亞低溫對(duì)肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

1、亞低溫對(duì)肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用 摘要：目的探討亞低溫對(duì)肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用機(jī)制。方法將18只犬隨機(jī)分為3組：非缺血對(duì)照組(n=6)、缺血再灌注組(n=6)和亞低溫處理組(肝周充填碎冰塊造成肝臟亞低溫，n=6)。對(duì)各組肝上下腔靜脈血進(jìn)行谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、乳酸脫氫酶(LHD)以及丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化酶(GSH-PX)活性及總抗氧化(TAX)能力測(cè)定。結(jié)果全肝缺血再灌注后ALT，AST，LDH和MDA含量明顯上升(P0.01)，SOD，CAT，GSH-PX活性及TAX能力明顯下降(P0.01)；而亞低溫處

2、理組與缺血再灌注組比較，ALT，AST，LDH和MDA含量明顯下降(P0.01)，SOD，CAT，GSH-PX活性及TAX能力明顯上升(P0.01,P0.05)。結(jié)論亞低溫能增強(qiáng)肝組織自身抗氧化能力，減輕肝缺血再灌注后氧自由基對(duì)肝臟的損傷。關(guān)鍵詞：再灌注損傷/預(yù)防和控制；低溫，人工；肝功能減輕；疾病模型，動(dòng)物分類號(hào)：R619.9；R614.25文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1005-6947(2000)02-0132-03Protective effect of mild hypothermia on liver injury ofhepatic ischemia-reperfusionHE Jin

3、-song, JIANG Li-hua, YANG Xin, XU Ming-qing,LAI Jia-jun, YANG Xian-qun(Department of General Surgery, The Peoples Hospital of Yuebei, Shaoguan, Guangdong 512026, China)LU Xin-sheng(Department of General Surgery, Affiliated Xiangya Hospital, Hunan Medical University, Changsha 410008, China)Abstract：O

4、bjectiveTo study the mechanisms of protective effect of mild hypothermia on hepatic ischemia-reperfusion(I-R) injury. MethodsEighteen dogs were randomly divided into three groups: nonischemic control(C) group(n=6), ischemia-reperfusion(I-R) group(n=6) and mild hypothermia treatment(MHTT) group(n=6).

5、 The measurement were taken in all the three groups for the content of the marker enzymes of liver damage(ALT，AST，LDH) and malondialdehyde(MDA), and activities of superoxide dismutase(SOD), catalase(CAT), glutathione peroxidase(GSH-PX)，total antioxidase(TAX) in inferior vena cava blood above liver.R

6、esultsAftre I-R, the content of ALT, AST, LDH and MDA were significantly elevated(P0.01), SOD, CAT, GSH-PX, ACT activeties declined obviously(P0.01), but the content of ALT，AST，LDH and MDA obviously lowered in MHTT group than that in I-R group(P0.01); and the content of SOD,CAT, GSH-PX, ACT activeti

7、es were obviously higher than that in I-R group(P0.01, P0.05). ConclusionsMild hypothermia may enhance liver ability of oxidation-resistance, and reduce the oxygen free radical injury to liver after ischemia-reperfusion.Key words：REPERFUSION INJURY/prev；HYPOTHERMIA,ARTIFICAL；INDUCED LIVER FUNCTION；D

8、ISEASES MODELS,ANIMAL肝臟缺血再灌注(I/R)損傷是臨床上經(jīng)常遇到的問題，預(yù)防和治療I/R損傷是近年來臨床和實(shí)驗(yàn)研究的熱點(diǎn)。低溫下肝臟缺血時(shí)間可延長(zhǎng)到120min，中度低溫對(duì)肝臟的保護(hù)作用效果確切1，2，但因其在應(yīng)用中難于管理和引起的并發(fā)癥而受到限制3。近年來，將亞低溫應(yīng)用于臨床取得了一些滿意結(jié)果，亞低溫對(duì)腦I/R損傷的保護(hù)作用得到證實(shí)4，對(duì)于亞低溫能否在肝臟I/R后有效地抑制氧自由基生成和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，作者在犬全肝I/R損傷模型上對(duì)亞低溫進(jìn)行了研究。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)方法與動(dòng)物分組健康成年雜種犬18條，雌雄不拘，體重9.511.5kg，采用靜脈注射硫賁妥鈉(1525

