銀杏外種皮多糖的免疫活性研究

1、銀杏外種皮多糖的免疫活性研究                       作者：仰榴青 茆廣華 吳向陽 范群艷 朱小宦【摘要】  目的研究脫蛋白和未脫蛋白銀杏外種皮粗多糖（GBEP）對(duì)免疫功能低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。方法采用藥物方法建立免疫抑制小鼠動(dòng)物模型，利用腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、血清溶血素抗體生成實(shí)驗(yàn)及臟器系數(shù)的變化，研究銀杏外種皮粗多糖對(duì)免疫抑制小鼠免疫

2、功能的影響。結(jié)果銀杏外種皮粗多糖可增強(qiáng)免疫抑制小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能、血清溶血素抗體水平以及能對(duì)抗環(huán)磷酰胺引起的脾臟萎縮。結(jié)論 銀杏外種皮粗多糖具有增強(qiáng)小鼠免疫功能的作用，脫蛋白粗多糖的免疫活性稍好于未脫蛋白多糖。 【關(guān)鍵詞】  銀杏外種皮 多糖 環(huán)磷酰胺 免疫調(diào)節(jié)    Abstract：ObjectiveTo study immune regulatory activity of the crude polysaccharides with or without protein from Ginkgo biloba Sarcotesta in i

3、mmune depressive mice. MethodsThe model of immune depressive mice was established with cyclophosphamide.The function of macrophage in abdominal activity was measured. Spectrophotometric determination was adopted to evaluate the ability of antibody producing cell. The index of immune organ was used t

4、o observe the changes of immune organ''s weight. ResultsIt showed the GBEP could enhance mouse macrophage to swallow chicken erythrocytes，significantly enhanced the content of haemolysin in mouse body and significantly increased spleen index in immuno  suppression mice.ConclusionGBEP ca

5、n enhance immune function of  immune deficient mice, and the crude polysaccharides without protein has much better immune activity than that with protein.    Key words：Ginkgo biloba Sarcotesta ；  Polysaccharide；  Cyclophosphamide；  Immune adjustability  &

6、#160; 植物活性多糖具有多種重要的生理功能，主要有誘導(dǎo)體內(nèi)免疫物質(zhì)產(chǎn)生、提高機(jī)體的免疫作用、抑制腫瘤的生長和擴(kuò)散、降血糖和降血脂等作用。論文論文參考網(wǎng)近年來研究表明，銀杏外種皮未脫蛋白粗多糖具有殺死腫瘤細(xì)胞、增加SOD的形成、提高機(jī)體免疫細(xì)胞活性和增強(qiáng)機(jī)體免疫功能等作用14，但是關(guān)于脫蛋白銀杏外種皮多糖的活性研究未見報(bào)道。本文研究了銀杏外種皮粗多糖和脫蛋白多糖對(duì)免疫抑制小鼠免疫功能的影響，以期為銀杏外種皮多糖的研究開發(fā)提供科學(xué)理論依據(jù)。    1  器材    1.1  儀器貝克曼DU640型紫外分光光度計(jì)，美

7、國貝克曼庫爾特公司；隔水式電熱水浴箱，杭州藍(lán)天化驗(yàn)儀器廠；BH-2型OLYMPUS顯微鏡，日本奧林巴斯；蔡氏熒光顯微鏡，德國蔡氏公司。    1.2  材料與試劑銀杏外種皮未脫蛋白粗多糖，用GBEP-1表示，多糖含量為38.49%；脫蛋白銀杏外種皮粗多糖，用GBEP-2表示，多糖含量為42.80%，兩者均為本實(shí)驗(yàn)室制備；小鼠（清潔級(jí)KM小鼠），購于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司, 合格證號(hào):SCXK（滬）2002-0010號(hào),飼養(yǎng)環(huán)境為清潔級(jí)，合格證號(hào):SYXK（蘇）2002-0007；環(huán)磷酰胺粉劑（CTX），江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司；黃芪注射液，成都地

