藥效學(xué)篩選實(shí)驗(yàn)或其它有關(guān)基礎(chǔ)研究工作，確定所需要進(jìn)行研發(fā)的化合物。設(shè)計(jì)合成路線：根據(jù)目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)特性，參考國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，綜合分析，確定一條工藝簡(jiǎn)單、成本合理、收率相對(duì)較高、終產(chǎn)品易于純化的合成路線。制備目標(biāo)化合物：通過(guò)化學(xué)反應(yīng)、生物發(fā)酵或其他方法制備出質(zhì)量符

3、合要求的目標(biāo)化合物，為產(chǎn)品進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證、質(zhì)量控制等藥學(xué)方面的研究，以及藥理毒理研究和臨床研究提供合格的樣品。結(jié)構(gòu)確證：經(jīng)過(guò)物理或化學(xué)的方法，準(zhǔn)確無(wú)誤地確證目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)（包含立體結(jié)構(gòu)）（參考原料藥結(jié)構(gòu)確證研究的技術(shù)指導(dǎo)原則）。工藝優(yōu)化：綜合考慮工藝路線的反應(yīng)條件、環(huán)保情況、產(chǎn)品精制與純化的可行性、原材料獲得的難易程度等對(duì)生產(chǎn)工藝進(jìn)行優(yōu)化。中試放大研究、工業(yè)化生產(chǎn)：通過(guò)對(duì)中試、工業(yè)化生產(chǎn)工藝路線的研究，確定穩(wěn)定、可行的工藝，為獸藥的制劑生產(chǎn)提供符合要求的原料藥。1-3 原料藥制備研究的一般內(nèi)容1-3-1工藝的選擇制備工藝選擇的目的是通過(guò)對(duì)擬合成的目標(biāo)化合物的文獻(xiàn)調(diào)研，設(shè)計(jì)或選擇合理的合成路線；

4、對(duì)所選擇的路線進(jìn)行初步分析，對(duì)該化合物的國(guó)內(nèi)外研究情況、知識(shí)產(chǎn)權(quán)狀況有一個(gè)總體的認(rèn)識(shí)；對(duì)所采用的工藝有一個(gè)初步的評(píng)價(jià)，也為獸藥的評(píng)價(jià)提供可靠依據(jù)，這個(gè)階段是原料藥制備工藝研究的必然階段。對(duì)于新的化學(xué)實(shí)體，根據(jù)其結(jié)構(gòu)特征，綜合考慮起始原料獲得的難易程度、合成步驟的長(zhǎng)短、收率的高低以及反應(yīng)的后處理、反應(yīng)條件是否符合工業(yè)生產(chǎn)、環(huán)保要求等因素后，確定合理的合成路線；或者根據(jù)國(guó)內(nèi)外對(duì)類(lèi)似結(jié)構(gòu)化合物的文獻(xiàn)報(bào)道，進(jìn)行綜合分析，確定適宜的合成方法。對(duì)于通過(guò)微生物發(fā)酵獲得的原料藥或者從動(dòng)、植物中提取獲得的原料藥，經(jīng)對(duì)原材料和工藝過(guò)程的可控性分析，綜合考慮成本、環(huán)保情況等，確定一條可以確保產(chǎn)品質(zhì)量可控、收率較高的

5、工藝路線。對(duì)于結(jié)構(gòu)已知的獸藥，通過(guò)文獻(xiàn)調(diào)研，對(duì)有關(guān)該獸藥制備的研究情況有一個(gè)全面的了解；對(duì)所選擇的路線從收率、成本、“三廢”處理、起始原料是否易得、是否適合工業(yè)化生產(chǎn)等方面進(jìn)行綜合分析，選擇相對(duì)合理的合成路線。若所選擇的路線為創(chuàng)新路線，通過(guò)對(duì)現(xiàn)有的路線進(jìn)行分析，與文獻(xiàn)報(bào)道路線進(jìn)行比較，說(shuō)明采用該路線的理由；若使用文獻(xiàn)報(bào)道的路線，也要對(duì)文獻(xiàn)報(bào)道路線進(jìn)行全面的比較、分析，這樣有利于研發(fā)者對(duì)此路線有較深入的理解和認(rèn)識(shí)。1-3-2 起始原料、試劑的選擇原則主要分為起始原料的選擇，溶劑、試劑的選擇，內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)等三部分。起始原料的選擇：起始原料應(yīng)質(zhì)量穩(wěn)定、可控，應(yīng)有來(lái)源、標(biāo)準(zhǔn)和供貨商的檢驗(yàn)報(bào)告，必要時(shí)應(yīng)根據(jù)

6、合成工藝的要求建立內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)由起始原料引入的雜質(zhì)、異構(gòu)體，必要時(shí)應(yīng)進(jìn)行相關(guān)的研究并提供質(zhì)量控制方法，對(duì)具有手性中心的起始原料，應(yīng)制訂作為雜質(zhì)的對(duì)映體異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體的限度，同時(shí)應(yīng)對(duì)該起始原料在制備過(guò)程中可能引入的雜質(zhì)有一定的了解。溶劑、試劑的選擇：一般來(lái)說(shuō)應(yīng)選擇毒性較低的試劑；有機(jī)溶劑的選擇一般避免使用一類(lèi)溶劑，控制使用二類(lèi)溶劑，同時(shí)應(yīng)對(duì)所用試劑、溶劑的毒性進(jìn)行說(shuō)明，這樣有利于在生產(chǎn)過(guò)程中進(jìn)行控制，也有利于勞動(dòng)保護(hù)。有機(jī)溶劑選擇的詳細(xì)內(nèi)容請(qǐng)參閱化學(xué)獸藥有機(jī)溶劑殘留量研究的技術(shù)指導(dǎo)原則。內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)：在獸藥的制備工藝中，起始原料、試劑可能存在著某些雜質(zhì)，若在反應(yīng)過(guò)程中無(wú)法將其去除或者參與了副反

7、應(yīng)，對(duì)終產(chǎn)品的質(zhì)量有一定的影響，因此需要制定相應(yīng)的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其進(jìn)行控制。一般要求對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量有一定影響的起始原料、試劑制訂內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)還應(yīng)注意在工藝優(yōu)化和中試放大過(guò)程中起始原料和重要試劑規(guī)格的改變對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響。一般來(lái)說(shuō)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)重點(diǎn)考慮以下幾個(gè)方面：（1）對(duì)名稱、化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)要有清楚的描述；（2）要有具體的來(lái)源，包括生產(chǎn)廠家和簡(jiǎn)單的制備工藝；（3）提供證明其含量的數(shù)據(jù)，對(duì)所含雜質(zhì)情況（包含有毒溶劑）進(jìn)行定量或定性的描述；（4）如果需要采用起始原料或試劑進(jìn)行特殊反應(yīng)，對(duì)其質(zhì)量應(yīng)有特別的要求，如：對(duì)于必須在干燥條件下進(jìn)行的反應(yīng)，需要對(duì)起始原料或試劑中的水分含量進(jìn)行嚴(yán)格的要求和控制；若起始

