pcr污染防治手冊

1、PCR污染防治手冊為什么要如此査視防治PCR污染？聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)是一科選擇性體外廿增DNA或RNA片 段的方比。護增過程中，廿增的DNA A量是呈描數(shù)上升的。PCR嚴揚的濃皮一般為10必拷 貝/ml,而Img人墓因組DNA才含1.41064#貝的單拷貝基因片段，因此後得PCR獷增反 應的斂感性非常爲。正是由于PCR反應具冇強大的護增效率也導歡其及易污快，圾微量的 PCR廣楊污殺便可導歡假陽性結果。A應用HPV分禮忒和盒的過程中，主要存A両個活雜 源：1標本間的交又污染；2.PCR護增廣楊的污殺。其中以笫二個污快源為呆為常見,通 過下

2、而一個例子便可認枳到PCR產楊污染的嚴重性。A 100ml的反應管中可產生10以桂貝 個分子，若將這些分子A個標準典林皿克游泳迪C50m25 m 2mJ內種祥后，0ml稀 誹液含冇400拷貝的廿增分孑，遠遠超過了 PCR護增反應檢測散個桂貝的圾限。因此，一 定要注意嚴楊戎紆厲缺的問題.對臨廉賣聆玄尤應如此。二. PCR污染的來涼對f HPV分世檢測忒和盒來說，污雜的來源主要是PCR獷增產揚的污殺.常見的污雜 涂役冇兩種'一是牝津膚話掾,疫噸氣與液體面岸擦肘就可形成氣洽膠，A椽作肘比較劇熱 地桂動反應管，開蓋肘.哌樣肘及受污染的迸.眸槍的反復吸擇都可形成氣諄膠而活染。據(jù)計 算一個徐膠潁粒

3、可含4800051 因而由其凌成的污染赴一個值得特別重視的問題。二是PCR*楊的粘帶話無，此類污雜多是因為沒冇嚴烙連守分區(qū)規(guī)定.侵成PCR產腸廿散刊 擇島抽提戎PCR賣瞼玄。賣瞼丸衣.手套.移液槍.槍頭.槍頭盒和洪管架都是常見的粘 費污雜源。活雜發(fā)生時，這些地方是重點懷融的地方。三、PCR污染的追廉如果不恒發(fā)生丸*懷疑有丙快發(fā)生.可以沒計一個簡單的小實驗以確認污染源。用HPV的PCR護增糸統(tǒng)護熠如下棋核：A：水作為陰性對腮，如系此管廿增出陽性，則可以判岌為試!己經污染戎者是諭膠 污染。B:陽性樣品作為陽性對腮，瞼證賣驗是否成功。GX:所要檢卷的地方，用無苗水浚泡過的滅苗櫛筌擦拭可融污染源，0.

4、1ml去離子水 淡泡居作為按板。常見的謂要檢杳的地方為各個賣瞼臺面.移液槍.槍頭.槍頭盒.式管標. 冰錯內.冰錯把手.水浴鍋.軸提的相關比剖以及相關人員的辦公桌。如果經過上述追球賣殮.仍不能杏找列確切污殺源，則污快可能是由杳中PCR產物 的氣諄膠凌成的，此肘就應該靈換賣瞼場所，若條件不允許.可以卷圭內加裝緊外燈管昭射 過夜且徹底通風并停止幾天的賣瞼。叫 PCR汚鎌的預陸迸.行PCR #作肘.攧作人員應該產烙連守一些撫作規(guī)程，釆大程度地陣低可能出現(xiàn)的 PCR丙染或社絕活染的出觀。1劃分撫作區(qū)：實瞼操作在三個不同的區(qū)城內進行，PCR的的處理和后氏理要農不同的隔 青區(qū)內進行.呆晟本的一個慮刪就旻PC

5、R護增及雜交檢測區(qū)的奈西是為于污染源，絕對不 可以帶到祈而個區(qū)去。A：樣島制備區(qū).色楊護增撰板的制備;B： PCR加樣區(qū).包括反應液的配制和PCR護增；C： PCR護增及雜交檢測區(qū)雜交操作過程心這個地方兜成。分區(qū)的注克爭頊：冬工作區(qū)要有一定的隔窗.操作樂材專用，要冇一定的方向性。如：標本制備一PCR護 增產分析產場處理。樣芫的保存應孩亦上述工個區(qū)以外單獨的區(qū)威。各個區(qū)城的腸品及衣服必須嚴格運守單向的慮則。各個區(qū)城必須要1乙單獨的實瞼農.實瞼對必須嶽上手套。每個區(qū)城要冇勺己單獨的實瞼設備。以下是常見的分區(qū)方丸：PCR擴 増及朵 交檢測 區(qū)tPCR加樣 區(qū)I樣品制備區(qū)1緩沖間t緩沖間緩沖間-VVP

