小鼠的基本技能操作

1、山西醫(yī)科大學晉祠學院教案 No講授內容注解小鼠的基本技能操作目的：熟悉常用動物的基本知識掌握小鼠的捉拿、給藥、處死等基本技能操作實驗動物是指根據實驗的需要,有目的、有計劃地進行人工飼養(yǎng)、繁殖及科學培育而成的動物;供科學研究、教學、生產、檢測等方面使用的實驗對象和材料。實驗動物必需具有明確的生物學特性和清楚的遺傳背景，并且是在對其身上攜帶的微生物 、寄生蟲嚴格控制下培育和馴化出來的。實驗動物按遺傳學分類有：（1）近交系實驗動物：經至少連續(xù)20代的全同胞兄妹交配培育而成，品系內所有個體都可追溯到起源于第20代或以后代數的一對共同祖先，亦稱純系動物。（2）封閉群動物：以非近親交配方式進行繁殖生產的一

2、個實驗動物種群，在不從其外部引入新個體的條件下，至少連續(xù)繁殖4代以上，封閉群亦稱遠交群；（3）雜交群：由不同品系或種群之間雜交產生的后代，通常指雜交一代動物（F1代）。按微生物控制程度分級有： 一級，普通動物； 二級，清潔級動物； 三級，無特定病原體動物，即SPF動物； 四級，無菌動物，即GF動物。 此外，研究性實驗還經常使用轉基因動物（通過實驗手將新的遺傳物質導入到近交系動物胚細胞中，并能穩(wěn)定遺傳，由此獲得的動物）為實驗對象或材料。有時我們也用一些野生動物、家畜、家禽和魚類進行實驗。但由于它們或因遺傳背景不清楚，或因其健康狀況有差異，對刺激的敏感性不同、機體反應也不一致，造成實驗結果重復性較

3、差，實驗結果可靠性也相對較差，因此不能被國際會議的認可，它們只能被稱為實驗用動物。實驗用動物不能與實驗動物等同，實驗動物可包括在實驗用動物中，但在不十分嚴格的情況下，有時這二名詞又互相通用 。 一、實驗動物的種類和特性(1) 蟾蜍與蛙 蟾蜍與蛙屬于兩棲綱，無尾目類，變溫動物。易飼養(yǎng)和捕捉，一般是野外捕捉后直接供實驗室使用。也可短期飼養(yǎng)于潮濕地方，幾天可以不食或喂以草和昆蟲等。因蟾蜍和蛙的一些基本的生命活動與恒溫動物相似，而且離體組織器官所需的生活條件比較簡單，容易控制和掌握，因此被廣泛用于生理學科研和教學中。用蟾蜍（蛙）腓腸肌和坐骨神經可觀察外周神經及其肌肉的功能，研究興奮性、興奮、興奮的傳導

4、和傳遞、肌肉的收縮等基本生理現象。蟾蜍（蛙）離體心臟可用于研究心臟的生理功能。利用蟾蜍（蛙）的整體實驗可進行脊休克、脊髓反射、反射弧、微循環(huán)等研究。蟾蜍還可用于生殖生理、藥理學、胚胎發(fā)育、免疫學等的研究。(2) 家兔哺乳綱，嚙齒目，兔科。家兔品種很多，常用的有青紫蘭兔：體質強壯，適應性強，易于飼養(yǎng)，生長快；中國本地兔（白家兔）：抵抗力不如青紫蘭兔；新西蘭白兔是近年引進的大型優(yōu)良品種，成熟體重可達44.5kg；大耳白兔：耳朵長而大，血管清晰，皮膚白色，但抵抗力較差；家兔性情溫順，灌胃、取血方便；由于兔耳緣靜脈淺表，易暴露，是靜脈給藥的最佳部位；兔的減壓神經在頸部與迷走神經、交感神經分開而單獨成為

5、一束，常用于心血管反射活動、呼吸運動調節(jié)、泌尿功能調節(jié)的研究；兔的消化道運動活躍，典型可用于消化道運動及平滑肌特性的研究。兔的大腦皮層運動區(qū)機能定位已具有一定的雛形，因此兔也常用于大腦皮層功能定位和去大腦僵直、神經放電活動等實驗。此外，家兔還用于免疫學、藥理學、毒理學、生殖生理學、眼科以及臨床疾病的研究。(3) 小白鼠 哺乳綱，嚙齒目，鼠科。體型較小，成熟早，繁殖力強，小鼠性情溫順，易于捕捉，操作方便。小鼠實驗研究資料豐富、參考對比性強；其實驗結果的科學性、可靠性和重復性高，被廣泛用于各類科研實驗中，如用于生理學小腦功能障礙等實驗；藥理學、腫瘤學、遺傳學、免疫學以及臨床疾病的實驗研究。(4)