8、原料為手性化合物，需要對(duì)對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體的限度有一定的要求；（5）對(duì)于不符合內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)的起始原料或試劑，應(yīng)對(duì)其精制方法進(jìn)行研究，這樣有利于對(duì)工藝和終產(chǎn)品的質(zhì)量進(jìn)行控制。通常，在工藝路線穩(wěn)定的條件下，所采用的起始原料、試劑的質(zhì)量也應(yīng)相對(duì)穩(wěn)定。1-3-3 工藝數(shù)據(jù)的積累： 在獸藥研發(fā)過(guò)程中，原料藥的制備工藝研究是一個(gè)不斷探索和完善的動(dòng)態(tài)過(guò)程，獸藥研發(fā)者需要對(duì)制備工藝不斷地進(jìn)行試驗(yàn)，反復(fù)進(jìn)行優(yōu)化，以達(dá)到獲得一個(gè)可行、穩(wěn)定、收率較高、成本合理并適合工業(yè)化生產(chǎn)的工藝路線。在這個(gè)重復(fù)完善的過(guò)程中，積累充足的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)判斷工藝路線的可行性、穩(wěn)定性具有重要意義，同時(shí)也可以為質(zhì)量研究提供有關(guān)信息

9、。因此，在獸藥研發(fā)過(guò)程中，研發(fā)者應(yīng)積極主動(dòng)收集有關(guān)的工藝研究數(shù)據(jù)，并盡可能提供充分的原料藥制備數(shù)據(jù)的報(bào)告，并對(duì)此進(jìn)行科學(xué)的分析，作出合理的結(jié)論，充分的數(shù)據(jù)報(bào)告也將有利于藥品評(píng)價(jià)者對(duì)原料藥制備工藝的評(píng)價(jià)，需要說(shuō)明的是，數(shù)據(jù)的積累貫穿獸藥研發(fā)的整個(gè)過(guò)程。工藝數(shù)據(jù)的報(bào)告一般從以下幾個(gè)方面考慮：對(duì)工藝有重要影響的參數(shù)、投料量、產(chǎn)品收率及質(zhì)量檢驗(yàn)結(jié)果（包括外觀、熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、比旋度、晶型、結(jié)晶水、有關(guān)物質(zhì)、異構(gòu)體、含量等），并說(shuō)明樣品的批號(hào)、生產(chǎn)日期、制備地點(diǎn)。工藝數(shù)據(jù)報(bào)告一般分為臨床研究和生產(chǎn)研究?jī)蓚€(gè)階段，可采用表格的形式進(jìn)行匯總，參考式樣見(jiàn)附件。1-3-4 中間體的研究及質(zhì)量控制在原料藥制備研究的過(guò)程

10、中，中間體的研究和質(zhì)量控制是不可缺少的部分，其結(jié)果對(duì)原料藥制備工藝的穩(wěn)定具有重要意義，也可以為原料藥的質(zhì)量研究提供重要信息，同時(shí)也可以為結(jié)構(gòu)確證研究提供的重要依據(jù)，對(duì)中間體結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證，可以為終產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)確證起輔助作用（詳見(jiàn)原料藥結(jié)構(gòu)確證研究的技術(shù)指導(dǎo)原則）。一般來(lái)說(shuō)，由于關(guān)鍵中間體對(duì)終產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性有一定的影響，因此對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行控制有較大意義。對(duì)于新結(jié)構(gòu)中間體，由于沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道，因此其結(jié)構(gòu)研究對(duì)于認(rèn)知該化合物的特性、判斷工藝的可行性和對(duì)終產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)確證具有重要作用。對(duì)關(guān)鍵中間體、新結(jié)構(gòu)中間體質(zhì)量進(jìn)行控制，對(duì)工藝的穩(wěn)定性、終產(chǎn)品的質(zhì)量研究具有重要的意義。對(duì)于一般中間體的質(zhì)量要求可相對(duì)簡(jiǎn)單，

11、對(duì)其質(zhì)量可以進(jìn)行定量控制。有時(shí)，因終產(chǎn)品結(jié)構(gòu)確證研究的需要，有必要對(duì)已知結(jié)構(gòu)中間體的結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究。1-3-4-1 已知結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵中間體一般情況下應(yīng)對(duì)其理化常數(shù)、質(zhì)量（定性、定量）進(jìn)行研究，根據(jù)結(jié)構(gòu)確證研究的需要，提供相應(yīng)的結(jié)構(gòu)研究資料。理化常數(shù)研究一般應(yīng)包括：熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、比旋度、溶解性等，并與文獻(xiàn)報(bào)道的有關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。質(zhì)量控制一般包括：性狀、異構(gòu)體（對(duì)于具有立體異構(gòu)的化合物）、有關(guān)物質(zhì)、含量等。結(jié)構(gòu)研究：如果因終產(chǎn)品結(jié)構(gòu)確證的需要，應(yīng)對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證，并應(yīng)與有關(guān)的文獻(xiàn)資料進(jìn)行比較。1-3-4-2 新結(jié)構(gòu)的中間體一般情況下應(yīng)對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證，并對(duì)理化常數(shù)、質(zhì)量控制（定性、定量）進(jìn)行研究。結(jié)構(gòu)研

12、究：一般來(lái)說(shuō)應(yīng)進(jìn)行紅外、紫外、核磁共振（碳譜、氫譜，必要時(shí)進(jìn)行二維相關(guān)譜研究）和質(zhì)譜（包括高分辨質(zhì)譜）等的研究，以確證該中間體的結(jié)構(gòu)。理化常數(shù)研究一般包括：熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、比旋度、溶解性等。質(zhì)量研究一般包括：性狀、異構(gòu)體（對(duì)于具有立體異構(gòu)的化合物）、有關(guān)物質(zhì)、含量等。1-3-4-3 已知結(jié)構(gòu)的一般中間體一般情況下應(yīng)對(duì)其理化常數(shù)進(jìn)行研究，并與文獻(xiàn)資料進(jìn)行比較，同時(shí)還應(yīng)對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行研究，并根據(jù)結(jié)構(gòu)確證研究的需要，提供相應(yīng)的結(jié)構(gòu)研究資料。理化常數(shù)研究一般包括：熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、比旋度、溶解性等。質(zhì)量研究一般包括：采用TLC、HPLC 、GC 等方法，對(duì)其在反應(yīng)過(guò)程中進(jìn)行定量或定性控制。結(jié)構(gòu)研究：如果由于終產(chǎn)品

