中藥及其制劑分析概論

1、第十五章 中藥及其制劑分析簡介學(xué)習(xí)目標1 掌握中藥制劑中待測成分的提純方法及常用的定量分析方法2 掌握中藥制劑分析的一般程序3 熟悉中藥制劑分析的特點及中藥指紋圖譜技術(shù)4 了解影響中藥制劑質(zhì)量的因素 第一節(jié) 概述中藥是以中醫(yī)藥學(xué)理論體系的術(shù)語表達其性味、功效和使用規(guī)律，并且按中醫(yī)藥學(xué)理論指導(dǎo)其臨床應(yīng)用的傳統(tǒng)藥物，中藥是祖國醫(yī)藥偉大寶庫中的重要組成部分，品種繁多，臨床應(yīng)用療效顯著，具有幾千年的歷史，是中華名族寶貴的醫(yī)藥遺產(chǎn)。中藥制劑是根據(jù)藥典、制劑規(guī)范和其它規(guī)定的處方，將中藥的原料藥物加工制成具有一定規(guī)格，可以直接用于防病、治病的藥品，故中藥制劑一般又稱為中成藥。千百年來，通過歷代醫(yī)藥學(xué)家的共同

2、努力，中藥制劑的品種日益增多，各種傳統(tǒng)劑型日趨完善，我國現(xiàn)有35大類、43種劑型共5000余種中成藥。為保證中藥制劑的用藥安全、合理、有效，必須對中藥制劑進行合理的質(zhì)量分析。中藥及其制劑分析是以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，應(yīng)用現(xiàn)代分析理論和方法，研究中藥制劑質(zhì)量的一門應(yīng)用學(xué)科。近年來，我國醫(yī)藥工作者將現(xiàn)代科研技術(shù)和手段，應(yīng)用到傳統(tǒng)中藥的有效成分、藥理、制劑和質(zhì)量控制等方面，使得中藥制劑在品種、產(chǎn)量、生產(chǎn)規(guī)模、新產(chǎn)品的研制方面有了很大的發(fā)展。一、中藥制劑分析的特點 中藥作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)是其中的化學(xué)成分，特別是中藥復(fù)方制劑含有眾多的化學(xué)成分，作用十分復(fù)雜，分析難度較大，因此，中藥制劑分析與化學(xué)藥物制劑分析

3、相比，具有下列幾個特點：1、中藥制劑中化學(xué)成分的復(fù)雜性和有效成分的難確定性 中藥藥效的發(fā)揮是多種成分協(xié)同作用的結(jié)果，因此應(yīng)從整體上來控制中藥的質(zhì)量。中醫(yī)臨床用藥一般由幾味或幾十味組成的復(fù)方，單味藥材本身就是一個復(fù)雜的混合物，復(fù)方制劑所含的化學(xué)成分就更復(fù)雜，中藥制劑中產(chǎn)生的療效是多種化學(xué)成分的協(xié)同作用，有產(chǎn)生治療作用的有效成分，也有目前認為無生物活性的無效成分；有有機成分，也有無機成分，而且，中藥材中有效成分與無效成分的概念也是相對的，某一化學(xué)成分在一種藥材中為有效成分，在另一種藥材中就也可能是無效成分。所以，對于中藥制劑的研究，很難用12中成分作為療效指標成分，因此，對于中藥制劑的質(zhì)量分析應(yīng)當

4、綜合考慮。2、中藥制劑組方的原則性和規(guī)律性 中藥制劑是嚴格按照中醫(yī)理論和用藥原則而組方的，各味藥材在處方中地位不同，有君、臣、佐、使之分，進行質(zhì)量分析時，首先進行組方分析，通過組方分析首選君藥、貴重藥及劇毒藥建立分析方法。當君藥無明顯特征或有效成分不明確而難以分析時，才可考慮分析臣藥及其他藥。其次，對毒藥、劇藥成分進行檢測，以達到臨床用藥安全可靠，目前，多根據(jù)制劑中某藥味有效成分的特性建立控制方法，隨方分析主藥或藥群的有效成分進行質(zhì)量評價。3、中藥制劑中原藥材來源和炮制的差異性 中藥制劑中原藥材差異較大，分析時應(yīng)考慮藥材來源與炮制等方面的影響。中藥材品種繁多，同名異物、同物異名現(xiàn)象很多，藥材規(guī)

5、格、產(chǎn)地、生長環(huán)境、藥用部位、采收季節(jié)和加工方法等均會影響到藥材中有效成分的含量，從而影響到中藥制劑的質(zhì)量和臨床療效?，F(xiàn)代研究表明，不同的采收期中藥的有效成分含量差異很大，如薄荷中的薄荷腦于秋季葉變黃時含量最高，丹參中的有效成分丹參酮在11、12月份含量最高。此外，中藥材經(jīng)加工炮制后，其化學(xué)成分、性味、藥理作用等方面均會發(fā)生一定的變化，為了保證中藥制劑的質(zhì)量，藥材應(yīng)嚴格遵守中藥炮制規(guī)范，對炮制工藝、成品質(zhì)量都要嚴格控制。4、中藥制劑劑型、生產(chǎn)工藝及輔料的多樣性 含有相同藥材的不同中藥制劑，不同生產(chǎn)工藝的差別，都將會影響到制劑中化學(xué)成分的含量。中藥制劑的劑型較多，傳統(tǒng)劑型有丸、散、膏、丹、酒、湯

6、、茶、錠等；現(xiàn)代新劑型有合劑、酊劑、顆粒劑、片劑、注射劑等，各種劑型由于制備方法不一，存在狀態(tài)不同，劑型的多樣性，決定了分析方法的多樣性。有些中藥制劑生產(chǎn)工藝較為復(fù)雜，影響因素較多，即使同一批、同一生產(chǎn)車間，若工藝稍有差別，也很難保證不同批次之間化學(xué)成分的一致性。此外，中藥制劑所用輔料，如蜂蜜、糯米粉、植物油等，對質(zhì)量分析均有一定的影響，大多需要進行提取、分離、凈化等繁瑣的預(yù)處理，以排除干擾，才能獲得準確的分析結(jié)果。所以，在分析方法上除考慮方法的專屬性、靈敏性外，尚需注意藥材在制劑中的存在形式、輔料對測定的影響及各成分間的干擾。應(yīng)針對不同工藝、劑型和輔料等選擇適宜的分析方法和檢測項目。若制劑中

7、含有藥材粉末，保留有植物組織特征，可用顯微法鑒別；進行化學(xué)成分分析時，則須將被測成分從植物細胞中提取出來。若制劑是由藥材提取物、浸出物制成，則理化分析法是其主要的分析方法。5、中藥制劑分析方法的先進性 由于中藥材品種繁多，來源復(fù)雜，即使同一品種、由于產(chǎn)地、生態(tài)環(huán)境、栽培技術(shù)、加工方法等不同，其質(zhì)量也會有差別，中藥制劑的組成又十分復(fù)雜，各種成分的含量高低不一，許多成分的含量比較低，有的成分含量很低，甚至為十萬分之幾、百萬分之幾，因此，中藥制劑的分析方法需要求其專屬性和靈敏度。目前，主要運用先進的科學(xué)技術(shù)進行分析，如色譜及連用技術(shù)、藥理和生物測定技術(shù)及中藥指紋圖譜研究技術(shù)等。二、影響中藥制劑質(zhì)量的

