浙大醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)真題2005-2011

1、2011年一、 名詞解釋（每題3分）：1、 Okazaki fragments2、 Trans-acting factor3、 Multiple-cloning site4、 Micro RNA5、 Chaperone二、 簡答題（每題5分）1、 簡述蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)；2、 真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄的主要調(diào)控點(diǎn)有哪些？3、 表觀遺傳學(xué)機(jī)制如何調(diào)控染色體4、 簡述真核細(xì)胞中RNA聚合酶的類型及功能；5、 真核生物RNA的類型；6、 什么是基因突變？真核細(xì)胞基因突變的主要類型？7、 什么是組學(xué)？常有的組學(xué)技術(shù)有哪些？8、 簡述兔源多克隆抗體的制備過程；9、 研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的方法有哪些？三、 問

2、答題（每題10分）：1、 什么是蛋白質(zhì)修飾？細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)修飾主要類型有哪些？其主要功能是什么？2、 大規(guī)模臨床證據(jù)顯示非受體酪氨酸磷酸酶在乳腺腫瘤轉(zhuǎn)移灶組織中高表達(dá)。請設(shè)計一個實(shí)驗研究方案在細(xì)胞水平探討該蛋白在腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移過程中的可能作用。3、 什么是模式生物？為什么醫(yī)學(xué)研究中需要模式生物？4、 結(jié)合你的實(shí)際經(jīng)歷和知識背景，談?wù)劮肿由飳W(xué)在醫(yī)學(xué)中的作用。 2010年一、 名詞解釋（每題3分）：1、基因與基因組：2、基因診斷：3、半保留復(fù)制：4、疾病模型與模式：5、ncRNA：二、簡答題：1、為什么個體基因型可以用于健康風(fēng)險預(yù)測？2、蛋白質(zhì)哪些理化性質(zhì)可以用于檢測和鑒定？3、蛋白質(zhì)非共價鍵作用

3、包括？蛋白質(zhì)相互作用機(jī)制？4、細(xì)胞死亡的方式？5、肝細(xì)胞對醫(yī)學(xué)的作用？6、基因轉(zhuǎn)錄、翻譯和基因表達(dá)的區(qū)別？7、DNA損傷類型、檢測方式？8、蛋白質(zhì)為什么能夠細(xì)胞定位？怎樣檢測蛋白質(zhì)定位？9、為什么同一個體的細(xì)胞基因組相同，蛋白質(zhì)組不同？怎樣檢測蛋白質(zhì)組差異？三、問答題：1、談?wù)勣D(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的定義? 你對轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究有何建議？2、表觀遺傳機(jī)制？如何研究？有何意義？3、設(shè)計一個實(shí)驗說明信號傳導(dǎo)的過程？（研究信號通路，信號從細(xì)胞外傳至細(xì)胞內(nèi)，往往是形成一個復(fù)合物，從而引起效應(yīng)，請你設(shè)計一個方法，了解整個信號通路的傳遞過程）4、端粒和端粒酶為何能獲諾貝爾醫(yī)學(xué)獎？2009年一、名詞解釋1、種系分析法（系譜分

4、析）：2、癌基因和抑癌基因：3、順式作用元件和反式作用因子：4、表觀遺傳學(xué)（遺傳表觀學(xué)性狀）：5、基因表達(dá)：二、簡答1、 試述基因、基因組，蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)組。2、 舉例說明蛋白質(zhì)之間相互作用的研究方法有哪些？3、 什么是基因表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制？（基因表達(dá)的主要過程及調(diào)控的主要位點(diǎn)？）4、 設(shè)計一個實(shí)驗以證明DNA是遺傳物質(zhì)。5、 基因操作中的常用工具有哪些？6、 舉例說明蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。7、 蛋白質(zhì)翻譯后加工的內(nèi)容？8、 單核苷酸多態(tài)性？9、 基因突變及生物學(xué)意義？10、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與疾病的關(guān)系？三、問答題：1、 有一個蛋白X，發(fā)現(xiàn)其在血管內(nèi)皮細(xì)胞中與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路A有密切聯(lián)系，如何證明在此

5、細(xì)胞中與蛋白X相互作用的蛋白。2、 HGP已完成，談?wù)勀銓ζ浜罄m(xù)計劃的認(rèn)識。3、 根據(jù)國內(nèi)外進(jìn)展，說明分子生物學(xué)與醫(yī)學(xué)的關(guān)系.4、 結(jié)合環(huán)境污染，舉例說明環(huán)境污染與基因的關(guān)系說明疾病的發(fā)生機(jī)制？5、某信號A與血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)蛋白B可發(fā)生信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，設(shè)計一個實(shí)驗說明細(xì)胞內(nèi)蛋白B發(fā)生相互作用的蛋白？2008年（1）一、名詞解釋1、核糖開關(guān)：2、反式作用因子：3、質(zhì)粒：4、鋅指結(jié)構(gòu)：5、分子雜交基因組：6、hnRNA ：7、cDNA ：8、密碼的簡并性：9、信號肽：二、簡答題（30分）：1、什么是乳糖操縱子，簡述乳糖操縱子的正負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制？2、簡述原核和真核細(xì)胞在核酸翻譯成蛋白質(zhì)的過程中的異同點(diǎn)？3、質(zhì)粒