6、大白鼠 哺乳綱，嚙齒目，鼠科。性情不如小白鼠溫順，受驚嚇或捕捉方法粗暴時，表現兇暴，易咬人。但具有小白鼠其它優(yōu)點，因此也用途廣泛。大鼠離體器官可進行大鼠離體靜態(tài)肺順應性實驗；整體可用于胃酸分泌、胃排空、垂體、腎上腺系統(tǒng)的研究。大鼠還用于生殖生理、胚胎學、營養(yǎng)學、藥理學、毒理學、腫瘤學以及遺傳學的實驗研究。大鼠大腦各部的生理功能立體定位已相當成熟和標準化，是研究中樞神經系統(tǒng)的極好材料。 (5)豚鼠 哺乳綱，嚙齒目，豚鼠科，又稱荷蘭豬。豚鼠耳蝸管發(fā)達，聽覺靈敏，在生理學上，用于耳蝸微音器電位的實驗，也用于臨床聽力的實驗研究。除此之外，還用于離體心臟及腸、子宮平滑肌實驗，其乳頭肌和心房肌常用于心肌細

7、胞電生理特性及動作電位的實驗，也用于傳染病、變態(tài)反應、維生素C缺乏等實驗研究。二、 實驗動物的選擇原則1、盡量選擇與人體結構、機能、代謝及疾病特征相似的動物2、選用的實驗動物的解剖、生理特點應符合實驗目的；3、根據人與實驗動物對同一刺激的反應差異，選用具有明顯反應的動物；4、 根據生物醫(yī)學研究必須達到的精確度，選用結構功能簡單又能反映研究指標的動物；5、選用患有人類類似疾病的近交系或突變系動物；6、選用與實驗設計、技術條件、實驗方法等相適應的標準化動物；7、在不影響實驗目的與結果的前提下，選擇最易獲得、最經濟、便于操作管理的動物；三、實驗動物的性別鑒別實驗常用的動物中，較大的動物(如家兔、貓、

8、犬等)可以從生殖器分辨其性別，而較小的動物(如小白鼠、大白鼠、豚鼠等)的性別鑒別，通常以肛門與生殖孔之間的距離來判斷，距離近者為雌性，距離遠者為雄性。四、實驗動物的編號方法動物實驗中，常用的編號標記有染色法、掛牌法、烙印法等3種方法。1. 染色法 染色法是用有色化學試劑在動物身體明顯處如被毛、四肢等不同部位處進行涂染或用不同顏色來區(qū)別各組動物，是實驗中最常用、最容易掌握的方法。使用的編號標記液有如下幾種：3-5的苦味酸溶液(涂染黃色)，2硝酸銀溶液(涂染咖啡色)，0.5中性紅或品紅溶液(涂染紅色)。編號原則是先左后右，從前到后。一般把涂在左前腿上的記為1號，左側腹部記為2號，左后腿記為3號，頭

9、頂部記為4號，腰背部記為5號，尾基部記為6號，右前腿上的記為7號，右側腰部記為8號，右后腿記為9號。若動物編號超過10或更大數字，可使用上述兩種不同顏色的溶液，即把一種顏色作為個位數，另一種顏色作為十位數，這種交互使用可編到99號。例如把紅色記為十位數，黃色記為個位數，那么，右后腿黃色，頭頂紅色，則表示是49號，其余類推。2. 掛牌法 掛牌法是將標有編號的金屬制號碼牌固定在實驗動物的耳部皮膚上，大動物可掛在頸上或籠箱上。3. 烙印法 烙印法是用刺數鉗在動物無體毛或明顯部位(如耳、面鼻部和四肢等部位)刺上編號，然后用棉簽蘸著溶有乙醇的黑墨汁在編號上涂抹。烙印前，最好對烙印部位預先用75乙醇消毒，

10、以免造成皮膚局部感染。五、小鼠的捉拿、給藥方法及處死 1、捉拿：可采取雙手法和單手法兩種形式。雙手法：右手提起鼠尾，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上，向后方輕拉，小白鼠則將前肢固定于粗糙面上。此時迅速用左手拇指和食指捏住小白鼠頸背部皮膚(圖1)，并以小指與手掌尺側夾持其尾根部，固定于手中。單手法：小白鼠置于籠蓋上，先用左手食指與拇指抓住鼠尾，手掌尺側及小指夾住尾根部，然后用左手拇指與食指捏住頸部皮膚。 2、給藥方法（1）、灌胃(po)：小白鼠一般由一人操作，左手捏持小白鼠頭、頸、背部皮膚，使動物腹部朝向術者，右手將連接注射器的灌胃針由口角處插入口腔，用灌胃針將動物頭部稍向背側壓迫，使口腔與食管成一直線