8、因素中藥制劑的原料中藥材大都是來自于自然界的植物、動物、礦物，因此，中藥處方及中藥材的原輔料及包裝材料、劑型與生產(chǎn)工藝、質(zhì)量標準與質(zhì)量監(jiān)控措施、廠房設(shè)施等因素都影響其質(zhì)量。 1、處方 處方是影響中藥制劑療效的主要因素，無論是古方、驗方還是醫(yī)院協(xié)定處方，在制備制劑前都必須進行處方中藥味、各藥味間用量比例及日服劑量的篩選，使處方盡量精煉、嚴謹，符合中醫(yī)辨證施治、理法方藥的原則。因此，處方是中藥制劑研究的基礎(chǔ)和依據(jù)，但值得注意的是，尋找一個治百病的處方是不科學(xué)的，只要對某一種病或?qū)膊〉哪骋稽c有特效的處方就是好處方。 2、原輔料及包裝材料 原料、輔料是中藥制劑生產(chǎn)的基礎(chǔ)物質(zhì)，是制劑生產(chǎn)的第

9、一關(guān)。其質(zhì)量狀況將會直接影響藥品的質(zhì)量。尤其是中藥材來源復(fù)雜，采收季節(jié)、產(chǎn)地、貯藏、飲片炮制質(zhì)量等均可直接影響中藥制劑產(chǎn)品的質(zhì)量及其安全性和有效性。中國藥典將黃芪甲苷作為黃芪藥材質(zhì)量的指標成分，研究表明，河南產(chǎn)的蒙古黃芪和甘肅產(chǎn)的蒙古黃芪黃芪甲苷的含量相差9倍。因此，重視制劑質(zhì)量，必須從生產(chǎn)制劑的基礎(chǔ)物質(zhì)抓起，通過嚴格、科學(xué)、系統(tǒng)的管理，使原料、輔料及包裝材料從采購、驗收、入庫、貯藏、發(fā)放等方面做到管理有章可循，使用有標準可依，記錄有據(jù)可查，從而保證合格、優(yōu)質(zhì)的原料、輔料及包裝材料用于藥品的生產(chǎn)。3、原料藥的采收季節(jié)和時間、炮制與貯藏 采收時間中藥品質(zhì)的好壞，取決于有效物質(zhì)含量的多少，有效物質(zhì)

10、含量的高低與產(chǎn)地、采收季節(jié)、時間、采收方法有著密切的關(guān)系。現(xiàn)代研究表明，不同的采收期中藥的有效成分含量差異很大，如以總黃酮和淫羊藿苷含量為指標成分的淫羊藿藥材，有學(xué)者對吉林省臨江野生淫羊藿不同采收期地上部位中總黃酮和淫羊藿苷的含量進行測定，發(fā)現(xiàn)不同采收期的淫羊藿地上部位中淫羊藿苷的含量在0.2630%3.8133%之間，總黃酮的含量在6.360%14.840%之間；綜合考慮淫羊藿苷含量和總黃酮含量，淫羊藿最佳采收期應(yīng)以9月中旬為佳。     炮制加工中藥炮制之后能使藥材達到降低或消除毒性或副作用、改變或緩和藥物的性能、增強療效、凈制、便于制劑和保存藥效等

11、目的，這是中醫(yī)用藥的一個特點，不同的處方、不同的劑型有不同的炮制要求和方法。中藥飲片能否按炮制規(guī)范炮制，直接影響中藥制劑的臨床療效和臨床安全。 飲片貯藏保管中藥的性狀及其所含成分是決定該藥材品質(zhì)的主要標志。貯藏保管的好壞，直接影響到主要成分與性狀的變化。中藥由于含有不同的化學(xué)成分加之外界溫度、濕度、陽光和空氣的影響，如貯藏保管不當，就會產(chǎn)生蟲蛀、發(fā)霉、泛油、變色、氣味散失等變異現(xiàn)象，直接對藥材的質(zhì)量產(chǎn)生影響，進而關(guān)系到臨床用藥的安全與療效。 4、劑型與生產(chǎn)工藝 中藥制劑的劑型是影響中藥制劑質(zhì)量穩(wěn)定性、有效成分的溶出和吸收、藥物顯效快慢強弱的重要因素，即劑型與制劑療效直接相關(guān)。因此，必須根據(jù)臨床

12、防治疾病的需要、處方藥物及有效成分的性質(zhì)和生產(chǎn)的技術(shù)水平及條件來選擇劑型。中藥制劑大多需選用適當?shù)娜苊胶头椒?，提取有效成分，再進一步精制、純化后做成制劑，應(yīng)用于臨床發(fā)揮治療和調(diào)節(jié)作用。在提取過程中，藥材的浸泡、選用的溶媒、提取方法和時間，精制的方法和操作、制備過程中的干燥方法、成型方法、包裝及操作人員的操作方式等都影響中藥制劑的質(zhì)量，進而影響臨床效果。 構(gòu)成制劑工藝的因素較多，如粉碎、提取、分離除雜、濃縮、干燥、及制劑造型的對象方法、工藝條件等，必須通過不斷實驗來選擇工藝。當前，如何將低溫提取、超臨界提取、微囊、微球、脂質(zhì)體技術(shù)、離心分離技術(shù)、超濾技術(shù)等應(yīng)用于中藥制劑是中藥制劑工藝現(xiàn)代化的關(guān)鍵

13、，因此，生產(chǎn)工藝對藥物制劑療效的影響也可概況為以下三個方面：(1)取舍有效成分的種類、數(shù)量及存在形式；(2)控制有效成分的釋放速度；(3)直接控制藥物的吸收速度。 5、質(zhì)量標準與質(zhì)量監(jiān)控措施 質(zhì)量是療效的保證，是工藝的體現(xiàn)，質(zhì)量標準是藥品質(zhì)量優(yōu)劣的指標，中藥生產(chǎn)現(xiàn)代化和質(zhì)量標準科學(xué)化是發(fā)展中藥的關(guān)鍵，由于中藥的有效成分復(fù)雜，療效多根據(jù)傳統(tǒng)經(jīng)驗的積累，作用于人體多強調(diào)整體性、互補性、協(xié)調(diào)性，而且目前中藥制劑的質(zhì)量標準水平相對較低，因此，如何采用現(xiàn)代分析技術(shù)手段與傳統(tǒng)經(jīng)驗鑒定相結(jié)合制訂出能指導(dǎo)生產(chǎn)操作和反映產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量的均一性、有效性、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性的多元化可控指標是提高中藥制劑質(zhì)量，促進中藥現(xiàn)代

