四大類微生物菌落形態(tài)的比較和識別

1、四大類微生物菌落形態(tài)的比較和識別 一、實驗目的和內容目的：1 熟悉四大類微生物菌落的主要特征2 掌握識別四大類微生物菌落形態(tài)的依據(jù)和要點，并應用于識別未知菌落內容：1 觀察已知的四大類微生物菌落特征2 辨認未知的四大類微生物菌落特征實驗原理掌握識別四大類微生物菌落形態(tài)的要點對于從事菌種的篩選、雜菌的識別和菌種鑒定等項工作都有重要意義。菌落是由某一微生物的少數(shù)細胞或孢子在固體培養(yǎng)基表面繁殖后所形成的子細胞群體，因此，菌落形態(tài)在一定程度上是個體細胞形態(tài)和結構在宏觀上的反映。由于每一大類微生物都有其獨特的細胞形態(tài)，因而其菌落形態(tài)特征也各異。在四大類微生物的菌落中，細菌和酵母菌的形態(tài)較接近，放線菌和霉

2、菌形態(tài)較相似。菌和酵母菌的異同 細菌和多數(shù)酵母菌都是單細胞微生物。菌落中各細胞間都充滿毛細管水、養(yǎng)料和某些代謝產物，因此，細菌和酵母菌的菌落形態(tài)具有尖似的特征，如濕潤、較光滑、較透明、易挑起、菌落正反面及邊緣、中央部位的顏色一致，且菌落質地較均勻等。它們之間的區(qū)別如下：細菌：由于細胞小，故形成的菌落也較小，較薄、較透明且有“細膩”感。不同的細菌會產生不同的色素，因此常會出現(xiàn)五顏六色的菌落。此外，有些細菌具有特殊的細胞結構，因此，在菌落形態(tài)上也有所反映，如無鞭毛不能運動的細菌其菌落外形較圓而凸起；有鞭毛能運動的細菌其菌落往往大而扁平，周緣不整齊，而運動能力特強的細菌則出現(xiàn)更大、更扁平的菌落，其邊

3、緣從不規(guī)則、缺刻狀直至出現(xiàn)遷居性的菌落，例如變形桿菌屬和菌種。具有莢膜的細菌其菌落更粘稠、光滑、透明。莢膜較厚的細菌其菌落甚至呈透明的水珠狀。有芽孢的細菌常因其折光率和其他原因而使菌落呈粗糙、不透明、多皺褶等特征。細菌還常因分解含氮有機物而產生臭味，這也有助于菌落的識別。酵母菌：由于細胞較大（直徑約比細菌大10倍）且不能運動，故其菌落一般比細菌大、厚而且透明度較差。酵母菌產生色素較為單一，通常呈礦蠟色，少數(shù)為橙紅色，個別是黑色。但也有例外，如假絲酵母因形成籍節(jié)狀的假菌絲，故細胞易向外圈蔓延，造成菌落大而扁平和邊緣不整齊等特有形態(tài)。酵母菌因普遍能發(fā)酵含碳有機物而產生醇類，故其菌落常伴有酒香味。2

4、放線菌和霉菌的異同放線菌和霉菌的細胞都是絲狀的，當生長于固體培養(yǎng)基上時有營養(yǎng)菌絲（或基內菌絲）和氣生菌絲的分化。氣生菌絲向空間生長，菌絲之間無毛細管水，因此菌落外觀呈干燥、不透明的絲狀、絨毛狀或皮革狀等特征。由于營養(yǎng)菌絲伸入培養(yǎng)基中使菌落和培養(yǎng)基連接緊密，故菌絲不易被挑起。由于氣生菌絲、孢子和營養(yǎng)菌絲顏色不同，常使菌落正反面呈不同顏色。絲狀菌是以菌絲頂端延長的方式進行生長的，越近菌落中心的氣生菌絲其生理年齡越大，也越早分化出子實器官或分生孢子，從而反映在菌落顏色上的變化，一般情況下，菌落中心的顏色常比邊緣深。有些菌的氣生菌絲還會分泌出水溶性色素并擴散到培養(yǎng)基中而使培養(yǎng)基變色。有些菌的氣生菌絲在