13、結(jié)構(gòu)確證研究的需要，應(yīng)對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證，并應(yīng)與有關(guān)的文獻(xiàn)資料進(jìn)行比較。1-3-4-4 中間體的再精制對(duì)于不符合標(biāo)準(zhǔn)的中間體，應(yīng)對(duì)其再精制的方法進(jìn)行研究。1-3-4-5 工藝的優(yōu)化與中試放大在原料藥的工藝研究中，工藝的優(yōu)化與中試放大是原料藥制備從實(shí)驗(yàn)室階段過(guò)渡到工業(yè)化階段不可缺少的環(huán)節(jié)，也是該工藝能否工業(yè)化的關(guān)鍵，同時(shí)對(duì)評(píng)價(jià)工藝路線的可行性、穩(wěn)定性具有重要的意義。原料藥制備工藝優(yōu)化與中試放大的主要任務(wù)是：（1）考核實(shí)驗(yàn)室提供的工藝路線在工藝條件、設(shè)備、原材料等方面是否有特殊的要求，是否適合工業(yè)化生產(chǎn)；（2）確定所用起始原料、試劑或有機(jī)溶劑的規(guī)格或標(biāo)準(zhǔn)；（3）驗(yàn)證小試工藝是否成熟合理，主要經(jīng)濟(jì)指標(biāo)

14、是否接近生產(chǎn)要求；（4）進(jìn)一步考核和完善工藝條件，對(duì)每一步反應(yīng)和單元操作均應(yīng)取得基本穩(wěn)定的數(shù)據(jù)；（5）根據(jù)中試研究資料制訂或修訂中間體和成品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、分析方法；（6）根據(jù)原材料、動(dòng)力消耗和工時(shí)等進(jìn)行初步的技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)核算；（7）提出“三廢”的處理方案；（8）提出整個(gè)合成路線的工藝流程，各個(gè)單元操作的工藝規(guī)程。一般來(lái)說(shuō)，中試所采用的原料、試劑的規(guī)格應(yīng)與工業(yè)化生產(chǎn)時(shí)一致。通過(guò)動(dòng)、植物中提取的有效單體、通過(guò)微生物發(fā)酵得到的原料藥的實(shí)驗(yàn)室研究、中試與合成獸藥基本相似，僅用提取、分離、純化等工序代替各步化學(xué)反應(yīng)。在工藝優(yōu)化和放大過(guò)程中，中試規(guī)模的工藝在獸藥評(píng)價(jià)中具有非常重要的意義，該階段是連接實(shí)驗(yàn)室研

15、究和工業(yè)化生產(chǎn)的重要部分，是評(píng)價(jià)原料藥制備工藝可行性、真實(shí)性的關(guān)鍵，是質(zhì)量研究的基礎(chǔ)，獸藥研發(fā)者應(yīng)特別重視原料藥的中試放大研究，需要說(shuō)明的是中試規(guī)模工藝的設(shè)備、流程應(yīng)與工業(yè)化生產(chǎn)一致。原料藥的中試的規(guī)模問(wèn)題一直存在爭(zhēng)議，主要是因?yàn)椴煌F藥規(guī)模的要求應(yīng)該是不同的。應(yīng)根據(jù)不同獸藥（創(chuàng)新獸藥、發(fā)酵獸藥、提取獸藥以及劑量較小的獸藥等）的特點(diǎn)，可分別采用下述之一為中試規(guī)模的要求：（a）單劑量的10000 倍以上；（b）終產(chǎn)品達(dá)到公斤級(jí)；（c）單元反應(yīng)器體積不小于20 升。一般來(lái)說(shuō)，對(duì)于創(chuàng)新獸藥、劑量較小的獸藥（如：?jiǎn)蝿┝繛槲⒖思?jí)的獸藥）可采用（a）的要求；對(duì)于發(fā)酵、提取的獸藥可采用（b）的要求；一般的合

16、成獸藥可采用（b）或（c）的要求。原料藥的工藝優(yōu)化過(guò)程是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過(guò)程，隨著工藝路線的不斷優(yōu)化，反應(yīng)條件、所使用的起始原料、試劑或溶劑的規(guī)格等會(huì)發(fā)生改變，研發(fā)者應(yīng)注意這些改變對(duì)產(chǎn)品的晶型或者質(zhì)量的影響，因此應(yīng)對(duì)重要的變化，如：所使用的起始原料、關(guān)鍵試劑的種類(lèi)或規(guī)格、重要的反應(yīng)條件、產(chǎn)品的精制方法等發(fā)生改變前后對(duì)產(chǎn)品晶型的影響以及可能引入新的雜質(zhì)情況進(jìn)行說(shuō)明，并對(duì)變化前后產(chǎn)品的質(zhì)量進(jìn)行比較。1-3-4-6 雜質(zhì)的分析原料藥制備過(guò)程中產(chǎn)生的雜質(zhì)是原料藥雜質(zhì)的主要來(lái)源，該方面的工作是質(zhì)量研究的基礎(chǔ)。通過(guò)對(duì)工藝過(guò)程中產(chǎn)生的雜質(zhì)進(jìn)行詳細(xì)的研究、分析，獸藥研發(fā)者可以對(duì)工藝過(guò)程中產(chǎn)生的雜質(zhì)有一個(gè)全面的認(rèn)識(shí)，

17、為終產(chǎn)品的質(zhì)量研究可以提供十分有用的信息。需要說(shuō)明的是，這里所述的雜質(zhì)是指原料藥制備過(guò)程中由于副反應(yīng)產(chǎn)生的雜質(zhì)、所用的起始原料引入的雜質(zhì)以及有機(jī)溶劑等，不包括降解產(chǎn)物。雜質(zhì)的研究可參閱獸用化學(xué)藥物雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則。制備過(guò)程中產(chǎn)生的雜質(zhì)一般要從以下幾個(gè)方面考慮：起始原料引入的雜質(zhì)；副反應(yīng)產(chǎn)生的雜質(zhì)；異構(gòu)體；殘留溶劑、試劑、中間體；痕跡量的催化劑；無(wú)機(jī)雜質(zhì)。1-3-4-7 “三廢”處理在原料藥制備研究的過(guò)程中，“三廢”的處理應(yīng)符合國(guó)家對(duì)環(huán)境保護(hù)的要求。在工藝研究中需對(duì)工藝過(guò)程中可能產(chǎn)生的“三廢”問(wèn)題進(jìn)行考慮，盡可能避免使用有毒、污染環(huán)境的溶劑或試劑，在確定合成路線時(shí)盡可能避免采用可能會(huì)對(duì)環(huán)境