14、化的重點，也是難點。現(xiàn)代分析方法和技術(shù)在中藥制劑質(zhì)量控制方面得到了擴大應(yīng)用，中國藥典2010年版對部分常用飲片和毒性藥材制訂了相應(yīng)的內(nèi)在質(zhì)控標準。中藥指紋圖譜技術(shù)的應(yīng)用，對中藥制劑生產(chǎn)用的原料、中間體、成品都能做到定性、定量檢測，有效鑒別中藥材的產(chǎn)地或真?zhèn)?，監(jiān)督生產(chǎn)過程的規(guī)范與否，從而達到良好控制制劑產(chǎn)品的質(zhì)量。 6、廠房設(shè)施 符合質(zhì)量要求的廠房設(shè)施是提高中藥制劑質(zhì)量的保證，廠房的設(shè)計、空氣潔凈技術(shù)的應(yīng)用、生產(chǎn)車間的設(shè)計與管理以及設(shè)備的選型、安裝、維修與保養(yǎng)無一不影響著中藥制劑的質(zhì)量，中藥制劑生產(chǎn)單位必須不斷更新設(shè)備，采用較成熟的現(xiàn)代噴霧干燥技術(shù)，高速離心技術(shù)及先進的檢測儀器等手段，以更完全地

15、提取出有效成份，除去無效成分，使中藥制劑符合三效(高效、速效、長效)、三小(服用劑量小、毒性小、副作用小)、五方便(服用、攜帶、貯藏、生產(chǎn)、運輸方便)的要求。因此，生產(chǎn)企業(yè)必須按照GMP組織生產(chǎn)；牢固樹立質(zhì)量第一的思想，在生產(chǎn)中嚴格執(zhí)行生產(chǎn)工藝規(guī)程、崗位操作法和標準操作規(guī)程；質(zhì)量管理部門要加強對生產(chǎn)全過程的質(zhì)量管理和檢驗，控制有效成分的穩(wěn)定性，保證最終產(chǎn)品批次間的質(zhì)量統(tǒng)一。 三、中藥指紋圖譜中藥指紋圖譜(traditional chinese medicine fingerprint)系中藥材或中藥制劑經(jīng)適當處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標定該中藥材或中藥制劑特性的共有峰的圖譜，即運用

16、現(xiàn)代分析技術(shù)對中藥化學(xué)信息以圖形（圖像）的方式進行表征并加以表述。中藥指紋圖譜是一種現(xiàn)代中藥鑒別新技術(shù)，是一種綜合的，可量化的鑒定手段，它是建立在中藥化學(xué)成分系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，主要用于評價中藥材以及中藥制劑半成品質(zhì)量的真實性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性，能提供從原藥材的種植、栽培、引種，中成藥生產(chǎn)過程中工藝的規(guī)范與優(yōu)化，到產(chǎn)品質(zhì)量標準的制訂全方位的質(zhì)量保證。因此，中藥指紋圖譜為研究道地藥材、稀有藥材替代品以及原藥材真?zhèn)舞b別的依據(jù)。目前，指紋圖譜技術(shù)是在現(xiàn)有的技術(shù)條件下對中藥材、中成藥進行質(zhì)量控制最好的解決辦法?，F(xiàn)代分析技術(shù)包括光譜、色譜、波譜、核磁共振、X-射線衍射等和各種連用技術(shù)。(一)、中藥指紋圖譜的

17、特點中藥指紋圖譜是一種綜合的、量化的鑒別手段?！罢w性”和“模糊性”為其顯著特點。整體性，是指把所得指紋圖譜作為一個整體進行考察，而不能以其中單個峰的有無、峰的高低以及峰面積的大小來判斷檢測品的質(zhì)量。模糊性，是指個體樣品本身存在著差異，難以精確的進行測量，絕大多數(shù)的指紋圖譜本身也存在著模糊性，不能保證在所得的指紋圖譜中每一個峰都沒有重疊，而且也不能保證所得的圖譜包含了樣品的所有特征，況且在不同的實驗條件下得到的圖譜會有很大的差異。但是，只要能圈定圖譜中關(guān)鍵部分即可對樣品進行質(zhì)量控制。因此，中藥指紋圖譜不僅是一種中藥質(zhì)量控制模式和技術(shù)，更可以發(fā)展成為一種采用各種指紋圖語來進行中藥理論(復(fù)雜系統(tǒng))

18、和新藥開發(fā)的研究體系和研究模式。(二)、制訂中藥指紋圖譜的原則及意義1、建立中藥指紋圖譜的原則 中藥指紋圖譜的建立，要以系統(tǒng)的化學(xué)成分研究和藥理學(xué)研究為依托，應(yīng)遵循以下三個原則。（1）系統(tǒng)性：指紋圖譜反應(yīng)的化學(xué)成分應(yīng)包括中藥所含大多數(shù)組分的類別或指標成分的全部。如人參中的有效成分是人參皂苷，則在指紋圖譜的考察中，應(yīng)盡可能多地反應(yīng)其中的皂苷成分；而對于有效成分較為復(fù)雜的，如銀杏葉中的有效成分是黃酮和銀杏內(nèi)酯類，針對這兩類成分其指紋圖譜可采用兩種方法進行分析，最終達到系統(tǒng)、全面的目的。（2）特異性：指紋圖譜成是中藥自身的“化學(xué)條碼”，其反映的化學(xué)信息（表現(xiàn)為保留時間或比移值）具有高度的選擇性，通過

19、指紋圖譜的特異性，能有效鑒別區(qū)分中藥的真?zhèn)?、?yōu)劣或產(chǎn)地。（3）重現(xiàn)性（可操作性）：是指已建立的指紋圖譜，不同的操作者、不同的實驗室，只要在規(guī)定的方法和條件下、允許的誤差應(yīng)范圍內(nèi)，即能做出相同的結(jié)果，這樣才能保證指紋圖譜的通用性和實用性。2、制訂指紋圖譜的意義 指紋圖譜是對中藥質(zhì)量控制的補充和提高。理想中的指紋圖譜不僅能進行定性鑒別，也可用于精確的定量分析。通過指紋圖譜研究，可以掌握每個批次原藥材、中間體成分的變化，進行有指導(dǎo)的合理“混批勾兌”，保證成品在成分含量、組成比例上保持一致，減少批間差異。（三）、中藥指紋圖譜的類型狹義的中藥指紋圖譜是指中藥化學(xué)(成分)指紋圖譜；廣義的中藥指紋圖譜則通常

20、按測定手段和應(yīng)用對象的不同進行分類。 1、按測定手段分類 中藥指紋圖譜按測定手段可分為中藥化學(xué)(成分)指紋圖譜和中藥生物指紋圖譜。中藥生物指紋圖譜主要是測定各種中藥材的DNA圖譜，由于每個物種基因的唯一性和遺傳性，中藥材DNA指紋圖譜可用于對中藥材的種屬鑒定、植物分類研究和品質(zhì)研究。它對中藥材GAP基地建設(shè)、中藥材種植規(guī)范(SOP)、選擇優(yōu)良種質(zhì)資源和藥材道地性研究極為有用。 2、按應(yīng)用對象分類 中藥指紋圖譜可用于中藥制劑研究、生產(chǎn)過程的各個階段，按應(yīng)用對象來分類，可分為中藥材(原料藥材)指紋圖譜、中藥原料藥(包括飲片、配伍顆粒)指紋圖譜和中藥制劑指紋圖譜。如分得更細，還可包括用于工藝生產(chǎn)過程