5、生長后期還會分泌滴，因此，在菌落上出現(xiàn)“水珠”。放線菌：放線菌屬原核生物，其菌絲纖細，生長較慢，氣生菌絲生長后期逐漸分化出孢子絲，形成大量的孢子，因此菌落較小，表面呈緊密的絨狀或粉狀等特征。由于菌絲伸入培養(yǎng)基中常使菌落邊緣的培養(yǎng)基呈凹狀。不少放線菌還產生特殊的土腥味或冰片味。霉菌：霉菌屬真核生物，它們的菌絲一般較放線菌粗（幾倍）且長（幾倍至幾十倍），其生長速度比放線菌快，故菌落大而疏松或大而緊密。由于氣生菌絲會形成一定形狀、構造和色澤的子實器官，所以菌落表面往往有肉眼可見的構造和顏色。根據(jù)上述特征可將四大類微生物菌落的識別要點歸納如下：三、實驗材料和用具已知菌落：細菌類（大腸桿菌、金黃色葡萄球

6、菌、枯草桿菌）  酵母（釀酒酵母）  放線菌類（細黃鏈霉菌）  霉菌類（產黃青霉、黑曲霉、黑根霉）未知菌落 試劑：培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基和高氏1 號培養(yǎng)基）四、操作步驟1制備已知菌的單菌落通過平板劃線法獲得細菌、酵母菌和放線菌的單菌落。用三點接種法獲得霉菌的單菌落。細菌平板放37恒溫培養(yǎng)2448小時。酵母菌平板置28培養(yǎng)23天。霉菌和放線菌置28培養(yǎng)57天。待長成菌落后，觀察并記錄四大類微生物菌落的形態(tài)特征。       2制備未知菌的菌落特征   

7、0; 從環(huán)境檢測所獲得的平板，挑取若干個菌落，逐個編號，作為識別四大類用的未知菌落。3辨別未知菌落1.  區(qū)分“干”或“濕”：根據(jù)菌落是“干”或“濕”及菌落正反面顏色、中央與邊緣顏色是否一致，首先判斷某未知菌落是屬于細菌、酵母菌類，還是屬于放線菌、霉菌類。 2.  細分菌落：根據(jù)上述要點進一步區(qū)分未知菌落是屬于四大類中的哪一類菌，并將判斷結果填入下表中。 3. 結果記錄 （一）菌落形態(tài)特征的描述1細菌菌落的描述菌落表面形態(tài)：有光滑、皺褶、放射狀、根狀等菌落邊緣形態(tài)：有整齊、波狀、絲狀、鋸齒狀、裂葉狀等形態(tài)菌落隆起形態(tài)：有扁平、隆起、草帽狀、膠狀等透明度：可分為秀明、半透明、

8、不透明等2酵母菌菌落形態(tài)的描述：可參照細菌3放線菌和霉菌菌落的描述：菌落表面的形態(tài)：粗糙、同心圓、輻射狀溝紋、粉狀、絨毛狀或皮革狀等。菌落顏色：菌落正面顏色（包括氣生菌絲或孢子顏色）；菌落反面顏色（指營養(yǎng)菌絲顏色）；有否水溶性色素？（色素會滲入培養(yǎng)基中，使菌落周圍的培養(yǎng)基改變顏色）。（二）將已知菌落形態(tài)的觀察和描述記錄于表1中（三）將對未知菌落的辨別結果記錄在表2中六、注意事項1每張實驗臺上各有一套已知菌落和未知菌落，觀察時請勿隨意搬動，以免搞混菌號。2觀察和判斷菌落大小時，要注意單菌落在平板上分布疏密的情況，一般菌落密集處勤菌落小，分布稀少的部位菌落大。 表1  

9、;                     已知菌落形態(tài)的觀察記錄 大類 菌    名辨 別 要 點       菌    落    描    述   濕  

10、干表面邊緣隆起形狀    顏     色透明度 厚薄 大小 松密 大小 正面 反面 水溶性色素 細菌大腸 桿菌            金黃色葡萄球       菌            枯草  桿菌    &#