18、造成污染的路線，并需要結(jié)合生產(chǎn)工藝制訂合理的“三廢”處理方案。1-1-3-8 工藝的綜合分析在原料藥制備研究的過(guò)程中，工藝的綜合分析也是一個(gè)重要的方面，通過(guò)綜合分析可以使獸藥研發(fā)者對(duì)整個(gè)工藝的利弊有一個(gè)明確的認(rèn)識(shí)，同時(shí)也有利于藥品評(píng)價(jià)工作。獸藥研發(fā)者在以上研究的基礎(chǔ)上，經(jīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室工藝、中試工藝、工業(yè)化生產(chǎn)工藝這三個(gè)階段的深入研究，應(yīng)對(duì)整個(gè)工藝有一個(gè)全面的認(rèn)識(shí)，對(duì)原料藥的制備工藝從工藝路線、反應(yīng)條件、產(chǎn)品質(zhì)量、經(jīng)濟(jì)效益、環(huán)境保護(hù)、勞動(dòng)保護(hù)等方面進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。1-4 名詞解釋起始原料: 起始原料是指穩(wěn)定的、批量生產(chǎn)的化合物，其質(zhì)量應(yīng)是可控的。中間體：在原料藥化學(xué)合成中產(chǎn)生的、需要進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)改造才

19、能生成原料藥的化合物。關(guān)鍵中間體：對(duì)終產(chǎn)品的質(zhì)量或安全性有影響的物質(zhì)，其中也包括對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量、安全性有影響的試劑或起始原料。已知結(jié)構(gòu)中間體：是指已有文獻(xiàn)報(bào)道的中間體。新結(jié)構(gòu)中間體：是指尚沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道的中間體。試劑：一種與起始物或溶劑不同的物質(zhì)，在原料藥的制備中使用。溶劑：在原料藥制備中用于制備溶液或混懸液的無(wú)機(jī)或有機(jī)液體。雜質(zhì)：是在合成或發(fā)酵工藝中由于原料、試劑、溶劑或副反應(yīng)引入的與終產(chǎn)品結(jié)構(gòu)不一樣的任何一種成分。內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)：是指根據(jù)工藝路線的要求，生產(chǎn)企業(yè)或研發(fā)單位制訂的某一化合物的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。1-5 參考文獻(xiàn)1 ICH Q3a Impurities In New Drug Substance

20、s2 FDA Guidance for Industry Drug Product Chemistry，Manufacturing，and Controls Information3 EMEA Note For Guidance On Chemistry of The New Active Substance4化學(xué)藥物原料藥制備研究的技術(shù)指導(dǎo)原則2 獸用化學(xué)原料藥結(jié)構(gòu)確證研究技術(shù)指導(dǎo)原則2-1 原料藥結(jié)構(gòu)確證的一般過(guò)程結(jié)構(gòu)確證的一般過(guò)程：根據(jù)化合物的結(jié)構(gòu)特征制訂科學(xué)、合理、可行的結(jié)構(gòu)確證研究方案，制備符合研究要求的樣品，進(jìn)行有關(guān)的研究，對(duì)各個(gè)研究結(jié)果進(jìn)行綜合分析，確證測(cè)試品的結(jié)構(gòu)（包括立體結(jié)構(gòu)

21、）。主要包括了藥物的命名，理化常數(shù)研究，樣品的制備，樣品的測(cè)試，常用的分析測(cè)試方法有紫外可見(jiàn)吸收光譜（簡(jiǎn)稱：紫外光譜）（Ultraviolet-Visible Absorption Spectra ，UV）、紅外吸收光譜（Infrared Absorption Spectrum，IR）、核磁共振譜（Nuclear Magnetic Resonance，NMR）、質(zhì)譜（Mass Spectrum，MS）、比旋度（D）、X-射線單晶衍射（簡(jiǎn)稱：?jiǎn)尉-衍射）（X-ray Single Crystal Diffraction，XRSD）或/和X-射線粉末衍射（簡(jiǎn)稱：粉末X-衍射）(X-ray Pow

22、der Diffraction，XRPD)、熱分析法（Differential Scanning Calorimetry，DSC）、熱重（Thermo-Gravimetry，TG）等，同時(shí)可根據(jù)化合物結(jié)構(gòu)特征而增加其它測(cè)試方法，進(jìn)行綜合解析等。2-2 原料藥結(jié)構(gòu)確證研究的基本內(nèi)容2-2-1研究方案的制訂獸藥結(jié)構(gòu)千差萬(wàn)別，制備（獲得）方法也各不相同，因此根據(jù)獸藥的自身結(jié)構(gòu)特征和制備（獲得）方法制訂出合理、可行、有效的結(jié)構(gòu)確證方案，才能有效地進(jìn)行獸藥的結(jié)構(gòu)研究。結(jié)構(gòu)確證的方案應(yīng)根據(jù)獸藥自身的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)制訂，以下是對(duì)不同結(jié)構(gòu)類(lèi)型獸藥的測(cè)試方案作一簡(jiǎn)要概述。一般獸藥：采用常規(guī)方法如元素分析（必要時(shí)采用高

23、分辨質(zhì)譜）、UV、IR、NMR、MS、熱分析（差熱或熱重）、粉末X-衍射(XRPD )等即可確證藥物的結(jié)構(gòu)。對(duì)于結(jié)構(gòu)比較特殊的獸藥，也可采用制備衍生物的方法間接證明藥物的結(jié)構(gòu)。對(duì)于存在順?lè)串悩?gòu)的獸藥，尤其是因順?lè)唇Y(jié)構(gòu)不同而導(dǎo)致獸藥穩(wěn)定性、理化性質(zhì)、藥效及安全性等不同的獸藥，在一般結(jié)構(gòu)確證的基礎(chǔ)上，應(yīng)增加順?lè)唇Y(jié)構(gòu)確證的研究。手性獸藥：除進(jìn)行上述各項(xiàng)化學(xué)結(jié)構(gòu)確證和比旋度測(cè)定工作外，還應(yīng)增加其它有效的測(cè)試方法進(jìn)行研究。單一對(duì)映體  其絕對(duì)構(gòu)型（或通過(guò)衍生物的構(gòu)型）確證常用的方法為：比旋度測(cè)定、手性柱色譜（Chiral High Pressure Liquid Chromatography