21、中間產(chǎn)物的指紋圖譜。值得注意的是建立中藥材化學(xué)指紋圖譜必須考慮諸多因素的影響。中藥品種混雜，歷史上形成的同名異物、異名同物，以及同一物種受產(chǎn)地環(huán)境、不同有效部位所含成分的波動大等因素，給質(zhì)量控制帶來了很多困擾。因此對于某一種中藥材的指紋圖譜，需要有大量的數(shù)據(jù)積累，才能制定合理的相似性標準。（四）、中藥色譜指紋圖譜研究的技術(shù)關(guān)鍵 (一)研究思路與內(nèi)容 1、確定研究對象 一種藥材有多個臨床應(yīng)用，有多種活性組分。研究中藥注射劑的指紋圖譜時，必須盡可能詳盡地了解藥材、中間體及成品中所含成分的種類及其理化性質(zhì)，找出成品中的藥效成分或有效成分，作為成品及中間體指紋圖譜的研究對象，即分析檢測目標。 2、研究

22、內(nèi)容 中藥注射劑在固定中藥材品種、部位、產(chǎn)地、采收期以及加工工藝的前提下，需制訂中藥材、有效部位或中間體、注射劑的指紋圖譜。 (二)研究方案 1、樣品的選擇與收集 藥材應(yīng)盡可能固定產(chǎn)地(如道地藥材)、采收期和炮制加工方法等，對工藝穩(wěn)定、療效恒定、臨床使用中很少出現(xiàn)異常的藥材批次應(yīng)重點選擇，另外還應(yīng)收集不同產(chǎn)地、不同采收期的藥材，中間體、注射劑的收集原則也應(yīng)重點選擇工藝穩(wěn)定、療效恒定、臨床使用中很少出現(xiàn)異常的批次。 供試品的取樣應(yīng)按中國藥典(2010年版)一部中規(guī)定的中藥材取樣方法，以保證所取供試品的代表性和均一性。 2、供試品的制備 在指紋圖譜研究過程中，供試品(中藥材、中間體及注射劑)溶液的

23、制備，應(yīng)根據(jù)所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)和檢測方法的需要，選擇適宜的方法進行制備。制備方法須確保該注射劑、有效部位或中間體主要化學(xué)成分在指紋圖譜中的再現(xiàn)，以便分析指紋圖譜的相關(guān)性。 注射劑中除少數(shù)品種添加溶劑外，所含化學(xué)成分均具有較好的水溶性，而且研究生產(chǎn)工藝時考慮到色素、生物大分子等因素，生產(chǎn)過程中已通過微孔濾膜、脫色等操作，無須特殊處理，可直接分析檢測。 3、參照物的制備 制訂指紋圖譜必須設(shè)立參照物，應(yīng)根據(jù)供試品中所含化學(xué)成分的性質(zhì)，選擇適宜的對照品作為參照物；如果沒有適宜的對照品，可選擇適宜的內(nèi)標物作為參照物。參照物的制備應(yīng)根據(jù)檢測方法的需要，選擇適宜的方法進行。 4、研究方法的選擇方法的選擇

24、 根據(jù)所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)，選擇適宜的測定方法。建議優(yōu)先考慮色譜方法。對于成分復(fù)雜的中藥材及其制劑，特別是中藥復(fù)方注射劑，必要時可以考慮采用多種檢測方法，建立多張指紋圖譜。 5、色譜條件的選擇 無論是原藥材、中間體，還是注射劑，其指紋圖譜的色譜條件選擇是整個研究檢測方法過程中最重要、關(guān)鍵性的內(nèi)容。下面以HPLC法為例，闡述各影響因素與解決途徑。 (1)色譜柱：指紋圖譜研究時一般選擇510um的C18填充柱，以250mm×4.6mm較適宜，其他特殊填料的色譜柱，如氨基柱、氰基柱等，可視研究對象的不同進行選擇。 (2)流動相：流動相可選擇乙腈、甲醇、水和四氫呋喃等。對于反相高效液相色譜

25、法，乙腈·水系統(tǒng)比較適合梯度洗脫，而醇一水系統(tǒng)由于熱力學(xué)和可壓縮性因素，在梯度洗脫時易導(dǎo)致基線漂移。 -(3)檢測器：HPLC法應(yīng)用最多的是紫外檢測器，且前主要是可變波長型和二極管陣列檢測器，適用于在紫外區(qū)具有吸收物質(zhì)的測定。蒸發(fā)光散射檢測器適用于無生色團物質(zhì)的檢測，如碳水化合物(多糖)、類脂類(磷脂)、皂苷等，與紫外檢測器互相補充。聯(lián)用技術(shù)中質(zhì)譜檢測器是最有效的檢測手段，如GC-MS，HPLC-MS等可提供大量的結(jié)構(gòu)信息，符合解決中藥復(fù)雜體系的要求。 檢測波長的選擇：中藥制劑根據(jù)君、臣、佐、使的組方理論，在盡可能兼顧佐、使藥的同時，主要選擇君、臣藥中有效成分的吸收峰值；一個檢測波長

26、的色譜圖如達不到控制質(zhì)量的目的時，可建立多個檢測波長下的指紋圖譜； (4)柱溫：柱溫的選擇與恒定是影響指紋圖譜技術(shù)穩(wěn)定性的主要因素之一。當色譜圖中某個色譜峰因溶解度差而峰形較“鈍”時，可適當提高柱溫(30一50)；若樣品中組分在常溫或高溫下不穩(wěn)定，易發(fā)生水解或分解(如烏頭生物堿)等變化時，可降低柱溫。 (5)進樣量：進樣量對指紋圖譜的結(jié)果影響不大，但加大進樣量，可以減弱梯度洗脫時基線漂移的程度；然而色譜柱的載樣量有一定的限度，進樣量過大，色譜柱超載，導(dǎo)致色譜峰峰寬增加或色譜峰峰尖鈍化，并影響柱的壽命。6、指紋特征的選擇與技術(shù)參數(shù) 指紋圖譜方法一旦建立，除提供指紋圖譜外，還應(yīng)說明相應(yīng)的技術(shù)參數(shù)。

27、通過大樣本的指紋圖譜內(nèi)在的挖掘，找出其中的指紋特征是指紋圖譜研究的目的。(1)共有指紋峰的標定：采用色譜法制訂指紋圖譜，必須根據(jù)參照物的保留時間，計算指紋峰的相對保留時間。根據(jù)10批次以上供試品的檢測結(jié)果，標定共有指紋峰。色譜法采用相對保留時間標定指紋峰。(2)共有指紋峰面積的比值：以對照品作為參照物的指紋圖譜，以參照物峰面積作為1，計算各共有指紋峰面積與參照物峰面積的比值；以內(nèi)標物作為參照物的指紋圖譜，則以共有指紋峰中其中一個峰(要求峰面積相對較大、較穩(wěn)定的共有峰)的峰面積作為l，計算其他各共有指紋峰面積的比值。各共有指紋峰的面積比值必須相對固定。1)中藥材供試品的圖譜中各共有峰面積的比值與

28、指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，單峰面積占總峰面積大于或等于20的共有峰，其差值不得大于±20；單峰面積占總峰面積大于或等于10，而小于20的共有峰，其差值不得大于±25；單峰面積占總峰面積小于10的共有峰，峰面積比值不作要求，但必須標定相對保留時間。未達基線分離的共有峰，應(yīng)計算該組峰的總峰面積作為峰面積，同時標定該組各峰的相對保留時間。2)注射劑及其有效部位或中間體供試品的圖譜中各共有峰面積的比值與指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，保留時間小于或等于30分鐘的共有峰：單峰面積占總峰面積大于或等于20的共有峰，其差值不得大于±20；單峰面積占總峰面積大于或等于1