8、奧九泓制藥廠；生理鹽水（氯化鈉注射液），南京小營制藥廠；肝素鈉注射液，江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司；姬姆薩染液，南京建成生物工程研究所。    5%雞紅細(xì)胞懸液：由市售肉雞采血約10 ml，以肝素生理鹽水抗凝，再按11加入注射用0.9% NaCl溶液，充分混勻洗滌后，3 000 r/min離心15 min，棄去上清液，余下的紅細(xì)胞再洗滌23次。取洗凈離心后的紅細(xì)胞4 ml，用0.9% NaCl溶液配制成5%濃度，現(xiàn)配現(xiàn)用57。10%補(bǔ)體：取5只不同窩的豚鼠血，分離并合并血清，用生理鹽水將血清配成10%濃度保存?zhèn)溆谩?#160;   2 

9、; 方法    2.1  小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)  取小鼠70只，體重1822 g，隨機(jī)分為7組，每組10只，各半，分別為正常組和CTX模型組（蒸餾水20 ml/kg），陽性藥黃芪注射液組（0.1 ml/只），GBEP-1大、小劑量組（300，100 mg/kg），GBEP-2大、小劑量組（300，100 mg/kg）。除陽性藥組（肌肉注射）外，各組動(dòng)物灌胃（ig）給藥，給藥劑量均為20 ml/kg，每日ig 1次，連續(xù)給藥7 d，第5天除正常對(duì)照組外，每組動(dòng)物腹腔注射CTX 40 mg/kg(0.1 ml/10 g),第6天各重復(fù)注射1次。

10、于最后1次給藥后1 h，每鼠腹腔注射5% 雞紅細(xì)胞混懸液0.5 ml/只，給雞紅細(xì)胞后2 h，處死小鼠。按文獻(xiàn)5，6方法測腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，按如下公式計(jì)算得吞噬百分率和吞噬指數(shù)。論文參考網(wǎng)    吞噬百分率（%）=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)200個(gè)巨噬細(xì)胞×100%    吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞數(shù)200個(gè)巨噬細(xì)胞    2.2  小鼠溶血素抗體生成實(shí)驗(yàn)及對(duì)免疫器官的影響取小鼠70只，體重1822 g，隨機(jī)分為7組，每組10只，各半。分別為正常組和CTX模型組（蒸餾水20 ml/k

11、g）、陽性藥黃芪注射液組（0.1 ml/只）、GBEP-1大、小劑量組（300，100 mg/kg）,GBEP-2大、小劑量組（300，100 mg/kg）。除陽性藥組（肌肉注射）外，各組動(dòng)物灌胃（ig）給藥。給藥劑量均為20 ml/kg，每日ig 1次，連續(xù)給藥12 d，于給藥后第5天各組動(dòng)物腹腔注射5%雞紅細(xì)胞懸液0.2 ml /只進(jìn)行免疫，于給藥后10 d除正常對(duì)照組外，每組動(dòng)物腹腔注射CTX 40 mg/kg(0.1 ml/10 g)，第11天重復(fù)注射1次，末次給藥后2 h，小鼠眼眶后靜脈叢取血，按文獻(xiàn)57方法測溶血素形成。脫頸處死取血后的小鼠，稱其體重，然后取其胸腺和脾臟稱重，計(jì)算胸

12、腺系數(shù)和脾臟系數(shù)。    3  討論    3.1  對(duì)小鼠吞噬細(xì)胞吞噬功能的影響由表1可見，CTX構(gòu)建的模型組，其吞噬百分率、吞噬指數(shù)比正常組低（P<0.01）,說明環(huán)磷酰胺能顯著降低小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能，對(duì)非特異性免疫功能有較強(qiáng)的抑制作用；陽性藥組的吞噬百分?jǐn)?shù)、吞噬指數(shù)高于模型組（P<0.01或P<0.001），說明所選用的陽性藥黃芪注射液能顯著增強(qiáng)免疫抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能，并使其恢復(fù)到正常水平；銀杏外種皮粗多糖（GBEP-1）小劑量組、銀杏外種皮脫蛋白多糖（GBEP-2）小劑