24、和Gas Chromatography ，手性HPLC 和GC）、核磁共振（NMR）、單晶X-衍射（XRSD）以及旋光色散（Optical Rotatory Dispersion，ORD）、圓二色譜（Circular Dichroism，CD）等，其中單晶X-衍射為直接方法，可提供最直接的信息。也可采用間接的方法，如：在說(shuō)明化合物（獸藥）在反應(yīng)過(guò)程中構(gòu)型沒(méi)有變化的情況下，根據(jù)已知的起始原料構(gòu)型、化學(xué)合成方法的立體選擇性以及中間體的結(jié)構(gòu)也可間接獲得終產(chǎn)品（獸藥）的構(gòu)型信息。獸藥分子中含有多個(gè)不對(duì)稱因素應(yīng)對(duì)其絕對(duì)構(gòu)型、對(duì)映體純度（非對(duì)映體純度）進(jìn)行相關(guān)的研究，并盡可能提供更多的構(gòu)型確證信息。立體異

25、構(gòu)混合物增補(bǔ)各立體異構(gòu)體比例的確證研究。對(duì)于已有實(shí)驗(yàn)證據(jù)或文獻(xiàn)報(bào)道不同立體異構(gòu)體在藥效、藥代或毒理等方面有明顯不同或有相互作用的獸藥，其混合物中各組分的構(gòu)型確證和比例測(cè)定更有必要。外消旋或富集對(duì)映體  可通過(guò)測(cè)定比旋度或采用手性柱色譜（Chiral HPLC、Chiral GC）及核磁共振譜等方法闡明其對(duì)映體的比例。不含金屬元素的有機(jī)鹽類(lèi)或復(fù)合物：根據(jù)結(jié)構(gòu)確證的需要，可提供成鹽前后的兩套波譜和試驗(yàn)數(shù)據(jù)。對(duì)于某些波譜測(cè)定有困難或不易說(shuō)明獸藥結(jié)構(gòu)的鹽或復(fù)合物，測(cè)定藥物的有機(jī)酸根或有機(jī)堿基的波譜，并結(jié)合其它試驗(yàn)項(xiàng)目亦可對(duì)其結(jié)構(gòu)確證提供有效的信息。金屬鹽類(lèi)和絡(luò)合物：在進(jìn)行一般要求的各項(xiàng)測(cè)試基

26、礎(chǔ)上，考慮以適當(dāng)手段反映獸藥中金屬元素的種類(lèi)、存在形式和含量的確證試驗(yàn)；不適于或不能測(cè)試金屬鹽本身的項(xiàng)目，可考慮以成鹽前的酸分子或配位體的相應(yīng)測(cè)試結(jié)果進(jìn)行佐證。半合成獸藥：分子中母核的結(jié)構(gòu)為已知并在可提供明確證據(jù)證明原分子母核結(jié)構(gòu)在半合成全過(guò)程中未發(fā)生改變的前提下，適當(dāng)簡(jiǎn)化對(duì)母核部分結(jié)構(gòu)的確證工作，僅對(duì)新引入的基團(tuán)結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證。多晶型獸藥：在進(jìn)行一般要求的各項(xiàng)測(cè)試基礎(chǔ)上，應(yīng)以適宜方法獲得獸藥晶型數(shù)據(jù)。藥物晶型測(cè)定常用方法為粉末X-衍射(XRPD)、紅外吸收光譜法、熔點(diǎn)、熱分析、光學(xué)顯微鏡等。該類(lèi)獸藥一般可分為以下幾種情況：創(chuàng)新獸藥：  應(yīng)進(jìn)行獸藥在不同結(jié)晶條件下（溶劑、溫度、結(jié)晶速度

27、等）是否存在多種晶型的研究。已有文獻(xiàn)報(bào)道存在多晶型的獸藥  應(yīng)明確藥物晶型的類(lèi)型和純度。對(duì)于混晶獸藥，應(yīng)測(cè)試其晶型組成（種類(lèi)、比例），并與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)比較。對(duì)于因晶型影響其溶解性、穩(wěn)定性、生物利用度和活性的獸藥，在無(wú)相應(yīng)藥理、藥效等研究證明該晶型的安全性和有效性時(shí)，應(yīng)確證自制品與國(guó)外上市藥用晶型的一致性。含有結(jié)晶水或結(jié)晶溶劑的獸藥：該類(lèi)獸藥在進(jìn)行一般分析時(shí)，熱分析研究已經(jīng)提供了獸藥中的結(jié)晶水或結(jié)晶溶劑的信息，如果結(jié)合干燥失重、水分或單晶X-衍射(XRSD)等方法的測(cè)定結(jié)果，基本上可以達(dá)到對(duì)獸藥中結(jié)晶水/溶劑以及吸附水/溶劑進(jìn)行定性、定量的目的。合成多肽獸藥和多糖類(lèi)獸藥：合成的多肽獸藥&#

28、160; 通過(guò)氨基酸分析、質(zhì)譜測(cè)定、序列分析以及肽圖測(cè)繪（含有20 個(gè)以上的氨基酸殘基獸藥）等實(shí)驗(yàn)可基本獲得合成多肽獸藥的結(jié)構(gòu)信息。獸藥結(jié)構(gòu)中如有半胱氨酸，應(yīng)明確其狀態(tài)（氧化態(tài)或還原態(tài)），對(duì)含有多個(gè)半胱氨酸的多肽獸藥，應(yīng)明確二硫鍵正確連接位點(diǎn)。如各步中間體均進(jìn)行了質(zhì)譜測(cè)定，可根據(jù)相關(guān)中間體的結(jié)構(gòu)信息，推測(cè)出進(jìn)行反應(yīng)的氨基酸的種類(lèi)。質(zhì)譜是多肽獸藥結(jié)構(gòu)確證的重要手段，紫外、紅外、核磁共振、多種流動(dòng)相HPLC、比旋度測(cè)定等方法亦可對(duì)的結(jié)構(gòu)確證提供幫助。對(duì)于多肽獸藥，應(yīng)對(duì)目標(biāo)物的化學(xué)純度和對(duì)映體或非對(duì)映體純度進(jìn)行研究。多糖類(lèi)獸藥  通過(guò)對(duì)單糖組成、分子量、糖苷鍵連接方法和連接位置等的分析，可