29、0，而小于20的共有峰，其差值不得大于±25；單峰面積占總峰面積大于或等于5，而小于10的共有峰j其差值不得大于±30；單峰面積占總峰面積小于5的共有峰，峰面積比值不作要求，但必須標定相對保留時間。保留時間超過30分鐘的共有峰：單峰面積占總峰面積大于或等于10的共有峰，按上述規(guī)定執(zhí)行；單峰面積占總峰面積小于10的共有峰，峰面積比值不作要求，但必須標定相對保留時間。未達基線分離的共有峰，應(yīng)計算該組峰的總峰面積作為峰面積，同時標定該組各峰的相對保留時間。 (3)非共有峰面積：中藥材供試品的圖譜與指紋圖譜比較，非共有峰總面積不得大于總峰面積的10。注射劑及其有效部位或中間體供試品

30、的圖譜與指紋圖譜比較，非共有峰總面積不得大于總峰面積的5。案例1：HPLC法對不同產(chǎn)地12批白花蛇舌草藥材的指紋圖譜研究精密稱取白花蛇舌草樣品1.0 g，置125mL圓底燒瓶中，加入體積分數(shù)80甲醇20 mL，超聲提取40min，取上清液用微孔濾膜(045 um)過濾，即得供試品溶液。色譜條件為Thermo BetaBasie18（250mm×4.6mm，5um）為色譜柱；柱溫：30；以乙腈0.5醋酸為流動相，連續(xù)梯度洗脫；體積流量1.0mL·min-1；檢測波長為360 nm；進樣量10uL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖(圖15-1)和各色譜峰保留時間(圖15-2)，以面

31、積歸一化法計算各色譜峰相對峰面積(AR)總之，指紋圖譜研究的建立、分析、比較、評價和校驗，應(yīng)逐漸取得共識并形成規(guī)范。指紋圖譜研究應(yīng)結(jié)合當前的實際情況，同時還應(yīng)該結(jié)合生產(chǎn)工藝的優(yōu)選及藥效和臨床觀察，當前階段宜簡不宜繁、宜易不宜難，以確保研究方法與產(chǎn)品質(zhì)量的基本穩(wěn)定和一致。圖15-1 白花蛇舌草藥材標準色譜指紋圖譜圖15-2 12批白花蛇舌草藥材色譜圖第二節(jié) 中藥及其制劑中待測成分的提取分離和純化中藥制劑的組成非常復(fù)雜，除制劑特有的工藝步驟外，還含有其他的附加劑，原藥材和提取物中還含有眾多的化學(xué)成分，因此，在測定前需提取待測組分，有的還需作進一步的純化處理。一 中藥及其制劑中待測成分的提取分離方法

32、中藥制劑常用的提取方法通常有萃取法、冷浸法、回流提取法、連續(xù)回流提取法、水蒸氣蒸餾法、超聲提取法和超臨界流體萃取法等。1、萃取法 萃取法是利用溶質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中溶解度的不同，使物質(zhì)從一種溶劑轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中，經(jīng)過多次萃取，將測定組分提取出來的方法。萃取法主要用于液體制劑中待測組分的提取分離，多用有機溶劑將其萃取出來，以便分析測定。 萃取用溶劑應(yīng)根據(jù)組分的溶解性來選擇，測定組分在其中的溶解度大，雜質(zhì)在其中的溶解度小。溶質(zhì)在有機相和水相的分配比越大，萃取效率越高。根據(jù)相似相溶的原理，極性較強的有機溶劑正丁醇等適用于提取皂苷類成分，醋酸乙酯多用于提取黃酮類成分，氯仿分子中的氫可與生物堿形成

33、氫鍵，多用于提取生物堿類成分，揮發(fā)油等非極性組分則宜用非極性溶劑乙醚、石油醚等提取。水相的pH可影響弱酸弱堿性物質(zhì)在兩相的分配。酸性有機組分在酸性條件下不電離，在有機相中溶解度增大而有利于提取；堿性組分則在堿性條件下不電離，易被有機溶劑提出。溶液的pH應(yīng)根據(jù)組分的pKa來確定，酸性組分提取的pH一般應(yīng)比pKa低12個pH單位，堿性組分提取的pH一般應(yīng)比pKa高12個pH單位。萃取通常在分液漏斗中進行，加入有機溶劑后，振蕩、放置分層后分取有機相。若提取液用作鑒別，一般只提取一次；若用作含量測定，應(yīng)提取完全，一般需要提取34次，萃取過程中應(yīng)注意防止和消除乳化。酒劑和酊劑在萃取前應(yīng)先揮去乙醇，否則乙

34、醇可使有機溶劑部分或全部溶解于水中。2、冷浸法 冷浸法是將溶劑加入樣品粉末中，室溫下放置一定時間，組分因擴散而從樣品粉末中浸出的提取方法，冷浸法適用于固體制劑中待測成分的提取。樣品需先粉碎成細粉后再提取，否則內(nèi)部的組分不易浸出。進行鑒別時，大部分待測組分別浸出即可，進行含量測定時，擴散需達平衡后方能分取浸取液。一般方法為精密稱取一定量的樣品粉末，置具塞錐形瓶中，精密加入一定體積的溶液，密塞，稱定重量。室溫下放置一定時間（一般為824小時），并不斷振蕩，浸泡后再稱量，并補足減失重量，搖勻，濾過，精密量取一定量的續(xù)濾液備用。浸泡時間的確定可取同一樣品，加溶劑后分別浸取不同時間，測定溶液中浸出組分的

35、含量，當浸出量不再隨放置時間的延長而增加時，說明擴散已經(jīng)達到平衡。冷浸法操作簡便，適用于遇熱不穩(wěn)定組分的提取，但所需時間較長，溶劑量大，提取率低。3、回流提取法：回流提取法是將樣品粉末置燒瓶中，加人一定量有機溶劑，加熱進行回流提取的方法。在加熱條件下組分溶解度增大，溶出速度加快，有利于提取。用于含量測定時，可更換溶劑，多次提取，至組分提取完全，合并各次提取液供分析用。也可精密加入一定體積溶劑至供試品中，稱定重量，加熱回流至組分浸出達到平衡，放冷后稱重，補足減失重量，濾過，取續(xù)濾液備用。 回流提取法主要用于固體制劑的提取。提取前樣品應(yīng)粉碎成細粉。提取溶劑沸點不宜過高，對熱不穩(wěn)定或具有揮發(fā)性的組分

36、不宜用回流提取法提取?；亓魈崛》ㄌ崛∷俣瓤欤僮鬏^繁瑣。4、連續(xù)回流提取法：連續(xù)回流提取法使用索氏提取器，利用遇熱易揮發(fā)的溶劑進行反復(fù)回流提取。該法操作簡便，節(jié)省溶劑，蒸發(fā)的溶劑經(jīng)冷凝流回樣品管，其中不含測定組分，提取效率高。使用本法時應(yīng)選用低沸點的溶劑，如乙醚、甲醇等，提取組分對熱應(yīng)穩(wěn)定（圖15-3）。圖15-3 索氏提取裝置圖 A、圓底燒瓶 B、樣品管 C、冷凝管5、水蒸氣蒸餾法：部分具有揮發(fā)性可隨水蒸氣蒸出的組分，可采用水蒸氣蒸餾法提取，收集餾出液供分析用。揮發(fā)油、一些小分子的生物堿如麻黃堿、檳榔堿，某些酚類化合物如丹皮酚等可以用該法提取。用本法提取的組分對熱應(yīng)穩(wěn)定（圖15-4）。 圖