11、160;       酵母菌酵酒  酵母            粘紅  酵母            熱帶  假絲 酵     母          &

12、#160; 放線菌細 黃 鏈 霉    菌            霉菌青    霉            曲    霉            根  &

13、#160; 霉                     表2                   未知菌落的觀察記錄菌落號    濕    干  &#

14、160;  菌    落    描    述 判斷結 果 厚或薄 大或小 松或密 大或小 表面邊緣隆起形狀   顏   色透明度 正面 反面 水溶性色素                         

15、0;                                                 

16、0;                                                    &

17、#160;                    分離的基本方法 微生物分離的方法很多，主要有連續(xù)稀釋分離法，平板劃線分離法和單細胞分離法等方法。其中，單細胞分離法需要貴重精密儀器，中學無法開展，而連續(xù)稀釋分離法和平板劃線分離法卻簡便易行，中學完全具備開展條件?，F(xiàn)將這兩種方法說明如下。 1.連續(xù)稀釋分離法 取1克土樣，在火焰旁放入裝有99毫克無菌水的錐形瓶內，充分搖勻，將菌分散。 用移液管吸取上述菌懸液1毫升，放入盛

18、有9毫升無菌水的試管中，并進一步稀釋成1000倍，即10-3的菌懸液。按10倍稀釋法連續(xù)稀釋到10-8（每1次稀釋，都須更換移液管）。 取3支1毫升移液管分別從10-8、10-7、10-6菌懸液中吸取1毫升菌懸液，分別注入編號10-8、10-7和10-6的培養(yǎng)皿內，同一稀釋液重復做3個培養(yǎng)皿。 將溫度為4550的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（其成分和配制方法見本章第三節(jié)）倒入上述各培養(yǎng)皿內，輕輕旋轉使菌懸液充分混合均勻，凝固后，將培養(yǎng)皿倒扣放置在溫暖處（28左右），每天觀察培養(yǎng)基表面有無微生物菌落。 經過一定時間培養(yǎng)后，培養(yǎng)基上長出菌落，根據(jù)菌落特征，初步判斷屬于何種類型的微生物，并在顯微鏡下檢查，若菌體形

19、態(tài)一致，則可認為是初步分離到純菌種。 將分離培養(yǎng)所得的純菌種，從平板培養(yǎng)基轉移到試管斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)。 2.平板劃線分離法 取1克土樣，在火焰旁加進裝有99毫升無菌水的錐形瓶中，堵塞棉塞，制成菌懸液待用。 取一培養(yǎng)皿置于實驗臺上，左手將培養(yǎng)皿打開稍許，向培養(yǎng)皿內注入熔化的營養(yǎng)固體培養(yǎng)基1012毫升，輕輕轉動培養(yǎng)皿，使其中的培養(yǎng)基分布均勻，平放桌上，使其凝成平板。然后在皿底用蠟筆劃分A、B、C、D幾個區(qū)。應連續(xù)制作幾份平板培養(yǎng)基。 將培養(yǎng)皿底部用姆指和無名指固定成傾斜狀態(tài)，在火焰旁將培養(yǎng)皿稍微打開。在此同時，用環(huán)狀接種針在火焰旁取少許菌懸液，迅速送入培養(yǎng)皿內，在平板培養(yǎng)基的一邊，作第1次平行劃線

20、 67條，轉動培養(yǎng)皿約70°角，用燒過冷卻的接種針，通過第1次劃線部分作第2次平行劃線，然后再用同樣方法，作第3次平行劃線。劃線時，應使平板培養(yǎng)基表面向下，以免空氣中雜菌落入。接種針應與平板表面成30°角左右。不要使接種針碰到培養(yǎng)皿邊緣，也不要將培養(yǎng)基劃破。 將劃線后的培養(yǎng)皿倒放在28左右的溫暖處進行培養(yǎng)，待長出菌落后，鑒定微生物類群，并根據(jù)鏡檢結果，判斷是否已分離到了純菌種。如果菌種很純，則可轉移到斜面培養(yǎng)基上進一步培養(yǎng)。 連續(xù)稀釋分離法和平板劃線法，均須在無菌室或接種箱內進行。 二、各類微生物的分離 1.從土壤中分離好氣性及兼性厭氣細菌 其分離方法見本節(jié)“分離的基本方法