6、的不相容性和相容性指的是什么？其分子基礎(chǔ)機(jī)制是什么？4、核酸凝膠電泳的基本原理和方法是什么？5談?wù)勀愕拇T士論文的基本內(nèi)容，研究方法和結(jié)果，有什么收獲，打算你的博士生涯如何度過？三、問答題（40分）：1、簡述3種由PCR技術(shù)衍生出來的技術(shù)及其應(yīng)用？2、試述一條反向遺傳克隆功能基因的途徑。（同下）3、近年來有些什么分子生物學(xué)研究的成果應(yīng)用到實(shí)際應(yīng)用當(dāng)中？4、闡述一種細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的途徑（從接受信號到調(diào)控基因表達(dá)）。5、給你一個cDNA序列,你如何表達(dá),純化得到所需要的目的蛋白質(zhì)？ 2008年（2）一、名詞解釋1、蛋白質(zhì)的超二級結(jié)構(gòu)：2、核酸分子雜交：3、基因組：4、操縱子：5、反式作用元件：6、小衛(wèi)

7、星DNA：7、基因表達(dá)：8、逆轉(zhuǎn)錄：9、管家基因：10、信號肽：11、基因打靶：12、基因治療：二、論述題1、DNA的復(fù)制過程的基本特點(diǎn)和要點(diǎn)。2、G-蛋白信號介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。3、DNA損傷可以分為哪幾類？相應(yīng)的修復(fù)機(jī)制是什么？ 4、蛋白質(zhì)組的概念及其研究意義。2007年一、名詞解釋 1、質(zhì)粒：2、密碼的簡并性：3、信號肽：4、反式作用子：5、基因組：6、hnRNA：7、cDNA：8、結(jié)構(gòu)域：9、EMSA：10、轉(zhuǎn)座子：二、簡答題：1、何謂乳糖操縱子，以乳酸操縱子為例說明基因表達(dá)與阻遏？2、核酸凝膠電泳的基本原理和方法是什么？ （同前）3、簡述原核和真核細(xì)胞在核酸翻譯成蛋白質(zhì)的過程中的異同

8、點(diǎn)？（同前）4、DNA克隆的篩選方法及原理。5、何謂質(zhì)粒的不相容性和相容性？其分子基礎(chǔ)機(jī)制是什么？（同前）三、問答題：1、試述一條反向遺傳克隆功能基因的途徑。（同前）2、假定事先給你一個cDNA序列，你如何表達(dá)、純化得到目的蛋白質(zhì)？3、闡述一種細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的途徑（從接受信號到調(diào)控基因表達(dá)）（同前）4、ELISA方法的基本原理，方法，及其種類？5、原核生物和真核生物基因結(jié)構(gòu)的差別有哪些？怎樣去用實(shí)驗證明呢？2006年一、名詞解釋：(25%) 1、RFLP：限制性片段長度多態(tài)性，是由DNA變異(產(chǎn)生新的酶切位點(diǎn)或消除原有的酶切位點(diǎn))導(dǎo)致在限制性核酸內(nèi)切酶酶切時產(chǎn)生不同的長度片段。可借助Southe

9、rn Blotting或PCR的方法進(jìn)行檢測。 2、SSR：簡章序列重復(fù)多態(tài)性，引物是根據(jù)微衛(wèi)星DNA重復(fù)序列兩翼的特定短序列設(shè)計，用來擴(kuò)增重復(fù)序列本身。由于重復(fù)的長度變化極大，所以是檢測多態(tài)性的一種有效方法。其特點(diǎn)包括：一般檢測到的是一個單一的多等位基因位點(diǎn)，共顯性遺傳，故可鑒別雜合子與純合子；得到的結(jié)果重復(fù)性很高。 3、EST：表達(dá)序列標(biāo)簽，是指從不同的組織構(gòu)建的cDNA文庫中，隨機(jī)挑選不同的克隆，進(jìn)行克隆的部分測序所產(chǎn)生的cDNA序列。隨著高通量測序技術(shù)的進(jìn)步，使人們越來越相信，大規(guī)模地產(chǎn)生EST，結(jié)合生物信息學(xué)的手段，將為人們提供一種快速有效的發(fā)現(xiàn)新基因的方法。 4、STS：序列標(biāo)簽位

