第六章芳酸類非甾體抗炎藥物的分析

1、第六章 芳酸類非甾體抗炎藥物的分析特殊雜質(zhì)與檢查 3結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1鑒別試驗(yàn)2含量測(cè)定含量測(cè)定4又稱又稱: :解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥（NSAID），阿司），阿司匹林類藥物匹林類藥物 具有解熱、鎮(zhèn)痛作用具有解熱、鎮(zhèn)痛作用 多數(shù)有抗炎、抗風(fēng)濕作用多數(shù)有抗炎、抗風(fēng)濕作用 共同的作用基礎(chǔ)共同的作用基礎(chǔ) 抑制前列腺素（PGs）的）的生物合成性質(zhì)性質(zhì) （一）物理性質(zhì)（一）物理性質(zhì) （1 1）固體）固體 具有一定的熔點(diǎn)具有一定的熔點(diǎn) （2 2）溶解性）溶解性 游離芳酸類藥物幾乎游離芳酸類藥物幾乎不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑；芳酸不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑；芳酸堿金屬鹽及其它鹽易溶于水，難溶堿金屬鹽及其它鹽易溶于

2、水，難溶于有機(jī)溶劑。于有機(jī)溶劑。 （二）化學(xué)性質(zhì) 1. 酸性：芳酸具游離羧基，呈酸性，其pKa在36之間，屬中等強(qiáng)度的酸或弱酸； 鄰位有X、NO2、OH等吸電子取代基存在使酸性增強(qiáng)；若羧基不直接與苯環(huán)相連，屬于脂肪酸類，酸性較弱；酰胺結(jié)構(gòu)，無(wú)明顯酸性。 2. 水解性：酯鍵、酰胺鍵可水解，利用其水解得到酸和醇的性質(zhì)可進(jìn)行鑒別；利用芳酸酯水解定量消耗氫氧化鈉的性質(zhì)，芳酸酯類藥物可用水解后剩余滴定法測(cè)定含量；芳酸酯類藥物還應(yīng)檢查因水解而引入的特殊雜質(zhì)。 3. UV 3. UV 4. 取代芳酸類藥物可利用其取代基的性質(zhì)進(jìn)行鑒別和含量測(cè)定。如具有酚羥基的藥物可用FeCl3反應(yīng)鑒別。具芳伯氨基的藥物可用重

3、氮化偶合反應(yīng)鑒別、亞硝酸鈉滴定法測(cè)定含量。 第二節(jié) 鑒別試驗(yàn) 一、FeCl3反應(yīng) 具酚羥基或水解后能產(chǎn)生酚羥基的藥物具酚羥基或水解后能產(chǎn)生酚羥基的藥物 OHOHOOOOFeOH+ FeCl3+ H2O+ 3HCl紫堇色阿司匹林：紫堇色阿司匹林：紫堇色雙水楊酯：紫色雙水楊酯：紫色二氟尼柳：深紫色二氟尼柳：深紫色均通過(guò)產(chǎn)生水楊酸與三氯化鐵反應(yīng)顯均通過(guò)產(chǎn)生水楊酸與三氯化鐵反應(yīng)顯色色水楊酸反水楊酸反應(yīng)應(yīng)pH4-6 對(duì)乙酰氨基酚與三氯化鐵顯藍(lán)紫色HONCH3OH對(duì)乙酰胺基酚 ParacetamolFeCl3+Fe1/3ONCH3OH+HCl藍(lán)紫色NSOHCH3NOONOH吡羅昔康 PiroxicamNS

4、OHCH3NOOOSNCH3H美洛昔康 Meloxicam顯玫瑰紅色顯玫瑰紅色顯淡紫色顯淡紫色酚羥基反酚羥基反應(yīng)應(yīng)二、縮合反應(yīng)顯色CH3HOOO酮洛芬+NHNO2NO2NH2CH3HOON NO2NNO2橙紅色H2SO4-H2OH二苯甲酮結(jié)構(gòu)二苯甲酮結(jié)構(gòu) 三、重氮化-偶合反應(yīng) 對(duì)乙酰氨基酚具有潛在的芳伯氨基，在酸性條件下反應(yīng)可生成對(duì)氨基酚，再與亞硝酸鈉進(jìn)行重氮化反應(yīng)，之后再與堿性-萘酚偶合生成紅色偶氮化合物。NHCOCH3HO+HCl+H2ONH2HOHCl + CH3COOHN2ClHO+2H2ONH2HOHClHNO2+N2ClHO+OHNaOHOHNNOH紅色偶氮化合物水解反應(yīng)水解反應(yīng)產(chǎn)

5、生芳伯產(chǎn)生芳伯胺胺芳伯胺重氮化芳伯胺重氮化偶合反應(yīng)偶合反應(yīng)重氮化重氮化- -偶合反應(yīng)偶合反應(yīng)OCOCH3COONHCOCH3+3H2OHCl貝諾酯HONH2HCl+OHCOOHNaNO2,2HClHON2+Cl-OHNaOHOHNNOH橙紅色四、四、氧化反應(yīng)氧化反應(yīng)甲芬那酸H2SO4深藍(lán)色(O)K2Cr2O7隨即變?yōu)樽鼐G色吲哚美辛H2SO4紫色(O)K2Cr2O7吲哚美辛HCl 綠色(O)K2Cr2O7 NaNO2放置后漸變黃色五、水解反應(yīng)COOHOCOCH3Na2CO3COONaOHCH3COONa+CO2+H2SO4COOHOHH2SO4CH3COOH阿司匹林阿司匹林白色水楊酸白色水楊酸醋

