三化湯對腦缺血-再灌注老齡大鼠胃腸組織Na K ATP酶

1、    三化湯對腦缺血-再灌注老齡大鼠胃腸組織Na+K+ATP酶活性及Ca2+ATP酶活性的影響作者：樊凱芳，唐迎雪，曹淑霞【摘要】  目的觀察三化湯對腦缺血-再灌注老齡大鼠胃腸組織Na+K+ATP酶活性、Ca2+ATP酶活性的影響。方法將大鼠隨機(jī)分為正常對照組（空白組）、模型組、三化湯組、西藥對照組（尼莫地平）、中成藥對照組（血栓心脈寧）。采用雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎方法制備腦缺血模型，腦缺血1 h后，再灌注30 min。取出各組大鼠胃組織和小腸組織各520 mg制成勻漿，測定ATP酶（Na+K+ATP酶、Ca2+ATP酶）活性。結(jié)果與空白

2、組比，模型組胃腸組織Na+K+ATP酶活性、Ca2+ATP酶活性明顯降低（P0.01）；與模型組比，用藥各組胃腸組織Na+K+ATP酶活性、Ca2+-ATP酶活性均明顯升高（P0.05）；其中三化湯組胃腸組織Na+K+ATP酶活性明顯高于尼莫地平組（P0.05），Ca2+ATP酶活性明顯高于血栓心脈寧組（P0.05）。結(jié)論三化湯能明顯升高腦缺血再灌注老齡大鼠胃腸組織Na+K+ATP酶活性、Ca2+ATP酶活性，對腦缺血再灌注老齡大鼠胃腸損傷有一定保護(hù)作用。 【關(guān)鍵詞】  三化湯 腦缺血-再灌注老齡大鼠 胃腸組織Na+ K+ ATP酶活性 Ca2+ ATP酶活性中風(fēng)急性期除有

3、不同程度的神志改變等腦損傷外，常并發(fā)多個器官功能損傷，其中胃腸功能損傷發(fā)生率較高13，而胃腸功能的衰竭又可加重原有腦部病灶的損傷，并可使機(jī)體各器官受累，甚至導(dǎo)致死亡2。因此，積極防治中風(fēng)急性期并發(fā)的胃腸損傷對于提高中風(fēng)病的整體 治療 水平具有實際意義。本實驗以老齡大鼠為對象，選具有調(diào)氣作用的三化湯，從ATP酶活性（Na+K+-ATP酶、Ca2+ATP酶）方面研究其對老齡大鼠腦缺血-再灌注胃腸組織損傷的影響，為中醫(yī)藥防治中風(fēng)繼發(fā)胃腸損傷的應(yīng)用及其作用機(jī)制提供依據(jù)。 1 材料與儀器 1.1 動物55只2528周齡清潔級Wistar大鼠，體重400500g，雌雄各半。由上海斯來克實驗動物有限責(zé)任公司

4、提供，符合普通實驗動物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)合格證號：SCXK(滬)2003-0003。1.2 藥物1.2.1 中藥材大黃、枳實、厚樸、羌活均購于山東中醫(yī)藥大學(xué)門診部。經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室鑒定，分別為蓼科多年生草本植物掌葉大黃Rheum palmatum L.的根莖，蕓香科植物酸橙Citrus aurantium L.的干燥幼果，木蘭科植物厚樸Magnolia officinalis Rehd. et Wils.的干燥根皮，傘形科植物羌活Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang的干燥根莖。1.2.2 制劑制備三化湯流浸膏：枳實、厚樸、羌活各120 g，加2