9、mg/kg)后氣管插管，控制呼吸，潮氣量為1015ml/kg，安置直腸測(cè)溫和肝中央測(cè)溫探頭，溫度監(jiān)測(cè)采用WD-89-型精密溫度監(jiān)測(cè)儀；行左側(cè)股動(dòng)脈插管測(cè)平均動(dòng)脈壓。采用Pringle氏法復(fù)制肝缺血再灌注犬動(dòng)物模型。將18只犬隨機(jī)分為3組：(1)A組非缺血對(duì)照組(n=6)，開腹后即抽取肝上下腔靜脈血檢測(cè)。(2)B組缺血再灌注組(n=6)，游離第一肝門，以止血帶繞扎肝十二指腸韌帶，阻斷入肝血流造成肝缺血，松開止血帶為肝臟再灌注，肝臟缺血持續(xù)60min，再灌注30min抽取肝上下腔靜脈血檢測(cè)。(3)C組亞低溫組(n=6)，全肝缺血前肝周充填碎冰塊造成肝臟亞低溫(3335)，其他處理同B組。1.2主要

10、試劑谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)以及丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化酶(GSH-PX)活性及總抗氧化(TAX)能力試劑盒均購(gòu)自南京聚力生物醫(yī)學(xué)工程研究所，測(cè)定嚴(yán)格按隨試劑盒提供的說明書進(jìn)行操作。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法兩組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，多樣本均數(shù)比較用單因素方差分析，均數(shù)間兩兩比較用q檢驗(yàn)，全部數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS 8.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。2結(jié)果2.1溫度A組實(shí)驗(yàn)過程直腸溫維持在36.237.6，平均36.9；肝中央溫度36.037.0，平均36.6。B組肝門阻斷前直腸溫36.337.8，平均37.0；肝中央溫度36.2

11、37.2，平均36.8；阻斷60min后直腸溫36.037.5，平均36.6；肝中央溫度34.535.6，平均35.2；再灌注30min后直腸溫36.237.8，平均37.0；肝中央溫度36.037.2，平均36.7。C組降溫前直腸溫36.237.8，平均37.0；肝中央溫度36.137.2，平均36.7；降溫后維持直腸溫33.535.8，平均34.7；肝中央溫度直腸33.135.30，平均34.3。2.2股動(dòng)脈壓A組維持在118.5138mmHg，平均127.5mmHg。B組阻斷時(shí)為3960mmHg，平均51.8mmHg；再灌后為6390.8mmHg，平均75.8mmHg。C組阻斷時(shí)為39.

12、861.5mmHg，平均51.8mmHg；再灌后為64.591.5mmHg，平均77.32mmHg。2.3肝上下腔靜脈血ALT，AST，LDH值B，C組ALT，AST，LDH均明顯高于A組(P0.01)，但C組ALT，AST，LDH明顯低于B組(P0.01)(表1)。表13組肝上下腔靜脈血ALT，AST，LDH比較(U/L)組別nALTASTLDHP值A(chǔ)646.248.3191.4112.53249.3044.590.010.01B61263.74113.572661.95244.513233.54162.52C6798.99119.791612.03105.872938.7374.64 B，

13、C組ALT，AST，LDH均明顯高于A組(P0.01)，但C組ALT，AST，LDH明顯低于B組(P0.01)(表1)。2.4肝上下腔靜脈血MDA和SOD，CAT，GSH-PX，TAX值B，C組MDA明顯高于A組(P0.01)，但C組明顯低于B組(P0.01)；B，C組SOD，CAT，GSH-PX，TAX均明顯低于A組(P0.01)，但C組明顯高于B組(P0.01，P0.05)(表2)。 表23組肝上下腔靜脈血MDA和SOD，CAT，GSH-PX，TAX比較組別nMDA(nmol/ml)SOD(MU/ml)CAT(U/g)GSH-PX(U/L)TAX(U/ml)P值A(chǔ)65.090.70100.