21、” 2.從土壤中分離放線菌 制作高氏一號培養(yǎng)基，趁熱注入培養(yǎng)皿中，凝成平板，待用。 稱取土壤10克，放入裝有100毫升無菌水的錐形瓶中，并加入10%酚10滴，以抑制細菌生長。振蕩10分鐘，制成10-1菌懸液。按照連續(xù)稀釋分離法，進一步制成10-3菌懸液。 用移液管吸取0.1毫升10-3菌懸液，注入平板培養(yǎng)基上，用無菌玻璃刮刀將菌懸液均勻涂抹在整個培養(yǎng)基上。然后將培養(yǎng)皿倒置于2530溫箱中，培養(yǎng)710天，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)微生物菌落。如果菌落的硬度較大，干燥致密，且與基質緊密結合，不易被針挑起，這就是放線菌菌落。 挑取放線菌菌落，接種于斜面培養(yǎng)基上。 3.從土壤中分離霉菌 制作豆芽汗葡萄糖培養(yǎng)基，并

22、添加80%乳酸數(shù)滴，以抑制細菌生長。將培養(yǎng)皿中，凝成平板，待用。 稱取10克土壤，按上述分離放線菌的方法制成10-4或10-5的菌懸液。 取0.1毫升菌懸液注入培養(yǎng)皿內培養(yǎng)基上，用玻璃刮刀涂抹均勻。然后將培養(yǎng)皿倒置于2530溫箱內培養(yǎng)34天。培養(yǎng)基上會出現(xiàn)微生物菌落。霉菌菌落常長成絨狀、棉絮狀或蜘蛛網狀，可根據(jù)這一特征尋找霉菌菌落。 挑取培養(yǎng)皿內的霉菌菌落接種于斜面培養(yǎng)基上。 4.從飲水中分離大腸桿菌 制作伊紅美藍培養(yǎng)基，趁熱注入培養(yǎng)皿中，凝成平板，待用。 用滅過菌的錐形瓶盛取河水或溝水，按1：10稀釋。 取0.1毫升稀釋液接種于伊紅美藍培養(yǎng)基上。用平板劃線分離法進行分離。 將劃線后的培養(yǎng)皿倒

23、置37溫箱中培養(yǎng)1824小時。培養(yǎng)基中會出現(xiàn)大腸桿菌菌落，菌落中心呈暗藍黑色，發(fā)金屬光澤。 將菌落接種于斜面培養(yǎng)基上（由營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基制成）。一、平板劃線分離法 由接種環(huán)以菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。 二、稀釋倒平板法 先將待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋（如 1 10 、 1 100 、 1 1000 、 1 10000 ），然后分別取不同稀釋液少許，與已溶化并冷卻至 45 左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，搖勻后，傾

24、入滅過菌的培養(yǎng)皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養(yǎng)一定時間即可出出菌落。如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中就可出現(xiàn)分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨后挑取該單個菌落，或重復以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)。 稀釋涂布法：優(yōu)點：可以計數(shù)，可以觀察菌落特征。缺點：吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延。一般用于平板培養(yǎng)基的回收率計數(shù)！稀釋混合平板法：優(yōu)點：可以計數(shù)，吸收量為1ml，較方便。優(yōu)點：不能觀察菌落特征。一般用于菌落總數(shù)的計數(shù)！平板劃線法：優(yōu)點：可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離！缺點：不能計數(shù)一般用于從菌種的分純！ 

25、涂布法使用較多，但有時不均勻 稀釋倒平板法操作相對麻煩，不適合好氧和對熱敏感的細菌培養(yǎng) 應用范圍：涂布法適用于  好氧菌          稀釋倒平板法適用于厭氧，兼性厭氧菌種的分離 取lmL鹵汁以10倍遞增稀釋方法（一份酸奶，九份無菌水，再取一份第一只管中溶液，加九份無菌水，依次類推），將其稀釋至1/1010的-10次冪（我打不上去），然后從不同濃度稀 釋液中分別取lmL傾注在平皿中，再倒入培養(yǎng)基相混合，待培養(yǎng)基凝固后倒置于30C恒溫下 培養(yǎng)48h。挑取長勢良好的單個茵落劃線分純，直至純化(茵