13、量組的吞噬百分?jǐn)?shù)、吞噬指數(shù)與模型組均沒有顯著性差異，而GBEP-1大劑量組、GBEP-2大劑量組的吞噬百分?jǐn)?shù)、吞噬指數(shù)與模型組有顯著差異（P<0.05或P<0.01）。GBEP-1，GBEP-2給藥組的吞噬百分?jǐn)?shù)、吞噬指數(shù)都有進(jìn)一步增強(qiáng)的趨勢，并有一定的量-效關(guān)系。表1  GBEP-1和 GBEP-2對(duì)小鼠吞噬細(xì)胞吞噬功能的影響    3.2  對(duì)小鼠溶血素水平的影響由表2可見，CTX構(gòu)建的模型組的溶血素水平比正常組降低（P<0.001）,說明環(huán)磷酰胺能顯著降低小鼠的血清溶血素水平，對(duì)體液免疫功能有較強(qiáng)的抑制作用；陽性藥組的溶

14、血素水平高于模型組（P<0.001）,說明所選用的陽性藥黃芪注射液能顯著增強(qiáng)免疫抑制小鼠的血清溶血素水平，并使其恢復(fù)到正常水平；GBEP-1，GBEP-2小劑量組的溶血素水平與模型組沒有顯著的差異，而GBEP-1，GBEP-2大劑量組的溶血素水平與模型組有較大顯著差異（P<0.001）。隨著劑量的增加，GBEP-1，GBEP-2給藥組的血清溶血素抗體水平都有進(jìn)一步增大的趨勢，并具有一定的量-效關(guān)系。    3.3  對(duì)小鼠免疫器官臟器系數(shù)的影響由表3可見，CTX構(gòu)建的模型組，其胸腺系數(shù)、脾臟系數(shù)比正常組降低（P<0.001或P<0

15、.05），說明環(huán)磷酰胺能引起小鼠的免疫器官萎縮；陽性藥組的胸腺指數(shù)與模型組的無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但其脾臟系數(shù)與模型組的有顯著性差異（P<0.01）,說明陽性藥黃芪注射液不能對(duì)抗環(huán)磷酰胺引起的胸腺萎縮，但能對(duì)抗環(huán)磷酰胺引起的脾萎縮。GBEP-1大、小劑量和GBEP-2小劑量組對(duì)于胸腺指數(shù)與模型組無顯著差異，GBEP-2大劑量組對(duì)于胸腺指數(shù)與模型組有顯著差異（P<0.05）；GBEP-1 和GBEP-2的大、小劑量組脾臟系數(shù)與模型組均有顯著差異（P<0.05或P<0.01 或P<0.001）。表2  GBEP-1和 GBEP-2對(duì)小鼠溶血素水平（OD值）的影響表3

16、  GBEP-1和 GBEP-2對(duì)小鼠免疫器官的影響(±s)與模型組比較，*P<0.05，*P<0.01，*P<0.001；=10    植物多糖近年來日益受到國內(nèi)外學(xué)者的重視。在探討中藥補(bǔ)益作用及其物質(zhì)基礎(chǔ)的過程中，植物多糖被看作是有廣泛免疫活性的有效成分。對(duì)銀杏外種皮多糖免疫活性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，銀杏外種皮粗多糖對(duì)免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用一方面促進(jìn)免疫器官的修復(fù)，另一方面通過增強(qiáng)腹腔巨噬細(xì)胞活性和通過體液免疫途徑來實(shí)現(xiàn)，表明其免疫活性較為廣泛。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為銀杏外種皮粗多糖的補(bǔ)益作用提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為銀杏外種皮粗多糖補(bǔ)益作用的機(jī)理研究提供了重要線索。【參考文獻(xiàn)】  1 仰榴青，徐佐旗，吳向陽，等.銀杏多糖的研究進(jìn)展J.食品科學(xué)，2004，25（11）：372.2 吳向陽，茆廣華，仰榴青，等.銀杏外種皮粗多糖提取工藝研究J.食品科學(xué)，2006，27（10）：372.3 賈玲昌，許愛華，宋根萍，等.2種銀杏外種皮多糖的成分及藥效學(xué)比較研究J.中國新藥雜志，2