37、15-4 揮發(fā)油測定裝置圖 A、圓底燒瓶 B、揮發(fā)油提取器 C、冷凝管6、超聲提取法：超聲波是頻率高于20 000Hz，人耳聽不到的高頻聲波。超聲波具有助溶作用，因此可用于樣品中待測組分的提取。提取時將供試品粉末置具塞錐形瓶中，加入一定量的提取溶劑，再將錐形瓶置超聲振蕩器(或超聲清洗機)槽內(nèi)，槽內(nèi)應(yīng)加有適量水，開啟超聲振蕩器，進行超聲振蕩提取。由于超聲波的助溶作用，超聲提取較冷浸法速度快，一般僅需數(shù)十分鐘浸出即可達到平衡。超聲提取法簡便，不需加熱，提取時間短，適用于固體制劑中測定組分的提取。用于藥材粉末提取時，由于組分是由細胞內(nèi)逐步擴散出來，速度較慢，加溶劑后宜先放置一段時間，再超聲振蕩提取。

38、 7、超臨界流體萃取：超臨界流體是指壓力和溫度達到物質(zhì)的臨界點時，所形成的單一相態(tài)。超臨界流體萃取(supercritical nuid extraction，SFE)是近年來發(fā)展起來的一種新的提取分離方法，是利用某種物質(zhì)在超臨界狀態(tài)時具有密度大、黏度小、擴散系數(shù)大等優(yōu)良的傳質(zhì)特性來進行萃取，它具有提取率高、產(chǎn)品純度好、能耗低等特點。 最常使用的超臨界流體是CO2，因為CO2是一種不活潑的氣體, 具有較低的臨界溫度和臨界壓力，萃取過程不發(fā)生化學(xué)反應(yīng),且屬于不燃性氣體,無味、無臭、無毒，故安全性好；而且，CO2價格便宜，純度高，容易取得，且在生產(chǎn)過程中循環(huán)使用，從而降低成本。由于SFE具有以上優(yōu)

39、點，因此，本法特別適用于中藥及其制劑中待測組分的分離提純，目前應(yīng)用日益廣泛。二 中藥及其制劑中待測成分的純化方法純化指待測組分被提出后，還需要做進一步的處理，以除去干擾組分的影響。常用的純化方法有萃取法、沉淀法和柱色譜法等。1、萃取法 萃取法不僅用于待測組分的提取，也可用于純化處理。即采用適宜的溶劑直接除去雜質(zhì)。如測定制劑中總生物堿的含量，一般先用酸性水溶液從提取液中萃取出生物堿，生物堿成鹽在水中溶解度增大而被提出，分取水相，加濃氨溶液使成堿性后，再用有機溶劑(如氯仿)將生物堿從水相提出。萃取二次可分別除去中性、酸性脂溶性雜質(zhì)及水溶性雜質(zhì)，達到純化的目的。又如用乙醚、石油醚等非極性溶劑提取除去

40、脂溶性色素。2、沉淀法：有些待測組分可與一些試劑反應(yīng)生成沉淀，過濾使雜質(zhì)存在于溶液中而得到純化。也可使雜質(zhì)沉淀析出而使被測物質(zhì)保留在母液中。3、色譜法：色譜法為目前常用的純化分離方法之一，有柱色譜、薄層色譜、紙色譜、離子交換色譜、聚酰胺色譜及凝膠色譜等。常用的固定相有硅膠、氧化鋁和大孔吸附樹脂等。柱色譜大多數(shù)情況是將待測組分保留于柱上，將雜質(zhì)洗去，再用適當溶劑將待測組分洗脫下來；也可將待測組分洗下而將雜質(zhì)保留于柱上，達到純化的目的。知識鏈接 人參皂苷成分可用大孔吸附樹脂純化，先用水洗去糖等水溶性雜質(zhì)，再用70的乙醇溶液洗脫人參皂苷。第三節(jié) 中藥制劑分析基本程序中藥制劑分析的基本程序包括取樣、性

41、狀、鑒別、檢查、浸出物測定和含量測定等項目。檢定時應(yīng)參照國家藥典等有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。 一 中藥制劑取樣法取樣是從整批成品中抽取一部分具有代表性的供試品。取樣的原則是均勻合理，要有科學(xué)性、真實性和代表性。一般應(yīng)從每個包裝的四角和中間5處取樣。袋裝可從袋中間垂直插入，桶裝可在桶中央取樣，深度可達1/32/3處。取得的樣品要妥善保管，同時注明品名、批號、數(shù)量、取樣日期及取樣人。 各類中藥制劑的取樣量至少為檢測用量的3倍，貴重藥可酌情取樣。 1、固體中藥制劑(片劑、丸劑、膠囊)：一般片劑取量200片，未成片前已制成顆粒者可取100g，丸劑一般取10丸。膠囊按藥典規(guī)定取樣不得少于20個膠囊，傾出其內(nèi)容物并仔

42、細將附著在膠囊上的藥物刮下，合并，混勻，并稱定空膠囊的重量，由原來的總重量減去，即為膠囊內(nèi)藥物的重量，一般取樣量為100g。 2、粉狀中藥制劑(散或顆粒劑)：一般取樣100g，可在包裝的上、中、下3層或間隔相等部位取樣若干。將取出的供試品混勻，然后按“四分法”從中取出所需供試量。 3、液體中藥制劑(口服液、酊劑、酒劑、糖漿)：一般取樣數(shù)量為200ml，同時須注意容器底是否有沉渣，應(yīng)徹底搖勻，均勻取樣。 4、注射劑：取樣要經(jīng)過2次，配制后在灌封、熔封、滅菌前進行一次取樣，經(jīng)滅菌后的注射劑按原方法進行，分析檢驗合格后方可供藥用。已封好的安瓿取樣量一般為200支。二 中藥及其制劑的鑒別中藥制劑的鑒別

43、主要是根據(jù)中藥制劑的性狀、組織學(xué)特征以及所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)，采用一定的分析方法來判斷中藥制劑的真?zhèn)?。中藥制劑組成復(fù)雜，少則幾味，多則十幾味藥，一般不要求對所含有的每種中藥都進行鑒別。選擇鑒別哪種中藥，應(yīng)遵循處方的原則，首選君藥與臣藥進行鑒別；貴重藥雖然量少，但有時起重要作用，也應(yīng)加強質(zhì)量監(jiān)督；毒、劇藥物也需要鑒別。鑒別的方法一般包括顯微鑒別、理化鑒別和色譜鑒別。(一)性狀鑒別：中藥及其制劑的性狀鑒別是利用其外觀、形狀及感官性質(zhì)等特征作為真?zhèn)舞b別的依據(jù)。如藥材及其炮制品的形狀、大小、色澤、表面特征、質(zhì)地、折斷面特征以及氣味等；中藥制劑的外觀及內(nèi)容物的形狀、顏色、氣味等，均可作為描述的內(nèi)容。性