26、落單個大小一致，革蘭氏染色鏡 檢，茵體一致)。結果分離得到3株不同菌株，分別編號為菌株1、菌株2、菌株3。再分別轉移 到試管斜面上進行保存。 分離用培養(yǎng)基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，蒸餾水1 000 mL，瓊脂20g，pH7072 ；保存用斜面培養(yǎng)基：酵母膏1 ，碳酸鈣2 ，葡萄糖1 ，瓊脂2 ，pH 70。 培養(yǎng)條件 將分離出的菌株1、菌株2、菌株3分別接種在上述4種不同的培養(yǎng)基上， 在30?！?恒溫條件下培養(yǎng)48h后觀察并測定其培養(yǎng)結果。 測定方法 菌落總數(shù)采用逐級稀釋法來計數(shù)；pH值用pHS一2C酸度計測定；乳酸定性 及含量測定依據(jù)食品檢驗技術 1I21乳酸菌的分離與篩選的試

27、驗程序 自然發(fā)酵酸奶-稀釋-培養(yǎng)-挑起單菌落染色、鏡檢一挑 選革蘭氏陽性球菌單菌落一號培養(yǎng)基一挑選溶鈣圈大的球菌反復在號培養(yǎng)基上幾次純化篩選一單菌落優(yōu) 良菌株一試管穿刺低溫保存。 12 12 乳酸菌的鑒定 用光學顯微鏡、放大鏡進行乳酸菌的形態(tài)特征鑒定。生理生化特征鑒定：產乳 酸定性試驗乳酸紙層析法0- 、過氧化氫酶(接觸酶)反應、明膠水解反應 、硫化氫反應 、乳酸菌 發(fā)酵營養(yǎng)型試驗0 、耐鹽、酸、溫度試驗。 12I3 乳酸菌的保存 采用定期移植低溫保藏法。培養(yǎng)基配方：葡萄糖1 、蛋白胨0 2 、 l(l2PQ|02、瓊脂20、pH值7 0，分裝試管，121。c滅菌30min。將使用對數(shù)生長期后

28、期的細胞進行穿刺 培養(yǎng)，然后密封存于冰箱玲藏室內(5qc左右)，2個月移植1次。 122 分離乳酸菌的生理特點試驗 1 2 21 最適生長溫度的測定OD值以同溫下不接種培養(yǎng)基作對照，定期取出接種培養(yǎng)基在721分光光度 計上，用最大吸收光波長 =6001RIifl測定。 1222 生長周期的測定oD值(方法同上)；pH值：PHB一4pH計；可滴定酸(以乳酸計)：吸取ImL菌液 加入91L蒸餾水，加入12滴酚酞，用01NNaOH滴定。 12 23 最適pH值的測試、最適鹽濃度的測試。 供試樣品及培養(yǎng)基 分離用樣品：酸奶、酸奶及西紅柿均為市售 分離用培養(yǎng)基：BCP培養(yǎng)基：酵母膏2 5g，蛋白胨5g，

29、葡萄糖5g，溴甲酚紫0 04g，瓊脂15g， 蒸槽水lO00ml，pH7 0；MRS培養(yǎng)基見文獻 。 菌種保藏用培養(yǎng)基：脫脂乳培養(yǎng)基：新鮮牛乳離心去掉上層乳脂，下層奶液分裝試管，105 滅菌20mln。 菌利 鑒定用培養(yǎng)基見文獻 6。 1 2 方法 1 2 1 乳酸菌的分離純化 取泡菜汁、酸奶、西紅柿表面洗液進行梯度稀釋，分別用傾注法、涂布 法和劃線法在BCP和MRS培養(yǎng)基平板上進行菌種分離。挑取在BCP平板上有透明目的菌落，在 MRS平扳上有溶鈣圈的菌落，反復純化至純種，挑菌至脫脂牛奶試管中保存 12 2 乳酸菌復篩對初篩菌株進行革蘭氏染色，保留革蘭氏陽性菌株并對其所產乳酸能力進 行定性、定