11、，將灌胃針沿上顎壁輕輕插入食道，小白鼠一般用3 cm。插管時應注意動物反應，如插入順利，動物安靜，呼吸正常，可注入藥物；如動物劇烈掙扎或插入有阻力，應拔出灌胃針重插，如將藥物灌入氣管，可致動物立即死亡。常用灌胃量為0.10.2 ml/10g。（2）、皮下注射(ih)： 皮下注射是將藥物注射于皮膚與肌肉之間。實驗動物皮下注射一般應由兩人操作，熟練者也可一人完成。由助手將動物固定，術者用左手捏起皮膚，形成皮膚皺褶，右手持注射器刺入皺褶皮下，將針頭輕輕左右擺動，如擺動容易，表示確已刺入皮下，再輕輕抽吸注射器，確定沒有刺入血管后，將藥物注入。拔出針頭后應輕輕按壓針刺部位，以防藥液漏出，并可促進藥物吸收

12、。注藥量一般為0.10.2 ml/10g。 （3）、肌肉注射(im)：一人抓住小鼠頭部皮膚和尾巴，另一人持連4號針頭的注射器，將針頭刺入后腿外側肌肉。注射量一般不超過0.10.2 ml/只。 （4）、靜脈注射(iv)：尾靜脈注射主要用于大鼠和小鼠。鼠尾靜脈有3根，兩側及背側各1根，左、右兩側尾靜脈較易固定，應優(yōu)先選擇。注射時，先將鼠固定在鼠筒內或扣在燒杯中，露出尾部組織，用4550溫水浸泡鼠尾12min或用75乙醇溶液反復擦拭，以達到消毒、擴張血管和軟化表皮角質的目的。選擇尾靜脈下13處，用細針頭沿血管方向平行、向心端進針。注意藥液推入靜脈時是否通暢，若阻力較大，注射部位皮下發(fā)白，表示針頭未刺

13、入靜脈內，應換部位重新注射；若推入藥液順利無阻，則表明己刺入靜脈內，應把針頭和鼠尾固定好，不要晃動，緩緩將藥液推入，注射完畢，用棉球在注射部位輕輕揉壓，使血液及藥液不致回流而漏。常用注射量為0.10.2 ml/10g。（5）、腹腔注射(ip) 腹腔吸收面積大，藥物吸收速度快，故腹腔注射適合于多種刺激性小的水溶性藥物的用藥，并且是嚙齒類動物常用給藥途徑之一。腹腔注射穿刺部位一般選在下腹部正中線兩側，該部位無重要器官。腹腔注射可由兩人完成，熟練者也可一人完成。助手固定動物，并使其腹部向上，術者將注射器針頭在選定部位刺入皮下，然后使針頭與皮膚成45角緩慢刺入腹腔，如針頭與腹內小腸接觸，一般小腸會自動

14、移開，故腹腔注射較為安全。刺入腹腔時，術者可有阻力突然減小的感覺，再回抽針栓，確定針頭未刺入小腸、膀胱或血管后，緩慢注入藥液。常用注射量為0.10.2 ml/10g。3、處死方法（1）、頸椎脫位法： 術者左手持鑷子或用拇指、食指固定小鼠頭后部，右手捏住鼠尾，用力向后上方牽拉，聽到鼠頸部喀擦聲即頸椎脫位，脊髓斷裂，鼠瞬間死亡。 （2）、打擊法：用手抓住鼠的尾并提起，朝地面用力撞擊鼠頭致死（也可用小木錘用力打擊鼠頭）。 （3）、吸入麻醉法：吸過量的乙醚。 （4）、大量放血法：可采用眼眶動、靜脈放血致死。（5）、空氣栓塞法：將空氣急速注入靜脈致死。小白鼠可注入空氣實驗動物選擇的注意事項由于動物對外界

15、刺激的反應存在個體差異，在選擇實驗動物時，還應注意動物的年齡、體重、性別、生理狀態(tài)、健康狀況及其品系、等級等因素對實驗的影響注意事項1、捉拿固定某一動物之前，要對該動物的習性有一定的了解。2、捉拿固定動物時須小心謹慎，大膽果斷，但切不可粗暴3、捉拿動物過程中要以規(guī)范性的方法抓取和固定動物，要避免因動作粗暴而造成動物的損傷。例如家兔這樣的動物，不能采用抓雙耳或抓提腹部的錯誤捉拿方法。4、抓取大鼠或小鼠尾部時動作要輕，防止拉斷鼠尾。不可提起動物玩耍!提起動物后，應迅速放在粗糙臺面上。5、捉拿動物過程中應防止被動物咬傷，若不慎被動物咬傷、抓傷。應及時用碘酒、乙醇消毒，隨后到有關醫(yī)療機構診治成年動物插管深度一般是：小鼠 3cm，大鼠5cm，家兔15cm，犬2