馬鈴薯論文馬鈴薯CBF3基因抗氧化酶低溫脅迫光合特性

1、馬鈴薯論文：轉(zhuǎn)CBF3基因馬鈴薯提高抗冷性的研究【中文摘要】低溫對植物造成的傷害，表現(xiàn)為膜的損傷，活性氧和 自由基含量增加以與一些滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的積累等。這些現(xiàn)象的出現(xiàn)主要是由于低溫對植物細胞膜系統(tǒng)的傷害，導(dǎo)致參與生命活動的各種酶 的結(jié)構(gòu)被破壞，活性降低,從而使細胞的代謝系統(tǒng)紊亂。植物光系統(tǒng)對 低溫脅迫非常敏感，在低溫逆境條件下活性氧的大量積累，導(dǎo)致光合 機構(gòu)因受氧化脅迫而受損傷，光化學(xué)效率下降，同時催化光合暗反響 的酶活性也因?qū)Φ蜏孛舾卸档停罱K表現(xiàn)為光合速率的下降。本研 究以擬南芥 CBF3(CRT/DRE binding factor 3) 基因為基因，應(yīng)用農(nóng)桿 菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化法將35SC

2、BF痔口 rd29ACBF3導(dǎo)入馬鈴薯(Solanum tuberosum L)魯引1號塊莖,實現(xiàn)其在馬鈴薯中過量表達得到轉(zhuǎn)基因 植株,對其進展了分子生物學(xué)的驗證與光合生理指標(biāo)的測定，研究轉(zhuǎn)AtCBF3基因馬鈴薯對低溫的抗性機理。主要結(jié)果如下:(1)短期與長期低溫處理均導(dǎo)致馬鈴薯葉片光合速率，光合羧化效率，表觀量子效 率的下降。轉(zhuǎn)CBF3基因馬鈴薯葉片降低幅度低于野生型馬鈴薯，誘導(dǎo) 型啟動子植株葉片低于組成型啟動子植株。(2)低溫處理過程中，轉(zhuǎn) CBF3基因馬鈴薯的最大光化學(xué)效率 【英文摘要】Lowtemperature maycause damageswhich in elude many

3、aspects such as the cha nge of the membra ne lipids phase, the accumulati on of some sec on dary metabolites, the level of reactive oxyge n species and so on. All these phe nomena result from the damages of some en zymes which were invo Ived in the metabolism of pla nts cells. Photo systems are also

4、 very sensitive to low temperature stress, under the low temperature stress Reactive Oxygen Species (ROS) accumulates a great deal, which results in photo apparatus bein 【關(guān)鍵詞】馬鈴薯CBF3基因抗氧化酶低溫脅迫光合特性【英文關(guān)鍵詞】CBF3 pla nt cold-tolera nee photochemical activity potato【索購全文】聯(lián)系固Q1: 138113721囚Q2: 139938848同時提供

5、論文寫作一對一輔導(dǎo)和論文發(fā)表服務(wù).保過包發(fā)【目錄】轉(zhuǎn)CBF3基因馬鈴薯提高抗冷性的研究符號說明4-8 中文摘要 8-10 英文摘要10-111前言12-261.1植物對低溫的應(yīng)答抗氧化系統(tǒng)對低溫逆境的響應(yīng)13-141.1.2 植物細胞應(yīng)對低溫脅迫的滲透調(diào)節(jié) 植物光合機構(gòu)對低溫脅迫的響應(yīng)15低溫應(yīng)答的基因調(diào)控15-171.2 有關(guān)CBF基因家族17-221.2.1 植物CBF基因家族的發(fā)現(xiàn)17-181.2.2 植物CBF的序列特征 18-191.2.3 CBF轉(zhuǎn)錄因子對COR基因的表達調(diào)控植物CBF冷應(yīng)答通路20-221.3啟動子的類型22-241.3.1 組成型啟動子221.3.2 誘導(dǎo)型啟動

6、子 22-231.3.3 組織特異型啟動子23-241.4研究目的與存在的問題 24-262材料與方法26-392.1實驗材料與處理 262.1.1 實驗材料 26 菌株與質(zhì)粒26酶和生化試劑262.1.4 PCR引物262.2 實驗方法 26-302.2.1 總 RNA的提取 PCR擴增28連接反響28-292.2.4 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備29轉(zhuǎn)化與克隆篩選29堿法小量提取質(zhì)粒質(zhì)粒DNA的酶切鑒定302.2.8 回收302.3原核表達載體的構(gòu)建獲得目的基因302.3.2 構(gòu)建重組表達載體30-312.3.3大腸桿菌BL21原核表達的誘導(dǎo)31 聚丙烯酰胺凝膠電泳 重 組蛋白的純化原核表達馬

7、鈴薯CBF3重組蛋白抗體制備332.4蛋白雜交分析植物總蛋白的提取33聚丙烯酰胺凝膠電泳 33半干法蛋白轉(zhuǎn)移33-342.4.4 封閉與雜交34顯色反響342.4.6 尿素-SDS-PAGE342.5農(nóng)桿菌介導(dǎo)的馬鈴薯轉(zhuǎn)化34-362.5.1 侵染用根癌農(nóng)桿菌的制備 馬鈴薯轉(zhuǎn)化、再生體系的建立35培養(yǎng)基配方35馬鈴薯的栽培與繁種35轉(zhuǎn)基因馬鈴薯的鑒定 35-362.6生理指標(biāo)的測定光合速率的測定調(diào)制式熒光儀熒光參數(shù)的測定37快速葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)曲線的測定37 丙二醛含量和相對電導(dǎo)率的測定 37 抗氧化酶 活性測定37 葉片中葉綠素含量變化測定 37-38 2.7統(tǒng) 計分析38-393結(jié)果與分析3

8、9-603.1馬鈴薯CBF3基因原核表達原核表達載體的構(gòu)建 39重組蛋白的表達與誘導(dǎo)條件的優(yōu)化 39-403.1.3 pET30a-CBF3重組蛋白的親和純化與抗體的制備40-413.2馬鈴薯轉(zhuǎn)化與分子鑒定41-43馬鈴薯轉(zhuǎn)化41轉(zhuǎn)基因植株的分子鑒定41-433.3短期低溫處理條件下轉(zhuǎn)基因植株的生理指標(biāo)測定43-54轉(zhuǎn)CBF3基因馬鈴薯外部形態(tài)的變化43-45低溫處理條件下轉(zhuǎn)CBF3基因馬鈴薯葉片光合速率的變化低溫處理對PSH相關(guān)參數(shù)的影響46-503.3.4 低溫處理對MDA含量和電導(dǎo)率的影響50-51低溫處理對AtCBF3轉(zhuǎn)基因馬鈴薯的活性氧水平的影響51低溫處理對轉(zhuǎn)CBF3基因馬鈴薯抗氧化酶活性的影響低溫處理對轉(zhuǎn)CBF3基因馬鈴薯卡爾文循環(huán)關(guān)鍵酶活性的影響低溫脅迫對煙草葉片脯氨酸和可溶性糖含量的影響543.4長期低溫處理條件下轉(zhuǎn)基因植株的生理指標(biāo)測定低溫處理條件下轉(zhuǎn)CBF3基因馬鈴薯葉片光合速率的變化 54-563.4.2 低溫處理對Fv/Fm