5、.5倍體積的水，浸泡1 h，提取揮發(fā)油10 h后，加入等份的大黃120 g煎煮20 min濾出。同法煎煮3遍，混合濾出液，濃縮至每毫升制劑相當(dāng)于1g生藥，加入揮發(fā)油，滅菌，4冰箱保存?zhèn)溆谩?.2.3 中西對照藥尼莫地平：山東新華制藥股份有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H10910080；血栓心脈寧：吉林省輝南長龍生化藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字Z22024485。中成藥和西藥購于濟(jì)南宏濟(jì)堂藥店。1.3 儀器TN型托盤式扭力天平(上海第二天平儀器廠)；漩渦混勻器(江蘇省寶應(yīng)縣水泗實驗設(shè)備廠)； 電子 恒溫水浴鍋(黃驊市卸甲綜合電器廠)；冰箱(ARCTIC)；低速自動平衡離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；721

6、分光光度計(山東高密分析儀器廠)。1.4 試劑0.3戊巴比妥鈉（上海化學(xué)試劑廠，分析純，批號：051028）；冰乙酸（上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站經(jīng)銷，優(yōu)級純）；甲醛（濟(jì)南魯康化學(xué) 工業(yè) 有限公司，分析純，批號：059611182）；0.9生理鹽水（濟(jì)南永寧制藥股份有限公司，批號：0021100）；ATP酶（Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶）測試盒，購于南京建成生物工程研究所。 2 方法 2.1 分組將實驗動物隨機(jī)分為：正常對照組（空白組），模型組，三化湯方組，尼莫地平組，血栓心脈寧組。2.2 給藥方法常規(guī)飼養(yǎng)一周后開始給藥，藥物劑量根據(jù)人鼠體表面積折算等效比率計量表4，按成人(體重70

7、kg)臨床用量的10倍換算，正常對照組、模型組以生理鹽水4 ml/kg灌胃；三化湯組每只大鼠以中藥4 ml/kg灌胃；西藥對照組以尼莫地平片劑6 mg/kg灌胃；中成藥對照組以血栓心脈寧0.72 g/kg灌胃。以上各組均為1次/d，灌胃10 d。2.3 模型建立與取材2.3.1 建立模型參照改良的Pulsinelli法5，采用雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎法，分離雙側(cè)頸總動脈，用無損傷性動脈夾夾閉1 h，造成前腦(頸總動脈的供血區(qū))缺血模型；再灌30 min造成腦缺血-再灌注腦損傷模型。2.3.2 取材取每組大鼠胃組織和小腸組織各520 mg置勻漿器中，加無水乙醇與生理鹽水按19比例制成10的勻漿，1 00

8、01 500 r/min離心10 min，取上清0.2ml加0.8ml生理鹽水稀釋成2的勻漿，測定ATP酶（Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶）活性。以上測定嚴(yán)格按試劑盒要求操作。2.4 實驗統(tǒng)計方法實驗數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計分析處理，以±s表示，采用方差分析。 3 結(jié)果 3.1 對腦缺血-再灌注老齡大鼠胃組織ATP酶（Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶）活性的影響結(jié)果見表1。表1 腦缺血-再灌注老齡大鼠胃組織ATP酶活性的變化（略）由表1可見，Na+-K+-ATP酶：與空白組比，模型組Na+-K+-ATP酶活性明顯降低（P0.01）；與模型組比，用

9、藥各組Na+-K+-ATP酶活性均明顯升高（P0.05，P0.01），其中三化湯組、血栓心脈寧組Na+-K+-ATP酶活性明顯高于尼莫地平組（P0.05）；三化湯組、血栓心脈寧組間無顯著性差異（P0.05）。Ca2+-ATP酶：與空白組比，模型組Ca2+-ATP酶活性明顯降低（P0.01）；與模型組比，用藥各組Ca2+-ATP酶活性均顯著升高（P0.05，P0.01）；三化湯組、尼莫地平組Ca2+-ATP酶活性明顯高于血栓心脈寧組（P0.05）；三化湯組、尼莫地平組間無顯著性差異（P0.05）。3.1 對腦缺血-再灌注老齡大鼠腸組織ATP酶（Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP）酶活性的影