29、獲得多糖類(lèi)獸藥的基本結(jié)構(gòu)信息。單糖的分離和鑒定可采用紙色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用等技術(shù)；多糖的相對(duì)分子量及分子量分布測(cè)定可用凝膠色譜等方法。紅外光譜、核磁共振、化學(xué)反應(yīng)后產(chǎn)物的分析等實(shí)驗(yàn)，可幫助確定糖苷鍵的連接方式及糖苷鍵的位置。多組份獸藥  應(yīng)明確各組份的組成比例，對(duì)其主要成分應(yīng)進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證，具體方法可參照本指導(dǎo)原則的相關(guān)要求。其它對(duì)于上述未提及的具有特殊結(jié)構(gòu)，需特殊方法進(jìn)行說(shuō)明、確證的獸藥：可根據(jù)其結(jié)構(gòu)特征，制訂能反映獸藥自身結(jié)構(gòu)特征的方法進(jìn)行結(jié)構(gòu)研究。2-2-2 測(cè)試樣品的要求在結(jié)構(gòu)確證的研究中，供試樣品的純度需要進(jìn)行一定的控制，只有使用符合要求的供試品進(jìn)行結(jié)

30、構(gòu)研究，才能獲得獸藥正確的結(jié)構(gòu)信息一般情況下，采用原料藥制備工藝中產(chǎn)品的精制方法對(duì)樣品進(jìn)行精制，并采用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的方法測(cè)其純度、雜質(zhì)，供試樣品的純度應(yīng)大于99.0%，雜質(zhì)含量應(yīng)小于0.5%。2-2-3 結(jié)構(gòu)確證研究的一般內(nèi)容2-2-3-1 一般獸藥的結(jié)構(gòu)確證獸藥元素組成  通常采用元素分析法。這種方法可獲得組成獸藥的元素種類(lèi)及含量，比較測(cè)試結(jié)果與理論結(jié)果差值的大?。ㄒ话阋笳`差不超過(guò)0.3），即可初步判定供試品與目標(biāo)化合物（獸藥）的分子組成是否一致。對(duì)于因獸藥自身結(jié)構(gòu)特征而難于進(jìn)行元素分析時(shí)，在保證高純度情況下可采用高分辨質(zhì)譜方法獲得獸藥元素組成的相關(guān)信息。紫外吸收光譜（UV）

31、60; 通過(guò)對(duì)獸藥溶液在可見(jiàn)-紫外區(qū)域內(nèi)在不同波長(zhǎng)處吸收度的測(cè)定和吸收系數(shù)（尤其是摩爾吸收系數(shù)）的計(jì)算，以及對(duì)主要吸收譜帶進(jìn)行歸屬（如K 帶、R 帶、E 帶、B 帶），可獲得獸藥結(jié)構(gòu)中可能含有的發(fā)色團(tuán)、助色團(tuán)種類(lèi)以及初步的連接方式等信息，同時(shí)對(duì)獸藥的鑒別亦有指導(dǎo)意義。對(duì)于發(fā)色團(tuán)上存在酸性或堿性基團(tuán)的獸藥，通過(guò)在酸或堿溶液中（常用0.1mol/L HCl溶液或0.1mol/L NaOH溶液）最大吸收波長(zhǎng)的測(cè)試，觀察其紫移或紅移現(xiàn)象，可為上述酸性或堿性基團(tuán)的存在提供進(jìn)一步的支持。紅外吸收光譜（IR）  通過(guò)對(duì)獸藥進(jìn)行紅外吸收光譜測(cè)試，可推測(cè)出獸藥中可能存在的化學(xué)鍵、所含的官能團(tuán)及其初步的

32、連接方式，獲得獸藥可能的幾何構(gòu)型、晶型、立體構(gòu)象等信息。固態(tài)獸藥紅外測(cè)試可分為壓片法、糊狀法、薄膜法，液態(tài)獸藥可采用液膜法測(cè)試，氣態(tài)獸藥則可采用氣體池測(cè)定。應(yīng)注意的是，部分含多晶型的獸藥在研磨和壓片過(guò)程中，其晶型也可能發(fā)生變化，此時(shí)可改用糊法等方法測(cè)定。由于糊劑自身有吸收，因此應(yīng)根據(jù)獸藥的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)對(duì)糊劑的種類(lèi)進(jìn)行選擇。另外值得注意的是鹽酸鹽藥物在采用KBr 壓片時(shí)可能會(huì)發(fā)生離子交換現(xiàn)象，應(yīng)分別對(duì)氯化鉀壓片和溴化鉀壓片法測(cè)得的結(jié)果進(jìn)行比較，并根據(jù)結(jié)果選擇適宜的壓片基質(zhì)核磁共振譜（NMR）  本項(xiàng)測(cè)試可獲得獸藥中的組成元素類(lèi)型、數(shù)目、相互連接方式、周?chē)瘜W(xué)環(huán)境、甚至空間排列等信息，進(jìn)而推

33、測(cè)出化合物相應(yīng)官能團(tuán)的連接狀況及其初步的結(jié)構(gòu)。常用的有氫核磁共振譜（1H-NMR）和碳核磁共振譜（13C-NMR）等。核磁共振測(cè)試的重要參數(shù)有：化學(xué)位移（）、偶合常數(shù)（J 值）、峰形、積分面積等。溶劑峰或部分溶劑中的溶劑化水峰可能會(huì)對(duì)獸藥部分信號(hào)有干擾，因此測(cè)試時(shí)應(yīng)選擇適宜的溶劑或方法，以使獸藥所有信號(hào)得到充分顯示。氫核磁共振譜（1H-NMR） 該項(xiàng)測(cè)試可提供供試品中氫原子數(shù)目、周?chē)瘜W(xué)環(huán)境、可能相互間關(guān)系、空間排列等信息。此外屬于1H-NMR測(cè)試的NOESY或NOE（Nuclear Overhauser Effect）試驗(yàn)，還可給出某些官能團(tuán)在分子中位置、優(yōu)勢(shì)構(gòu)象及構(gòu)型。氘代實(shí)驗(yàn)可