10、點(diǎn)，是由特定引物序列所界定的一類標(biāo)記的統(tǒng)稱，短的在基因組上是可以被唯一操作的序列，因而可以確定在物理圖譜上的特定位置。 5、CAP：CAP即分解代謝物基因活化蛋白，是一種激活蛋白，因為細(xì)菌的許多啟動子為弱啟動子，本身與RNA聚合酶的作用較弱，在有CAP蛋白這類激活蛋白存在下，可使RNA聚合酶與啟動子的親和力增強(qiáng)，CAP蛋白的活性強(qiáng)烈依賴cAMP。6、AFLP：擴(kuò)增片段長度多態(tài)性，其特點(diǎn)是把RFLP和PCR結(jié)合了起來。其基本步驟是：把DNA進(jìn)行限制性內(nèi)切酶酶切，然后選擇特定的片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增(在所有的限制性片段兩端加上帶有特定序列的“接頭”，用與接頭互補(bǔ)的3端有幾個隨機(jī)選擇的核苷酸的引物進(jìn)行特

11、異PCR擴(kuò)增，只有那些與3端嚴(yán)格配對的片段才能得到擴(kuò)增)，再在有高分辨力的測序膠上分開這些擴(kuò)增產(chǎn)物，用放射性法、熒光法或銀染染色法均可檢測之。 7、SNP：單核苷酸多態(tài)性，是一種較為新型的分子標(biāo)記，其依據(jù)的是一位點(diǎn)的不同等位基因之間常常只有一個或幾個核苷酸的差異，因此在分子水平上對單個核苷酸的差異進(jìn)行檢測是很有意義的。 8、FISH：熒光原位雜交技術(shù)，是一種利用非放射性的熒光信號對原位雜交樣本進(jìn)行檢測的技術(shù)。它將熒光信號的高靈敏度、安全性，熒光信號的直觀性和原位雜交的高準(zhǔn)確性結(jié)合起來，通過熒光標(biāo)記的DNA探針與待測樣本的DNA進(jìn)行原位雜交，在熒光顯微鏡下對熒光信號進(jìn)行辨別和計數(shù)，從而對染色體或

12、基因異常的細(xì)胞、組織樣本進(jìn)行檢測和診斷，為各種基因相關(guān)疾病的分型、預(yù)前和預(yù)后提供準(zhǔn)確的依據(jù)。9、Genome：基因組，有機(jī)體或細(xì)胞中的所有DNA，包括核中的染色體和線粒體中的DNA。 10、RNA in situ hybridization：RNA原位雜交，是利用cDNA為探針來檢測與其互補(bǔ)的mRNA鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置，是檢測基因組織特性表達(dá)的常用方法。11、單克隆抗體：每個B淋巴細(xì)胞有合成一種抗體的遺傳基因。動物脾臟有上百萬種不同的B淋巴細(xì)胞系，含遺傳基因不同的B淋巴細(xì)胞合成不同的抗體。當(dāng)機(jī)體受抗原刺激時，抗原分子上的許多決定簇分別激活各個具有不同基因的B細(xì)胞。被激活的B細(xì)胞分裂

13、增殖形成該細(xì)胞的子孫，即克隆由許多個被激活B細(xì)胞的分裂增殖形成多克隆，并合成多種抗體。如果能選出一個制造一種專一抗體的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，就可得到由單細(xì)胞經(jīng)分裂增殖而形成細(xì)胞群，即單克隆。單克隆細(xì)胞將合成一種決定簇的抗體，稱為單克隆抗體。12、基因芯片：所謂基因芯片，是指將大量探針分子固定于支持物上，然后與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交，通過檢測雜交信號的強(qiáng)弱進(jìn)而判斷樣品中靶分子的數(shù)量。由于用該技術(shù)可以將極其大量的探針同時固定于支持物上，所以一次可以對大量的DNA分子或RNA分子進(jìn)行檢測分析，從而解決了傳統(tǒng)核酸印跡雜交，技術(shù)復(fù)雜、自動化程度低、檢測目的分子數(shù)量少、效率低等不足，而且，通過設(shè)計不同的探針陣列，用一

14、定的分析方法，還可以用于序列分析，稱作雜交測序。二、描述cDNA文庫構(gòu)建原理與方法（25%）：（1）cDNA獲得方法，（2）克隆方法，（3）文庫質(zhì)量定義。答： cDNA：以mRNA為模板，利用反轉(zhuǎn)錄酶合成與mRNA互補(bǔ)的DNA(complementary DNA，cDNA)，再復(fù)制成雙鏈cDNA片段，與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)入受菌體，擴(kuò)增為cDNA文庫(cDNA library)，然后再采用適當(dāng)方法從cDNA文庫中篩選出目的cDNA。與基因組DNA文庫類似，由總mRNA制作的cDNA文庫包括了細(xì)胞全部mRNA信息，自然也含有我們感興趣的編碼cDNA。當(dāng)前發(fā)現(xiàn)的大多數(shù)蛋白質(zhì)的編碼基因幾乎都是這樣分離的