10、響結(jié)果見表2。表2 腦缺血-再灌注老齡大鼠腸組織ATP酶活性的變化（略）由表2可見，Na+-K+-ATP酶：與空白組比，模型組Na+-K+-ATP酶活性明顯降低（P0.01）；與模型組比，用藥各組Na+-K+-ATP酶活性均明顯升高（P0.05，P0.01）；三化湯組Na+-K+-ATP酶活性明顯高于血栓心脈寧組、尼莫地平組（P0.05）。Ca2+-ATP酶：與空白組比，模型組Ca2+-ATP酶活性明顯降低（P0.01）；與模型組比，用藥各組Ca2+-ATP酶活性均明顯升高（P0.05，P0.01）；三化湯組、尼莫地平組Ca2+-ATP酶活性明顯高于血栓心脈寧組（P0.05）；三化湯組、尼莫地

11、平組間無顯著性差異（P0.05）。 4 討論  ATP酶是存在于組織細(xì)胞及細(xì)胞器生物膜上的一種蛋白酶，其在物質(zhì)運送、能量轉(zhuǎn)換、信息傳遞以及維持細(xì)胞膜的完整、組織代謝等方面具有重要的意義，可作為代謝紊亂及損傷組織恢復(fù)能力的可靠指標(biāo)。ATP酶是逆離子梯度進(jìn)行細(xì)胞膜內(nèi)外轉(zhuǎn)運的離子泵，其中重要的為Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶。Na+-K+-ATP酶是位于細(xì)胞膜上的一種糖蛋白，是重要的生物酶。其在細(xì)胞膜上的意義是：由鈉泵活動造成的細(xì)胞內(nèi)高K+，是許多代謝反應(yīng)進(jìn)行的必要條件；如果細(xì)胞允許大量Na+進(jìn)入膜內(nèi)，由于滲透壓的關(guān)系，必然會導(dǎo)致過多水分進(jìn)入膜內(nèi)，引起細(xì)胞的腫脹，進(jìn)而

12、破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)；能建立一種勢能貯備，為細(xì)胞的主動轉(zhuǎn)運提供條件。Ca2+-ATP酶也是一類廣泛存在于細(xì)胞膜上的重要膜結(jié)合酶，它可以水解ATP，使細(xì)胞內(nèi)Ca2+泵到細(xì)胞外，以維持細(xì)胞內(nèi)相對較低的Ca2+濃度，這是維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的重要機(jī)制之一，也是細(xì)胞功能得以正常發(fā)揮的基礎(chǔ)，Ca2+-ATP酶活性的降低可引起細(xì)胞的離子跨膜轉(zhuǎn)運障礙及胞漿內(nèi)Ca2+的積聚，導(dǎo)致細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的異常。對胃腸組織作用而言，局部的Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶是胃腸細(xì)胞組織主動轉(zhuǎn)運的關(guān)鍵，是組織抗損傷的重要屏障。腦缺血-再灌注后引起胃腸組織能量代謝紊亂和離子平衡失調(diào)，ATP短缺，膜離子泵功能障礙，K+、Na

13、+、Ca2+分布異常，最終造成胃腸粘膜細(xì)胞腫脹、壞死等損傷。本實驗研究結(jié)果表明，模型組比空白組胃腸組織Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性均降低；用藥各組比模型組胃腸組織Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性均明顯升高，其中三化湯組胃腸組織Na+-K+-ATP酶活性明顯高于尼莫地平組，Ca2+-ATP酶活性明顯高于血栓心脈寧組，說明三化湯在增強(qiáng)腦缺血-再灌注老齡大鼠胃腸組織Na+-K+-ATP酶活性方較尼莫地平明顯、在增強(qiáng)Ca2+-ATP酶活性方面較血栓心脈寧明顯，提示三化湯對中風(fēng)急性期并發(fā)的胃腸損傷具有較好的保護(hù)作用?！?參考  文獻(xiàn) 】 1陳德昌，景炳文神經(jīng)源性急性應(yīng)激性胃腸黏膜病變J 中國 實用內(nèi)科雜志，1997，17(11)： 6412周華東，陳曼娥急性腦