6、CR擴増及雜交檢測區(qū)1緩沖間樣品制備及PCR加樣區(qū)1緩沖間圖一圖二PCR擴増及 朵交檢測區(qū)樣品制備區(qū)、十走廊PCR加樣區(qū)圖四圖三2、賣瞼操作的注意事頊：A:就一次性手套，若不小心隴上反應液，立印靈換手套；B:使用一次性吸頭，嚴禁與PCR產楊分析圭的吸頭混用，吸頭不要長對間暴玄于空氣中， 避免氣滋膠的污殺；C:濺免及應液飛戒，幻開反應管肘為避免此種情況，開孟禰稍富心收集液體于管底。若不 小心滅到手套或桌面上，應立刻更換手套并用種酸掠拭桌面；D:操作射設立陰陽性對腮和空自對照，即可殮證PCR反應的可紊性，又可以協(xié)助判斷廿 增糸統(tǒng)的可信性；E:盡可能用可林換或可離莊處理的加樣森，由于加樣森呆汆易受廣

7、楊氣渝膚戎標本DNA的 厲染，呆好使用可辱換或爲莊戍理的加揮森。如沒有這種特球的加至*應絞常的擦洗 輪外表及槍管內。3、嚴格對PCR產楊的丈理：PCR產腸包扌舌雜交產楊，諡讀數(shù)結束后，雜交產腸農PCR產腸應該用一次性密訶彖森（竝 奴篆、勺封袋丿裝好后丟齊戎者側至1 mol/LHCI戀液或1:25的84請春液中，浚泡半小肘 以上后冉行丟棄。如果冇產場減在了桌面或樂具上，應立即用1 mol/LHCI戀液農1:25的 84詢春液擦拭。4、垠據(jù)實驗室伶況建立兜孚的四常PCR防治制度并產格執(zhí)行豐心人為，制度軌行了才能達到它應冇的效果，根據(jù)賣瞼室賓際恃況建立和度后必須嚴 烙軌行，絕對不能因為圖方便放松警惕

8、。五、PCR活染后的處理1. 如果是段具的污殺，可以對可疑"用lmol/L盤酸戎者1:25的84詭卷液擦拭農詵泡。 如果臺面丙染，可能的話用柴外燈照射過夜。2. 如栗赴戰(zhàn)劉河染請更換洪和.但忒刑活染一般伴隨舟森具污雜.務必冬找出污柴源并及 對處理。3. 對于彼污染的區(qū)域，黃好靈換賣瞼場所，可能的話應加裝茶外対感鉗過夜，丈右.不行也 處須加飛通鳳幾夭，幷停止實裱后檢測是召還有污搖。六.賣缺蠻賣例：1 w分區(qū)侑況：賣殮空分成兩個區(qū)，類彼圖二所承。因為條件所限，沒冇設.1.圾沖區(qū)，但而個區(qū)相隅較 遠，可以冇敗避免汽溶膠的傳樁。2、規(guī)章制度：A:建期蠱測：使用棉簽涂抹的方比.一個月一次定期監(jiān)

9、測.監(jiān)測地點為：越凈臺來而. 超凈臺內槍（包朽槍吸孔內和輪體人 超凈臺槍頭盒、超凈臺內常用PE管架及PCR管架， 冰箔冰柜把手（兩臺八冰錯內部（每個冰錯？個棉簽包扌舌冰箱內部表面和隨機的冰箔內忒 劑盒人 常用洪和試劉盒.式剖表而。抽堤桌而.軸提區(qū)槍（包據(jù)槍浹孔和槍體八 軸提區(qū)常 用試管架.抽靈區(qū)槍頭盒.水浴鍋水.謝水浴鍋氷.相關式瞼人員辦公圭來而.亂標.鍵盤。 需要做的工作：決弭指戈人員葺月進行一次蠱測。備次JL測燥寫麹豪表C見附表丿。B:暢澆：產格單向場流，只尢許從A區(qū)（擇品制備及PCR加樣區(qū)丿到B區(qū)CPCR護增及雜 交 樓測區(qū)丿的物呂流動。B區(qū)任何物呂（PCR管架、PE管需）進入A區(qū)詢必須