14、259.2831.344.93187.336.6025.583.100.010.05B613.091.7876.065.7114.144.2397.157.1611.831.65C68.890.5286.468.4922.103.34125.876.2518.981.23 3討論 組織缺血時(shí)，可以產(chǎn)生大量的氧自由基，作用于生物膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化，產(chǎn)生MDA等有毒醛基產(chǎn)物攻擊細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致組織細(xì)胞損害5。肝臟缺血再灌注損傷中，氧自由基的大量生成和脂質(zhì)過氧化的毒性作用可能是肝損害的重要原因之一。本研究結(jié)果顯示，缺血對(duì)照組ALT，AST，LDH和MDA含量顯著增高，反映了肝臟缺血再灌注后肝組

15、織脂質(zhì)過氧化反應(yīng)大為增強(qiáng)，肝組織損害明顯，而SOD，CAT，GSH-PX活性和TAX能力明顯降低，則可能與缺血再灌注后肝組織氧自由基增加，SOD被部分消耗，以及氧自由基及其代謝產(chǎn)物破壞抗氧化酶，總抗氧化能力下降有關(guān)。研究表明，低溫可以從多途徑、多環(huán)節(jié)抑制氧自由基的產(chǎn)生及其引發(fā)的連鎖反應(yīng)4。在肝臟缺血再灌注中，低溫可能通過抑制肝組織氧自由基的產(chǎn)生，減少對(duì)SOD的消耗；肝細(xì)胞內(nèi)富含CAT，GSH-PX等多種抗氧化酶6，低溫亦可能通過保護(hù)CAT，GSH-PX等抗氧化酶來對(duì)SOD起保護(hù)作用，通過增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，從而減輕脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，使脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物減少，減輕對(duì)細(xì)胞的損害7。近年來的研究表

16、明，亞低溫對(duì)腦等I/R所致氧自由基損害有一定的保護(hù)作用4，本研究結(jié)果顯示，亞低溫對(duì)肝臟I/R損傷同樣有保護(hù)作用，亞低溫組MDA明顯低于缺血再灌注組，而SOD，CAT，GSH-PX活性及總抗氧化能力卻明顯增高，證實(shí)了亞低溫同樣可有效抑制肝臟因I/R所致的肝組織脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，減輕氧自由基生成所致的損害，對(duì)肝臟I/R損傷有保護(hù)作用。本研究結(jié)果與Pichlmayr等1報(bào)道的中度低溫對(duì)肝臟的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似，為臨床上將亞低溫用于預(yù)防和治療肝臟I/R損傷提供了有力的依據(jù)。作者簡(jiǎn)介：何勁松(1968-)，男，湖南永州人，廣東省粵北人民醫(yī)院主治醫(yī)師，碩士，從事肝膽胰方面研究。作者單位：何勁松(廣東省粵北

17、人民醫(yī)院普外科，廣東韶關(guān)512026)姜立華(廣東省粵北人民醫(yī)院普外科，廣東韶關(guān)512026)楊新(廣東省粵北人民醫(yī)院普外科，廣東韶關(guān)512026)徐明清(廣東省粵北人民醫(yī)院普外科，廣東韶關(guān)512026)賴家駿(廣東省粵北人民醫(yī)院普外科，廣東韶關(guān)512026)楊獻(xiàn)群(廣東省粵北人民醫(yī)院普外科，廣東韶關(guān)512026)呂新生(湖南醫(yī)科大學(xué)附屬湘雅醫(yī)院普外科，湖南長(zhǎng)沙410008)參考文獻(xiàn)：1Pichlmayr R, Hauss HG, Vbernatis G, et al. Technique and preliminary results of extracorporeal liver surg

18、ery(bench procedure) and of surgery on the insitu perfused liverJ. Br J Surg, 1990,77(1):2126.2曹繡虎，黃潔夫.常溫與低溫灌注下的全肝血流阻斷比較實(shí)驗(yàn)J.中山醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1990，2(1)：4951.3Safer P. Cerebral resuscitation after cardiac arrest: research initiativers and future directionsJ. Ann Emerg Med, 1993,22(5):824828.4郭曲練，潭秀娟，蔡宏偉，等.亞低溫