44、狀鑒別是評價藥材及其制劑質(zhì)量的一項重要指標。中藥常用藥材以植物來源占大多數(shù)，也有少數(shù)來源于動物和礦物。各類藥材和炮制品在外形上有一定的共同點，即有一般的形態(tài)規(guī)律。但各類藥材由于來源不同及藥材本身所含不同的化學(xué)成分等因素，在性狀上又各具特異點。掌握各類藥材的一般形態(tài)規(guī)律和形態(tài)特異點，并參照國家藥典、藥品標準和中藥鑒定學(xué)等有關(guān)專著所描述的性狀，并遵循藥材檢定通則規(guī)定操作，就能正確鑒定藥材的真?zhèn)巍Ｖ兴幹苿┑男誀铊b別也可參照藥材鑒別的方法進行。(二)顯微鑒別：顯微鑒別是利用顯微鏡來觀察中藥制劑中原藥材的組織、細胞或內(nèi)含物等特征進行鑒別的一種方法。鑒別特征如薄壁細胞、木栓組織、分泌細胞和分泌腔、纖維以及

45、淀粉粒、花粉粒、碳酸鈣結(jié)晶等。凡以藥材粉碎后直接制成制劑或添加有粉末藥材的制劑，由于其在制備過程中原藥材的顯微特征仍保留在制劑中，所以均可用顯微鑒別法進行鑒別。案例 檳榔粉中檳榔堿的顯微鑒別 取檳榔粉0.5g，加水3ml及稀鹽酸1滴，微熱振搖提取數(shù)分鐘，濾過，取濾液1滴于載玻片上，加碘化鉍鉀試液1滴，即發(fā)生混濁，放置后經(jīng)鏡檢可見石榴紅球形或方晶形（檳榔堿結(jié)晶）顯微鑒別應(yīng)選擇專屬性的特征進行鑒別，處方中多味中藥共同具有的顯微特征不能作為鑒別的特征。(三)理化鑒別：理化鑒別法是根據(jù)中藥及其制劑中所含主要化學(xué)成分的理化性質(zhì)，采用物理、化學(xué)或物理化學(xué)的方法進行鑒別。一般理化鑒別方法有熒光法、顯色法、沉

46、淀法、升華法、結(jié)晶法等。所鑒別的成分應(yīng)是已知的有效成分或其他特征成分，還應(yīng)是處方中某一味藥所單獨含有的成分。鑒別反應(yīng)的專屬性強、靈敏、簡便。有的反應(yīng)，如泡沫反應(yīng)、三氯化鐵反應(yīng)等，在植物中所含類似成分較多，專屬性不強，不宜采用。其他成分是否有干擾，應(yīng)做陰性對照試驗。陰性對照試驗是取不含鑒別藥物的制劑(陰性對照)，在相同的條件下反應(yīng)，若不顯正反應(yīng)，則說明其他藥物和輔料不干擾鑒別。(四)色譜鑒別：色譜法分離效能好、靈敏度高、應(yīng)用范圍廣，特別適合中藥制劑的鑒別。色譜法常用的方法有紙色譜發(fā)、薄層色譜法、氣相色譜發(fā)、高效液相色譜法和高效毛細管電泳法，其中薄層色譜法不需要特殊的儀器設(shè)備，操作簡便，有多種專屬

47、的檢測方法和豐富的文獻資料，是目前中藥制劑分析中應(yīng)用最多的鑒別方法。薄層色譜鑒別法常采用對照法進行鑒別，該法是將中藥制劑樣品和對照品在同一條件下進行分離分析，觀察樣品在對照品相同斑點位置上是否有同一顏色(或熒光)的斑點，來確定樣品中有無要檢出的成分。1、對照品對照法：用中藥制劑中味藥材所含有效成分（或指標性成分）的對照品制成標準對照液，與樣品液點于同一薄層板上，展開，顯色后，比較與對照品相同Rf值位置上有無同一顏色(或熒光)的斑點，來鑒別制劑中這種有效成分。2、對照藥材對照法：將制劑中某味中藥的對照藥材制成標準對照液，與供示品溶液同法進行對照。3、陽對照法：將制劑中要鑒別的某味藥材，按制劑工藝

48、的制法處理后，以和制劑相同的比例條件、方法提取，所得提取液稱為該味中藥的陽性對照液。鑒別時取陽性對照液，與供示品溶液同法進行對照。案例 大補陰丸中黃柏的薄層色譜法鑒別 取本品水蜜丸0.7g，研碎，加甲醇5ml，或取大蜜丸2g，剪碎，加甲醇10ml，置水浴上加熱回流15分鐘，濾過，濾液補加甲醇或濃縮至5ml，作為供試品溶液，另取黃柏對照藥材0.1g，同法制成對照藥材溶液，再去鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法（2010版中國藥典附錄B）試驗，吸取上述三種溶液各1ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液（12:6:3

49、:3:1）為展開劑，置氨蒸氣預(yù)飽和的展開崗內(nèi)，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在于對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色熒光斑點，4、陰對照法：將制劑處方中要鑒別的藥物除去，剩下的各味藥，按制劑工藝方法處理后，以和制劑相同的比例、條件、方法提取，所得提取液稱為該味藥的陰性對照液。鑒別時取陰性對照液，與供示品溶液同法進行對照。三 中藥及其制劑的雜質(zhì)檢查中藥制劑的雜質(zhì)檢查是制劑安全性評價的重要保證。除雜質(zhì)檢查外，輔料的質(zhì)量檢查、與劑型相關(guān)的一般項目檢查也屬此項內(nèi)容。主要包括一般理化檢查項目，包括水分測定、相對密度測定、浸出物及總固體測定、乙醇含量測定、旋光

50、度測定、折光率測定和干燥失重測定等；雜質(zhì)檢查，包括雜質(zhì)限量檢查、灰分測定、酸堿度檢查、氯化物檢查、特殊雜質(zhì)及摻偽物檢查等。重金屬檢查，包括鉛鹽、砷鹽、鐵鹽及其他重金屬的限量檢查。此外，國際上對中藥制劑中有機溶劑殘留及農(nóng)藥殘留量檢查日趨嚴格。1水分測定：固體中藥制劑多數(shù)要檢查水分，因為水分含量過高，可引起制劑結(jié)塊、霉變或有效成分的分解。因此，水分是丸劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑等固體制劑的常規(guī)檢查項目，在中國藥典(2010年版)制劑通則中規(guī)定有水分的限量。中國藥典(2010年版)一部附錄收載的水分測定法有烘干法、甲苯法和減壓干燥法及氣相色譜法共4種方法。甲苯法的裝置如圖15-5所示。圖15-5 甲苯

51、法測定水分的裝置 A、圓底燒瓶 B、水分測定管 C、冷凝管 2總灰分和酸不溶性灰分：總灰分系指藥材或制劑經(jīng)加熱熾灼灰化遺留的無機物?？偦曳殖幬锉旧硭瑹o機鹽(稱生理灰分)外，還包括泥土、砂石等藥材外表粘附的無機雜質(zhì)。因此，測定灰分的目的主要是控制藥材中泥土、砂土的量，同時還可以反映藥材生理灰分的量。中國藥典(2010年版)一部收載有植物藥的總灰分檢查。有些中藥材生理灰分的差異較大，特別是組織中含草酸鈣較多的藥材，如大黃的總灰分由于生長條件不同可從820以上。此類藥材的總灰分就不能說明外來雜質(zhì)的量，因此需要測定酸不溶性灰分。中藥制劑以合格的藥材為原料，原則上可以不再進行雜質(zhì)檢查。但對于某些