6、酸醋酸可溶于醋酸銨（測(cè)定熔點(diǎn)），水楊酸白色雙水楊酯稀鹽酸NaOH 六、特征元素反應(yīng)： 分子中含有氯、硫等元素可以轉(zhuǎn)化為氯化物或硫化物進(jìn)而進(jìn)行鑒別。 如雙氯芬酸鈉與碳酸鈉熾灼灰化，加水煮沸、濾過(guò)后，顯氯化物的鑒別反應(yīng)。 美洛昔康經(jīng)高溫分解產(chǎn)生H2S氣體，與醋酸鉛生成黑色硫化鉛沉淀。（1） 測(cè)定測(cè)定max ；min。 例如：布洛芬用例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制備溶液制備0.25mg/ml； max ； 265nm, 273nm; min。245nm, 271nm。（2） 測(cè)定測(cè)定max 例如：雙氯芬酸鈉，例如：雙氯芬酸鈉，20g/ml max =276nm; （3） 在在max 處測(cè)定一定

7、濃度供試液的吸收度處測(cè)定一定濃度供試液的吸收度A 。 例如：例如： 20g/ml甲酚鈉酸甲醇液在甲酚鈉酸甲醇液在max =279nm，A=0.690.74； 在在max =350nm，A=0.560.60。 1 1、紫外吸收光譜法、紫外吸收光譜法七、光譜法七、光譜法（4） 在規(guī)定的波長(zhǎng)測(cè)定吸收度比值（即雙波長(zhǎng)吸收度在規(guī)定的波長(zhǎng)測(cè)定吸收度比值（即雙波長(zhǎng)吸收度 比值法）比值法） 例如：對(duì)氨基水楊酸鈉例如：對(duì)氨基水楊酸鈉10g/ml; A265/A299 = 1.501.56 再例如：二氟尼柳再例如：二氟尼柳20g/ml（鹽酸乙醇液）（鹽酸乙醇液）; A251/A315 = 4.24.6 2、 IR

8、：阿司匹林阿司匹林-COOH-OH-COOHPh-C鄰位取代PhN-HO-HN-HPh:C=C芳胺酚 八、色譜法供試品保留時(shí)間供試品保留時(shí)間對(duì)照品保留時(shí)間對(duì)照品保留時(shí)間第三節(jié)第三節(jié) 特殊雜質(zhì)及其檢查法特殊雜質(zhì)及其檢查法一、阿司匹林和雙水楊酯中游離水楊酸及有關(guān)物質(zhì)的檢查一、阿司匹林和雙水楊酯中游離水楊酸及有關(guān)物質(zhì)的檢查ONaCO2加壓，ONaCOONaOHCOOHH+COOHOCOCH3(CH3CO)2OH2SO4,7075 C。ASAOH-CO2副產(chǎn)物水楊酸COOHOOOH雙水楊酯COOHOHCOOHOHHOOOCOOHOOHOOHCOOHCOOHHOOOCOOHHOCOOHOO+COOHOO

9、OCOOH-+HPLC法法淡黃、淡黃、紅棕、紅棕、深棕色深棕色1、阿司匹林中游離水楊酸的檢查 來(lái)源：原料殘存（生產(chǎn)過(guò)程中乙酰化不完全）、水解產(chǎn)生（貯存過(guò)程中水解產(chǎn)生） 用用1%1%冰醋酸甲醇冰醋酸甲醇溶液制備供試品，溶液制備供試品，以防阿司匹林水以防阿司匹林水解解2 2、有關(guān)物質(zhì)的檢查、有關(guān)物質(zhì)的檢查OH(CH3CO)2OOCOCH3+OCOCH3COOHOCOCH3COO+OHCOOHOHCOO醋酸苯酯水楊酸苯酯乙酰水楊酸苯酯HPLC法法3、雙水楊酯中游離水楊酸的檢查 水楊酸+Fe(NO3)3 顯色 在=530nm處測(cè)定吸光度A，規(guī)定供試品溶液的吸光度不得大于水楊酸對(duì)照溶液的吸光度。二、甲芬

10、那酸中2,3-二甲基苯胺的檢查甲芬那酸ClCOOHH3CCH3NH2NHCOOHH3CCH3+CuGC法法三、二氟尼柳中有關(guān)物質(zhì)的檢查FFNH2FFCOCH3FFOCOCH3FFOHFFOHCOOHFF+Cu偶聯(lián)乙?；?CH3CO)2O,AlCl3氧化H2O2水解OH/H-+羧化CO2,CH3ONaTLCHPLC所謂物質(zhì)A和物質(zhì)B的檢查是采用自身對(duì)照法進(jìn)行檢查的相同藥物,不同濃度,相互比較,主點(diǎn)限量四、萘普生的有關(guān)物質(zhì)檢查四、萘普生的有關(guān)物質(zhì)檢查MeOMeOCH3O酰化羧化MeOOHCH3COOH催化氫化MeOCH3COOH2-萘甲醚6-甲氧基-2-萘乙酮2-羥基-2-(6-甲氧基-2-萘基)