15、。 （1） cDNA獲得方法：Total RNA的提取；mRNA的分離；cDNA雙鏈合成：Superscript IIRT合成第一鏈，cDNA第二鏈的合成，雙鏈cDNA末端補(bǔ)平，EcoR I adaptor 加接，雙鏈cDNA末端的磷酸化及Xho I酶切，膠回收cDNA。 （2）克隆方法：載體制備：p Blue Script II的提取，p Blue Script II的雙酶切消化，載體去磷酸化，載體效率檢測；cDNA雙鏈和載體的連接：連接，檢測（PCR方法）；電轉(zhuǎn)化：電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的制備，連接產(chǎn)物純化，電轉(zhuǎn)化；快速鑒定、菌落PCR p Blue Script cDNA文庫擴(kuò)增。 （3）文庫

16、質(zhì)量定義：評價一個文庫是否有實(shí)用價值主要在于文庫的含量和插入片段的大小兩個方面。所構(gòu)建的文庫中必須有足夠多的克隆數(shù)，這樣才能確?；蚪McDNA 中的每一個序列至少有一個拷貝存在于重組文庫中，為達(dá)到這一要求, 文庫的容量應(yīng)不小于1.7105 ，同時為保證cDNA片段的完整性，插入片段的平均大小應(yīng)不小于1kb。三、闡述基因突變的概念及引起突變的可能途徑(25%)：（1）化學(xué)誘變，（2）物理誘變，（3）T-DNA插入，（4）缺失、插入，（5）無義突變概念，（6）堿基修復(fù)概念 基因突變的特點(diǎn)。答：基因突變屬分子水平上的變異，是指染色體上個別基因所發(fā)生的分子結(jié)構(gòu)的變化，基因突變在自然界普遍存在。 基因突

17、變的方式很多，主要有：（1）化學(xué)誘變，基因突變可以由某些化學(xué)物質(zhì)所引起，這些化學(xué)物質(zhì)稱為化學(xué)誘變劑?，F(xiàn)已知很多的化學(xué)誘變劑，它們誘變的機(jī)制是不同的。在DNA復(fù)制過程由于堿基類似物的取代，堿基的化學(xué)修飾以及堿基的插入和缺失都會引起突變。（2）物理誘變，利用物理因素引起基因突變的稱物理誘變，如X射線、紫外線、電離輻射等。（3）T-DNA插入，改變讀碼或變成假基因。（4）移碼突變：基因中插入或者缺失一個或幾個堿基對，會使DNA的閱讀框架（讀碼框）發(fā)生改變，導(dǎo)致插入或缺失部位之后的所有密碼子都跟著發(fā)生變化，結(jié)果產(chǎn)生一種異常的多肽鏈。移碼突變誘發(fā)的原因是一些像吖啶類染料分子能插入DNA分子，使DNA復(fù)制

18、時發(fā)生差錯，導(dǎo)致移碼突變。（5）無義突變，由于一對或幾對堿基對的改變而使決定某一氨基酸的密碼子變成一個終止密碼子的基因突變。（6）堿基修復(fù)：DNA損傷的修復(fù)系統(tǒng)主要有以下幾個：損傷堿基的直接修復(fù)；切除修復(fù)，包括堿基切除修復(fù)、核苷酸切除修復(fù)和DNA交鏈的切除修復(fù)；錯配修復(fù)；重組修復(fù)，又稱復(fù)制后修復(fù)；跨損傷DNA合成，這是一種利用損傷核苷酸為模板，通過DNA聚合酶I使堿基摻入到復(fù)制終止處進(jìn)行DNA合成，從而延長DNA鏈的修復(fù)。基因突變的特點(diǎn)為： 第一，基因突變在生物界中是普遍存在的；第二，基因突變是隨機(jī)發(fā)生的；第三，在自然狀態(tài)下，對一種生物來說，基因突變的概率是很低的；第四，大多數(shù)基因突變對生物體是有害的，由于任何一種生物都是長期進(jìn)化過程的產(chǎn)物，它們與環(huán)境條件已經(jīng)取得了高度的協(xié)調(diào)；第五，基因突變是不定向的。 四、闡述一條反向遺傳克隆功能基因的途徑(25%)答：反向遺傳學(xué)是相對于經(jīng)典遺傳學(xué)而言的。經(jīng)典遺傳學(xué)是從生物的性狀、表型到遺傳物質(zhì)來研究生命的發(fā)生與發(fā)展規(guī)律。反向遺傳學(xué)則是在獲得生物體基因組全部序列的基礎(chǔ)上，通過對靶基因進(jìn)行必要的加工和修飾，如