52、以根、莖等原藥材粉末為原料的制劑，為控制外來雜質(zhì)的量，仍需檢查。如九味羌活丸，規(guī)定其總灰分不得過7.0，酸不溶性灰分不得過2.0。3重金屬：重金屬鉛、汞、鎘、銅等對人體均有嚴重的毒害。藥材由于環(huán)境污染和使用農(nóng)藥等原因，容易引入重金屬雜質(zhì)，所以中藥制劑中重金屬的量同樣需要控制，特別是新研制的中藥制劑和出口的中藥制劑。中國藥典(2010年版)一部收載有重金屬檢查法，具體操作方法可參見本教材“藥物的雜質(zhì)檢查”中的有關(guān)內(nèi)容。由于中藥制劑組成復(fù)雜，部分制劑含藥材粉末，所以需進行有機破壞后方能檢查。有機破壞的方法有干法破壞和濕法破壞。知識鏈接 干破壞法是將供試品置坩堝中，先緩緩加熱至炭化，再在500600

53、熾灼至完全灰化，加酸處理后用硫代乙酰胺法檢查4砷鹽：中藥制劑的原料藥材由于受除草劑、殺蟲劑和化學(xué)肥料的影響，容易引入砷。因此，控制砷鹽的量是控制制劑純度的一個非常重要的方面。中國藥典(2010年版)一部收載的砷鹽檢查法有古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸銀法。由于中藥制劑在檢查前必須對樣品進行有機破壞，中國藥典多采用堿融法破壞。案例 牛黃解毒丸中三氧化二砷的檢查 取本品適量，剪碎，精密稱取2.9g，加稀鹽酸20ml，時時攪拌40分鐘，濾過，殘渣用稀鹽酸洗滌2次，每次10ml，攪拌10分鐘，洗液與濾液合并，置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取2ml，加鹽酸5ml與水21ml，照砷鹽檢測法

54、（2010版中國藥典附錄F）檢查，所顯砷斑顏色不得深于標準砷斑。砷鹽的檢查也可采用原子吸收分光光度法，用砷空心陰極燈，在1937nm波長處檢測，方法專屬性強、靈敏度高。5殘留農(nóng)藥：藥用植物在栽培過程中，為減少蟲害，常需噴灑農(nóng)藥，土壤中殘存的農(nóng)藥也可能引入藥材中。大多數(shù)農(nóng)藥的殘留期短，但有機氯類及少數(shù)有機磷農(nóng)藥能長期殘留，所以需要加以控制。對接觸農(nóng)藥不明的樣品，一般可測定總有機氯量和總有機磷的量。中國藥典(2010年版)一部規(guī)定了有機氯類、有機磷類、擬除蟲菊酯類的測定方法，除另有規(guī)定外，均采用氣相色譜法測定有關(guān)農(nóng)藥殘留量。四 中藥及其制劑的含量測定中藥制劑中含有眾多類別的化學(xué)成分，十分復(fù)雜，大部

55、分中藥制劑的有效成分尚不十分清楚，其藥效是多種化學(xué)成分協(xié)同作用的結(jié)果。目前尚難以做到對中藥制劑的全面質(zhì)量控制。但根據(jù)中醫(yī)藥理論，結(jié)合現(xiàn)代科學(xué)研究，選擇相關(guān)的有效成分或特征性成分，建立含量測定項目和方法，對評價藥物的內(nèi)在質(zhì)量仍然具有重要的意義。中藥制劑的含量測定要在選定測定項目的前提下進行。（一）含量測定項目選定的原則： 1、首選君藥及貴重藥建立含量測定方法。若含量太低無法測定，則應(yīng)在檢查項下規(guī)定限度檢查項目；若上述藥物基礎(chǔ)研究薄弱或無法進行含量測定的，也可依次選臣藥及其他藥測定含量。如含有毒性藥，也應(yīng)建立含量測定項目。 2、有效成分或指標成分清楚的，應(yīng)首選測定有效成分或指標成分的含量。有效成分

56、類別清楚的，可測定某一類總成分的含量，如總黃酮、總生物堿、總皂苷等。 3、所測成分應(yīng)歸屬于某一單味藥，若兩味或兩味以上藥材均含有的成分，則不應(yīng)選為定量指標。如處方中有黃連和黃柏，最好不選小檗堿作為定量的成分。 4、待測成分應(yīng)盡量與中醫(yī)理論、用藥的功能主治相近。如山楂在制劑中若以消食健胃功能為主，應(yīng)測定其有機酸含量，若以治療心血管病為主，則應(yīng)測定其黃酮類成分。如板藍根具有抗病毒的功效，應(yīng)選擇溶于水與乙醇、含量穩(wěn)定的喹唑酮為定量指標。 5、若確實無法進行含量測定的，可選適當溶劑，測定浸出物含量以間接控制其質(zhì)量。溶劑的選擇應(yīng)有針對性，水或乙醇，因其溶出物量太大，一般不選用。如含皂苷類成分可用正丁醇為

57、溶劑測定浸出物含量。揮發(fā)油和脂溶性成分可測定揮發(fā)性醚浸出物含量。（二）中藥制劑含量測定的方法 含量測定是控制中藥制劑質(zhì)量的重要內(nèi)容。目前，中藥制劑的含量測定方法應(yīng)用最多的是色譜法和光譜法，此外，高效毛細管電泳法(HPCE)在中藥制劑分析方面的應(yīng)用日益增加。其他方法如化學(xué)分析法、電化學(xué)分析法等也有應(yīng)用。1高效液相色譜法：HPLC法是一種分離效能高、分析速度快、靈敏度高、應(yīng)用范圍廣的分析方法，其重現(xiàn)性和準確性均優(yōu)于薄層色譜掃描法，是中藥制劑含量測定的首選方法。中國藥典(2010年版)一部收載的中藥制劑，大多采用HPLC法測定含量。（1）色譜條件的選擇中藥制劑分析中，多采用反相高效液相色譜法(RP-

58、HPLC)，即使用非極性的固定相，極性的流動相，使用反相色譜，制劑中極性的附加劑及其他干擾組分先流出，不會停留在柱上污染色譜柱。若分離酸性組分，如黃芩苷、丹參素、甘草酸等，可在流動相中加入適量酸，如醋酸、磷酸，以抑制其離解；對酸性較強的組分，也可使用離子對色譜法，常用的反離子試劑有氫氧化四丁基銨等。若分離堿性組分，如小檗堿、麻黃堿等，多采用反相離子對色譜法，在酸性流動相中加入烷基磺酸鹽、有機酸鹽，也可使用無機陰離子，如磷酸鹽作為反離子。固定相：以十八烷基硅烷鍵合硅膠(ODS)最常用。流動相：常用甲醇-水或乙腈-水的混合溶劑。檢測器：HPLC法應(yīng)用最普遍的檢測器是紫外檢測器。其靈敏度高，線性范圍寬，適宜于在紫外、可