11、丙酸萘普生HPLC五、對(duì)乙酰氨基酚中氨基酚和對(duì)氯苯乙酰胺HPLCClNO2NH2HOHONO2HONHCOCH3水解還原?；疌lNHCOCH3一、酸堿滴定法一、酸堿滴定法苯甲酸苯甲酸pKa 4.20水楊酸水楊酸pKa 2.98酸性較強(qiáng)酸性較強(qiáng)COHOHO羧酸鄰位羧酸鄰位-OH-OH，吸電子基團(tuán)，使酸性增加；，吸電子基團(tuán)，使酸性增加；分子內(nèi)氫鍵，更增加了其極性分子內(nèi)氫鍵，更增加了其極性直接滴定Aspirin、丙磺舒丙磺舒(Ch.P. BP. JP等等) 苯甲酸苯甲酸(Ch.P等等)均均采用本法采用本法1.直接滴定法直接滴定法中性乙醇COOHOCOCH3NaOH20以下COONaOCOCH3H2O

12、阿司匹林在水中微溶，易溶于乙醇，固使用阿司匹林在水中微溶，易溶于乙醇，固使用乙醇為溶劑。乙醇為溶劑。中性乙醇：中性乙醇：對(duì)指示劑對(duì)指示劑( (酚酞酚酞) )而言為中性，而言為中性， 可消除滴定誤差可消除滴定誤差2 2、剩余量滴定法、剩余量滴定法NSOHCH3NOOOSNCH3H美洛昔康 Meloxicam本品在甲醇、乙醇及水中極微溶或者幾本品在甲醇、乙醇及水中極微溶或者幾乎不溶，在丙酮中微溶。所以乎不溶，在丙酮中微溶。所以CHP使使用用定量過(guò)量的氫氧化鈉滴定液定量過(guò)量的氫氧化鈉滴定液溶解后，溶解后，再用鹽酸滴定液回滴剩余的氫氧化鈉。再用鹽酸滴定液回滴剩余的氫氧化鈉。烯醇式結(jié)烯醇式結(jié)構(gòu)構(gòu):酸性酸

13、性3.水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法OCOCH3COOH2NaOHH2OOHCOONaCH3COONa2NaOH H2SO4 Na2SO4 2H2O取本品約1.5g，精密稱定，準(zhǔn)確加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，緩緩煮沸10min，放冷，以酚酞為指示劑，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相當(dāng)于45.04mg的C9H9O4USP32-NF27（1）水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法含量% = ( V0-V) FTW 100%T = 0.5 12180.16 = 45.04 (mg/ml)滴定度滴

14、定度滴定度滴定度濃度濃度待測(cè)物反應(yīng)待測(cè)物反應(yīng)系數(shù)系數(shù)滴定液物反滴定液物反應(yīng)系數(shù)應(yīng)系數(shù)滴定液物摩滴定液物摩而質(zhì)量而質(zhì)量空白反應(yīng)體空白反應(yīng)體積積樣品測(cè)定消樣品測(cè)定消耗體積耗體積樣品稱重量樣品稱重量（2）.兩步滴定法兩步滴定法Aspirin片HOCCOOHCH2COOHCH2COOH枸櫞酸枸櫞酸HOCHCOOHCHCOOHHO酒石酸酒石酸水解產(chǎn)物水解產(chǎn)物水楊酸水楊酸HAc第一步：NaOH滴定所有的酸滴定所有的酸：酸性水解產(chǎn)物和酸性穩(wěn)定劑及阿司匹林的游離羧基。第二步：水解后剩余滴定水解后剩余滴定取本品取本品1010片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量( (約相當(dāng)于約相當(dāng)于阿

15、司匹林阿司匹林0.3g)0.3g)，置錐形瓶中，加中性乙醇，置錐形瓶中，加中性乙醇( (對(duì)酚酞指示劑對(duì)酚酞指示劑顯中性顯中性)20ml)20ml，振搖使，振搖使ASAASA溶解，加酚酞指示液溶解，加酚酞指示液3 3滴，滴，滴加滴加NaOHNaOH液液(0.1mol/L)(0.1mol/L)至顯粉紅色，至顯粉紅色，再精密加再精密加NaOHNaOH液液(0.1mol/L)40ml(0.1mol/L)40ml，置水浴上加熱，置水浴上加熱15min15min，并時(shí)時(shí)振搖，迅，并時(shí)時(shí)振搖，迅速放冷至室溫，速放冷至室溫，用用H H2 2SOSO4 4液液(0.05mol/L)(0.05mol/L)滴定滴定，并將滴定的并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每每1ml1ml的的NaOHNaOH液液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于18.02mg18.02mg的的C C9 9H H8 8OO4 4COONaOCOCH3NaOHCOONaOHNaAc H2O2NaOH H2SO4