34、以提供活潑氫的存在以及種類(lèi)的信息。碳核磁共振譜（13C-NMR）  該項(xiàng)測(cè)試可提供供試品中不同碳原子的類(lèi)型以及所處的化學(xué)環(huán)境信息，便于對(duì)化合物進(jìn)行初步的結(jié)構(gòu)解析。DEPT（Distortionless Enhancement by Polarization Transfer）譜可進(jìn)一步明確碳原子屬于伯碳、仲碳、叔碳或季碳。二維核磁共振譜  目前常用的二維核磁共振譜包括1H-1H相關(guān)譜、13C-1H相關(guān)譜、13C-1H遠(yuǎn)程相關(guān)譜等。對(duì)于結(jié)構(gòu)復(fù)雜或用一維NMR方法難以進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證的化合物，進(jìn)行二維核磁共振譜的測(cè)試可更有效地確證獸藥的結(jié)構(gòu)。其它核磁共振譜  對(duì)于分子式中

35、含F(xiàn)、P 等元素的獸藥，進(jìn)行相應(yīng)的F、P 譜測(cè)試，除可提供相應(yīng)元素的種類(lèi)、在分子中所處的化學(xué)環(huán)境等信息外，對(duì)獸藥元素組成確定亦有重要的佐證作用。質(zhì)譜（MS）  用于原子量和分子量的測(cè)定、同位素的分析、定性或定量的化學(xué)分析，重要參數(shù)有分子離子峰、碎片峰、豐度等。分子離子峰是確證獸藥分子式的有力證據(jù)，應(yīng)根據(jù)藥物自身結(jié)構(gòu)特性選擇適宜的離子源，同時(shí)盡可能地獲得分子離子峰和較多的、可反映出獸藥結(jié)構(gòu)特征的碎片峰。對(duì)含有特殊同位素元素（如Cl、Br 等）的獸藥，利用分子離子峰及其同位素峰豐度間的關(guān)系，可以判斷獸藥中這些組成元素的種類(lèi)、數(shù)量。高分辨質(zhì)譜是通過(guò)精確測(cè)定分子量確定獸藥分子式，但它不能反映

36、獸藥的純度和結(jié)晶水、結(jié)晶溶劑、殘留溶劑、無(wú)機(jī)酸根等情況。隨著科學(xué)的發(fā)展，GC-MS、MS-MS、LC-MS等方法也用于獸藥研究中，研發(fā)者應(yīng)根據(jù)獸藥的組成和結(jié)構(gòu)特征選擇適宜的方法。粉末X-衍射（PXRD）  可用于固態(tài)單一化合物的鑒別與晶型確定，晶態(tài)與非晶態(tài)物質(zhì)的判斷，多種化合物組成的多項(xiàng)（組分）體系中的組分（物相）分析（定性或定量），原料藥（晶型）的穩(wěn)定性研究等。2-2-3-2 手性獸藥的結(jié)構(gòu)確證手性獸藥的結(jié)構(gòu)（或通過(guò)生成其衍生物）確證應(yīng)在上述一般研究的基礎(chǔ)上，采用特殊手段對(duì)其絕對(duì)構(gòu)型進(jìn)行確證，特別是對(duì)于創(chuàng)新獸藥，絕對(duì)構(gòu)型的確定具有非常重要的意義。常用方法為單晶X-衍射（XRSD）、

37、核磁共振譜（NMR）、圓二色譜（CD）、旋光光譜（ORD）以及上述的NOESY 或NOE 差譜（主要適用于具有剛性結(jié)構(gòu)的獸藥）等。其中單晶X衍射（XRSD）為直接方法，后三種為間接方法。單晶X-衍射（XRSD）  可獲得有關(guān)獸藥晶型的相關(guān)信息、獸藥的相對(duì)或絕對(duì)構(gòu)型以及與獸藥以結(jié)晶形式存在的水/溶劑及含量等一系列信息。手性獸藥絕對(duì)構(gòu)型的測(cè)試，建議采用單晶X 射線四園衍射儀，CuK靶，衍射實(shí)驗(yàn)的角范圍不低于57°。圓二色譜（CD ） 該項(xiàng)測(cè)試通過(guò)測(cè)定光學(xué)活性物質(zhì)（獸藥）在圓偏振光下的Cotton 效應(yīng)，根據(jù)Cotton 效應(yīng)的符號(hào)獲得獸藥結(jié)構(gòu)中發(fā)色團(tuán)周?chē)h(huán)境的立體化學(xué)

38、信息，并與一個(gè)絕對(duì)構(gòu)型已知的與待測(cè)獸藥結(jié)構(gòu)相似化合物（獸藥）的Cotton 效應(yīng)相比較，即可能推導(dǎo)出待測(cè)物（獸藥）的絕對(duì)構(gòu)型。此外對(duì)于一般具有剛性結(jié)構(gòu)的環(huán)體系的羰基獸藥，通過(guò)比較其Cotton 效應(yīng)的符號(hào)并結(jié)合經(jīng)驗(yàn)規(guī)律“八區(qū)律”，亦可能預(yù)言某些羰基獸藥的絕對(duì)構(gòu)型。旋光光譜 通過(guò)比較相關(guān)獸藥的旋光性，可得到手性獸藥的相對(duì)構(gòu)型信息。如能得知獸藥旋光的可測(cè)范圍，則在一系列反應(yīng)后，獸藥絕對(duì)構(gòu)型可從用于制備該獸藥的底物構(gòu)型推導(dǎo)得到。應(yīng)注意的是，在采用該方法測(cè)定獸藥絕對(duì)構(gòu)型時(shí)，要在相同的溶劑中以相同的濃度和近乎相同的溫度測(cè)定旋光，以保證比較的可靠性。NOESY 或NOE  差譜通過(guò)對(duì)具

39、有剛性結(jié)構(gòu)（或優(yōu)勢(shì)構(gòu)象）獸藥官能團(tuán)上質(zhì)子的選擇性照射，致使與其相關(guān)質(zhì)子峰強(qiáng)度的增減和相互間偶合作用的消失，從而推測(cè)出鄰近官能團(tuán)的空間構(gòu)象，進(jìn)而可獲得獸藥構(gòu)型的信息。其他方法  例如化學(xué)比較法、核磁共振法等。2-3 獸藥晶型的研究在獸藥研發(fā)過(guò)程中，多晶型現(xiàn)象是普遍存在的，其中有部分獸藥因晶型不同具有不同的生物利用度和/或生物活性，特別是水溶性差的口服固體獸藥。創(chuàng)新獸藥研究中，應(yīng)對(duì)不同結(jié)晶條件下（溶劑、溫度、結(jié)晶速率等）的晶型進(jìn)行研究；通過(guò)不同晶型對(duì)獸藥活性和毒性等影響的研究，可為其臨床應(yīng)用晶型的選擇提供依據(jù)。對(duì)于仿制已上市的獸藥，應(yīng)進(jìn)行自制獸藥的晶型與已上市獸藥晶型比較的研究，以保證自