10、經過丈理（1:100丿 的84請春液諛逸半小對丿。冬區(qū)物芫單找使用.不允許交又使用。席要做的工作：A.輸 AB甫處理（84沒池斤洗滌）C:人澆：抽堤.PCR以及B區(qū)必須要冇單獨的賣瞼服，進入A. B両區(qū)進行賣絵必須穿上各 fl的賣聆服.不允許將賣瞼服哮刊另一個區(qū)。fix：如果遺入一個區(qū)不是為了賣絵，可以不 穿賣瞼服.但絕對不允許穿另一個區(qū)的實驗服遺入兒 實瞼服両周洗滌一次，但切記而個區(qū) 的衣服不要疫同一牝洗，分成両次洗，可以這周洗滌這個區(qū)的下周冼滌另一個區(qū)的。需要做笛工作：推走-厲輪一厲洗滌衣服.冬人f人負貴。D:余螯規(guī)穩(wěn)：1.實驗肘必須戴橡膚手套農薄強手套；軸提來面賣瞼完成后用84擦洗；PC

11、R 賣瞼泓每天（實瞼量少的話可減少丿阮上用緊外照射；如采在賣臉過程中發(fā)現(xiàn)有樣芫C包括 軸提詢和軸提居丿農PCR產揚必須立即用84擦洗；心B區(qū)如果手接融過來而戎者其它有 可能污殺有PCR產腸的地方（槍.Luminex儀丟等丿必須盡快洗手；走期處理：冬區(qū)槍每 周用1： 25的84蔭舂液擦洗（不需要拆開，主要是槍體和吸擇孔內丿。冬區(qū)洪管架每周用b 25的84請?zhí)┮翰料?。各桌而每周?： 25的84請春液擦洗。冰錯把手及外表每周用1： 25的84請拳液擦洗。水浴鍋及帰水浴鍋每周換一次水?？坳P工作人員辦公來毎周用1： 25 的84請春液擦洗務要做的工作：A、令絵（特射是雜交檢測丿，發(fā)現(xiàn)倉產暢減出立即集洗

12、。B為洗手。U PCRD、夬排描龍人員事眉榛洗指丈位覺。E. PCR余檢左做丸賣繪肝開烹?yún)`。E:PCR產輸處理：準務保埠袋，毎次的PCR產物（包楊雜交產楊和PCR產賜）丟齊祈必須用 保*扎好后再丟齊；雜交檢測試臉區(qū)準備可以裟保鮮篆并冇蓋子的竝及稲，使用過的槍頭 一律札好后丟棄；屯冰旁邊.的冰錯為PCR；*%臨肘存放區(qū)'產禁PCR產物開羞存放，定期 （一個月）請理。壽要做笛工作：A：產格操作.把PCR產輸作為高危險暢縣小心處理。B：指龍日朗請理PCR產輸。F：發(fā)生污拯斤的弦ja：如果懷硬有污染發(fā)生，執(zhí)行監(jiān)測程序.對于重點懷賤對象可以多作幾 份。找到污快源后來而一用84擦洗后柴外照射一個庇

13、上，槍一用84擦洗（拆開丿后米 外照射過夜，槍頭盒.洪管架一 8 4擦洗后柴外腮射過夜.槍頭一丟齊，忒劉一丟齊"衣楊 -用84沒泡后洗滌干凈。冰缶把手-84按冼后柴外照射過夜。冰箱內部-84擦洗如果污 染產重的話流水沖洗后84擦洗，式和盒-84擦洗或流水沖洗。處理兜后執(zhí)行蠱測程序松杳 污快侑況OPCR污染悄況蠱測表窩臉q期 式臉人員序號編號屯點試瞼結果備注1超凈臺桌面2超凈臺槍槍沒孔內和槍體3超凈臺槍頭盒4超凈臺內EP管襟及PCR管架5冰錯把手6冰柜杷手7冰錯內部18冰錯內部29冰錯常用試劉洪和盒10冰柜內部111冰柜內部112冰柜常用試劉洪和盒13PCR試褰面14柚提桌面15抽提區(qū)槍色楊槍吸孔和槍體16抽提區(qū)家用試管襟17抽提區(qū)槍頭盒18水浴鍋水19沸水浴鍋水20次臉人員1辦必盤來面21次瞼人員1亂標.鍵盤22次臉人員2辦公圭桌而23次臉人員2亂標.鍵盤24式臉人n 3辦4牡無而25式臉人員3氯標.鍵盤26式臉人員4辦4電無而27式臉人員4氯標.鍵盤28式臉人員5辦4墊無而29式臉人員5氯標.鍵盤30陽性對照31陰性對照試能方和 準備1.5 ml EP管.年管加入