30、量分析，篩選出產酸高的菌株保存，再把產酸高的菌株經蘿l、汁發(fā)酵 】，進一步選擇產 酸高、_l】味純正的菌株保存鑒定 1 2 3 乳酸定性測定果用紙層析法。溶劑系統(tǒng)為乙醇：濃氨水：水=80：5：15，顯色劑為0 04 的溴甲酚紫酒精溶液。層析時將乳酸、檸檬酸配成1 的標準溶液，兩種標準溶液 及乳酸發(fā)酵液 均點樣3 上行層析，顯色與標準樣比較 12 4 乳酸的定量測定采用氣相色譜法，利用芐酯化法制備乳酸衍生物，將待測乳酸菌株在產 酸培養(yǎng)基內37"C培養(yǎng)3d，離心。取上清液剃備衍生物，氣相色譜分析含量。氣相色譜工作條件為： EGS色譜柱，柱溫160'C，氣化溫度180'17

31、，檢測器溫度l70"C，載氣為N，。 12 5 菌種鑒定根據(jù)簡明第八版伯杰細菌鑒定手冊 和一般細菌常用鑒定手冊6 對復篩 出的菌株的形態(tài)、生理生化、碳源利用等方面進行系統(tǒng)鑒定，并提取乳酸菌株DNA，采用熔鏈溫度 .、固體培養(yǎng)基分離1、稀釋倒平板特點：菌落分離較為均勻，進行微生物計數(shù)結果相對準確。但操作相對麻煩，熱敏感菌有時易被燙死，而嚴格好氧菌也可能因被固定在培養(yǎng)基中生長受到影響。2、涂布平板法特點：操作相對簡單，是較常使用的常規(guī)方法。但有時會因涂布不均勻使某些部位的菌落不能分開，進行微生物計數(shù)時需對稀釋和涂布過程的操作特別注意，否則不易得到準確的結果。3、平板劃線法特點：操作簡單，

32、多用于對已有純培養(yǎng)的確認和再次分離。應用：這三種方法可用于所有能在固體培養(yǎng)基表面形成菌落的微生物的純培養(yǎng)分離。并且，通過選用適當?shù)倪x擇平板及培養(yǎng)條件，可直接分離各種具有特定生理特征的微生物。和厭氧罐或厭氧手套箱技術結合，這3種方法也可用于獲得各種厭氧菌的純培養(yǎng)。4、稀釋搖管法特點：稀釋倒平板法的一種變通形式，但由于菌落形成在瓊脂柱的中間，觀察和挑取都相對困難。應用：在缺乏專業(yè)的厭氧操作設備的情況下對嚴格厭氧菌進行分離和觀察。二、液體培養(yǎng)基分離1、稀釋法特點：工作量大，是否獲得純培養(yǎng)需依靠統(tǒng)計學的推測。應用：不能或不易在固體培養(yǎng)基上生長的微生物進行純培養(yǎng)分離或數(shù)量統(tǒng)計。2、富集培養(yǎng)特點：一般不能

33、直接獲得微生物的純培養(yǎng)，在通過富集培養(yǎng)使原本在自然環(huán)境中占少數(shù)的微生物的數(shù)量大大提高后，需再通過平板法進行相應微生物純培養(yǎng)的分離和檢測。應用：（1）根據(jù)某種微生物的特殊生長要求，按照意愿從自然界中對這種微生物進行有針對性的有效分離；（2）分離培養(yǎng)出由科學家設計的特定環(huán)境中能生長的微生物，盡管我們并不知道什么微生物能在這種特定的環(huán)境中生長。三、顯微操作單細胞（孢子）挑取特點：分離過程直觀，可靠，但對儀器和操作技術要求較高，多限于高度專業(yè)化的科學研究。而挑取的微生物單細胞或孢子需經固體或液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后才能獲得其純培養(yǎng)物。應用：從樣品中直接分離所需的微生物細胞或孢子，獲得其純培養(yǎng)。分離純化米曲霉米