40、制品晶型的正確性。進(jìn)行連續(xù)多批樣品晶型一致性的研究，是判斷工藝是否穩(wěn)定的依據(jù)之一。獸藥晶型測(cè)定方法通常有粉末X-衍射、紅外光譜、熱分析、熔點(diǎn)、光學(xué)顯微鏡法等。粉末X-衍射（XRPD ）  粉末X射線衍射測(cè)試是判斷研制獸藥與其對(duì)照品晶型是否一致的首選方法。紅外光譜（IR）  某些結(jié)構(gòu)相同但晶型不同的獸藥，它們的紅外光譜在某些區(qū)域可能存在一定的差異，因此比較獸藥的紅外光譜，可用于區(qū)分獸藥的晶型。但應(yīng)注意在研磨、壓片的過(guò)程中，藥物的晶型可能會(huì)改變。熔點(diǎn)（mp） 結(jié)構(gòu)相同但不同晶型的獸藥其熔點(diǎn)可能存在一定的差異，熔點(diǎn)也可以用于晶型研究。熱分析  用于獸藥的物理常

41、數(shù)、熔點(diǎn)和沸點(diǎn)的確定，并作為鑒別和純度檢查的方法。晶型不同的獸藥其熱分析圖譜有一定的差異，常用熱分析方法有差示掃描量熱法（DSC）和差熱分析法（DTA）。光學(xué)顯微鏡法2-4 獸藥結(jié)晶水或結(jié)晶溶劑的分析對(duì)于含有結(jié)晶水或結(jié)晶溶劑的獸藥，應(yīng)對(duì)獸藥中的水分/溶劑進(jìn)行分析。常用分析方法為熱重、差熱分析、干燥失重、水分測(cè)定、核磁共振以及單晶X-衍射（XRSD）。熱重  可獲得測(cè)試獸藥的吸附水溶劑、結(jié)晶水/溶劑及初步的分解溫度等信息，結(jié)合差熱分析的信息，還可判斷測(cè)試獸藥在熔融時(shí)是否分解。差熱分析  該項(xiàng)測(cè)試可推測(cè)出測(cè)試獸藥的吸附水/溶劑、結(jié)晶水/溶劑以及熔點(diǎn)、有無(wú)多晶型存在和熱焓值等信息

42、。干燥失重  該方法可獲得測(cè)試獸藥中結(jié)晶水或溶劑、吸附水或溶劑的信息。水分測(cè)定  可以獲得測(cè)試獸藥中總含水量的信息（吸附水或結(jié)晶水）。單晶X-衍射（XRSD）  單晶X-衍射在提供獸藥元素組成、分子量及結(jié)構(gòu)信息的同時(shí)，還可提供獸藥中以結(jié)晶形式存在的水或溶劑的信息，包括結(jié)晶水或溶劑的種類(lèi)、數(shù)量、存在方式等。核磁共振測(cè)試 有可能獲得獸藥中含有的部分結(jié)晶溶劑的信息。以上分析方法均有各自的優(yōu)、缺點(diǎn)，在獸藥的結(jié)構(gòu)確證研究中應(yīng)根據(jù)獸藥的結(jié)構(gòu)特征，選擇適宜的方法，同時(shí)也可利用不同方法所得結(jié)果進(jìn)行相互補(bǔ)充、佐證，以確定存在于獸藥中水或溶劑的種類(lèi)、數(shù)量和形式。其它具有特殊元素獸藥的

43、結(jié)構(gòu)確證  對(duì)于結(jié)構(gòu)中含有金屬離子以及P、F 等元素的獸藥，進(jìn)行相應(yīng)金屬原子吸收測(cè)定以及F、P 等元素的測(cè)定結(jié)果，對(duì)其結(jié)構(gòu)確證有重要意義。原子發(fā)射光譜法、原子吸收分光光度法（ Atomic Emission Spectrophotometry、Atomic Absorption Spectrophotometry，AES 、AAS）可用含有多種金屬離子的獸藥中無(wú)機(jī)微量元素的含量分析。AES常用于金屬元素的定性研究， AAS 可用于金屬元素的定量研究。絡(luò)合金屬離子存在方式的檢測(cè)  可采用單晶X-衍射等方法進(jìn)行檢測(cè)。2-5 參考文獻(xiàn)和對(duì)照品對(duì)結(jié)構(gòu)確證的意義及要求在結(jié)構(gòu)確證研究中

44、，參考文獻(xiàn)和結(jié)構(gòu)確證用對(duì)照品對(duì)結(jié)構(gòu)確證具有重要的佐證意義，但不是獸藥結(jié)構(gòu)確證研究的必要條件。（1） 參考文獻(xiàn)對(duì)結(jié)構(gòu)確證的意義和要求參考文獻(xiàn)對(duì)獸藥的結(jié)構(gòu)確證具有重要的佐證作用，所用的參考文獻(xiàn)應(yīng)引自國(guó)內(nèi)外權(quán)威雜志或?qū)＠?，但?yīng)注意的是不同的測(cè)試條件所得到的測(cè)試結(jié)果亦可能有所差異。獸藥不同研發(fā)階段的參考文獻(xiàn)對(duì)獸藥結(jié)構(gòu)確證所起到的佐證作用可能不同。（2） 對(duì)照品對(duì)結(jié)構(gòu)確證的意義和要求結(jié)構(gòu)確證用對(duì)照品的結(jié)構(gòu)信息對(duì)獸藥的結(jié)構(gòu)確證亦具有重要的佐證作用，不同來(lái)源的結(jié)構(gòu)確證用對(duì)照品對(duì)獸藥結(jié)構(gòu)確證的佐證程度不同。對(duì)于從制劑中提取、精制所得的結(jié)構(gòu)確證用對(duì)照品，如未能驗(yàn)證在提取過(guò)程中晶型是否變化，此結(jié)構(gòu)確證用對(duì)照品不能作為晶型測(cè)定和與晶型有關(guān)的其它圖譜（如IR、粉末X射線衍射）以及理化性質(zhì)（如熔點(diǎn)、差熱分析、熱重分析）檢測(cè)的對(duì)照依據(jù)。結(jié)構(gòu)確證用對(duì)照品和測(cè)試樣品應(yīng)在同一儀器上采用相同的測(cè)試條件進(jìn)行測(cè)試，