34、曲霉菌種里感染了黃曲霉,怎么將米曲霉分離純化出來?具體方法是什么?怎么檢測純化完全了? 如果你愿意將你的答案告訴我,請你詳細點,謝謝！實在不行只有從頭開始了。從劃線培養(yǎng)開始吧。 單菌落的挑取在10倍系列稀釋的平板中進行，選取菌落數(shù)在30300之間的平板，劃線純化方法如下： 對低于30個左右菌落的平板，每個菌落均挑取，劃線純化。 對50個左右菌落的平板，挑取1/2菌落劃線純化。 對100個左右菌落的平板，挑取特殊的菌落純化。 反復劃線純化，至菌落形態(tài)和菌株形態(tài)分別完全一致，可認為是純菌株。 優(yōu)勢菌的挑取在浸海2h14d掛片系列稀釋培養(yǎng)平板中進行，挑取12株優(yōu)勢菌落形態(tài)的菌株于2216E平板上劃線

35、純化。 在純化的菌株中加入適量甘油，保存于-80超低溫冰箱中和-23冰箱中。 菌株鑒定 細菌鑒定按照一般細菌常用鑒定方法進行，將挑取純化的菌株鑒定至屬。鑒定試驗包括形態(tài)觀察、革蘭氏染色、鞭毛染色、氧化酶反應、過氧化氫酶反應、運動性試驗、葡萄糖氧化發(fā)酵試驗、硫化氫試驗、0/129試驗、吲哚產生試驗、色素產生試驗及發(fā)光現(xiàn)象觀察等項目，參照J.D.Oliver海洋細菌鑒定表，將附著細菌分類至屬。 采用硫酸銨沉降法分離純化米曲霉M3所產中性蛋白酶,并對其酶學性質進行了研究.結果表明:用硫酸銨沉降法所得粗酶粉的酶活力高達159781.1u/g;該酶的最適反應溫度為50,最適作用pH值為7.5;該酶在30

36、40時具有良好的熱穩(wěn)定性,在pH值6.57.5的條件下酶是穩(wěn)定的;NH1 4,K1 對該蛋白酶有明顯的激活作用,Fe3 則對其表現(xiàn)出強烈的抑制作用. 菌種的分離 取lmL鹵汁以10倍遞增稀釋方法（一份酸奶，九份無菌水，再取一份第一只管中溶液，加九份無菌水，依次類推），將其稀釋至1/1010的-10次冪（我打不上去），然后從不同濃度稀 釋液中分別取lmL傾注在平皿中，再倒入培養(yǎng)基相混合，待培養(yǎng)基凝固后倒置于30C恒溫下 培養(yǎng)48h。挑取長勢良好的單個茵落劃線分純，直至純化(茵落單個大小一致，革蘭氏染色鏡 檢，茵體一致)。結果分離得到3株不同菌株，分別編號為菌株1、菌株2、菌株3。再分別轉移 到試

37、管斜面上進行保存。 分離用培養(yǎng)基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，蒸餾水1 000 mL，瓊脂20g，pH7072 ；保存用斜面培養(yǎng)基：酵母膏1 ，碳酸鈣2 ，葡萄糖1 ，瓊脂2 ，pH 70。 培養(yǎng)條件 將分離出的菌株1、菌株2、菌株3分別接種在上述4種不同的培養(yǎng)基上， 在30?！?恒溫條件下培養(yǎng)48h后觀察并測定其培養(yǎng)結果。 測定方法 菌落總數(shù)采用逐級稀釋法來計數(shù)；pH值用pHS一2C酸度計測定；乳酸定性 及含量測定依據(jù)食品檢驗技術 1I21乳酸菌的分離與篩選的試驗程序 自然發(fā)酵酸奶-稀釋-培養(yǎng)-挑起單菌落染色、鏡檢一挑 選革蘭氏陽性球菌單菌落一號培養(yǎng)基一挑選溶鈣圈大的球菌反復在號培養(yǎng)基上幾次純化篩選一單菌落優(yōu) 良